金线莲细菌性软腐病菌的鉴定及生物学特性

细菌性软腐病是金线莲栽培中发生的主要病害之一,其病原菌通常为软腐欧文氏菌黑茎病变种Eruinia carotovora var.atroseptica。本研究从浙江金华金线莲软腐病样品中分离到菌株J-4,致病性测定结果表明,该菌株侵染引起的金线莲软腐病与田间自然发病症状相同。利用细菌通用引物27F和1492R进行的PCR扩增实验发现,J-4的16S rDNA序列与已报道的Dickeya fangzhongdai JS5 T(NR_151914)的相应序列相似性高达99%以上;该序列系统发育关系分析显示,J-4与已报道的D.fangzhongdai菌株聚焦。以上结果表明,D.fangzhongdai J-4是引起金华地区金线莲软腐病的病原菌。该菌株具备在39℃以及含有7%NaCl培养基中生长的能力,能液化明胶,不能降解淀粉;可以利用蔗糖、D-葡萄糖、D-甘露糖,不能利用D-麦芽糖、古老糖、D-海藻糖、α-葡萄糖等。金线莲软腐病病原的鉴定及研究为该病害的有效防治提供了参考。

短柄樱桃干腐病病原菌的鉴定及其生物学特性

为了明确短柄樱桃干腐病的病源,采用组织分离法和单孢分离法分离纯化了病原菌,依据柯赫法则、形态特征及核糖体基因内转录间隔区(r DNA-ITS)序列对其进行了鉴定,同时检测了其部分生物学特性.实验结果表明:引起短柄樱桃干腐病的病原菌为金黄壳囊孢菌(Cytospora chrysosperma;KR260904);该病菌菌落生长和孢子萌发的最适p H为9,最佳光照条件为12 h黑暗/12 h光照,最适温度为25℃;在供试的10种碳、氮源中,乳糖和蛋白胨利于该菌落的生长,葡萄糖和酵母有利于其孢子的萌发.

植物生长素影响单性结实的研究进展

主要阐述了植物单性结实的研究历史和现状、单性结实形成的分子机制和相关基因的分离克隆及鉴定方法的一些最新研究进展;从植物生长素响应途径调节和其他相关基因调节两方面,探讨了植物生长素对单性结实果实发育的具体影响,并对未来这一领域的研究方向作了进一步的展望.

细菌性条斑病菌JH01诱导水稻抗病均一化差减文库的构建

[目的]构建细菌性条班病菌诱导下的水稻抗病均一化差减eDNA文库，对获得的差异表达ESTs进行生物信息学及抗病相关基因的表达分析。[方法]以水稻IR26（Tester）和两优培九（Driver）幼苗5～6叶期叶片为材料，采用双链特异性核酸酶（DSN）介导的均一化消减杂交技术，构建细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻抗病相关基因差减eDNA文库，以pLB-F和pLB-R为引物，通过菌液PCR扩增对差减文库的质量进行检测。【结果】eDNA文库的插入片段分布在0．5～2．0kb，平均大小约为1．0kb．重组率达95％。序列测定分析发现，随机挑取的504个克隆中有98条差异表达基因；经BLAST比对和GO注释发现，59条序列具有同源基因，分别参与信号转导、能量代谢、过敏性坏死反应、防卫反应等；另外39条序列无相似基因，有待进一步研究。通过实时荧光定量PCR发现，从该文库中分离得到的OsNDPK4参与细菌性条斑病菌JH01诱导的水稻防卫反应。[结论]水稻受细菌性条斑病菌侵染的eDNA文库质量较好，为研究条斑病菌致病性因子与水稻互作机制奠定基础.

茶花和佛手胶孢炭疽菌对不同类型杀菌剂敏感性研究

为检测胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioide)对保护型、内吸型和复合型3种不同类型杀菌剂的敏感性,在实验室条件下,采用菌丝生长速率法测定了来源于四季茶花和佛手的炭疽病原菌对6种杀菌剂的敏感性.结果表明:炭疽病菌对复合型杀菌剂敏感性最高,其次是保护型,最低是内吸型;2株炭疽病原菌对复合型杀菌剂30%苯甲丙环唑敏感性最强,EC50分别为2.287 8 mg/L和3.075 7 mg/L.综合分析认为,复合型杀菌剂30%苯甲丙环唑和80%多福锌可作为今后防治茶花和佛手炭疽病的有效杀菌剂.

浙江1株水稻细菌性条斑病菌株的分离鉴定

细菌性条斑病(简称细条病)是水稻的重要病害之一,随着气候的变暖,某些水稻品种有逐年发生加重的趋势,对产量影响较大。2013年浙江省金华市部分水稻种植区域发生细条病,发病严重的田块减产30%以上。采用组织分离法从发病水稻叶片分离获得6株细菌菌株,选择典型菌株JH01回接水稻幼苗,进行柯赫法则验证。接种后发病症状与自然发病症状一致,并重新分离得到此菌株,证明菌株JH01为水稻细条病的致病菌。通过形态学观察、常规生理生化指标测定、16S r DNA序列测定和同源性分析,鉴定菌株JH01为稻黄单胞菌水稻致病变种(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)。

影响茶花炭疽病孢子萌发与附着胞形成的因子

采用载玻片检测法,对碳氮源、温度、pH和光照等因子对孢子萌发与附着胞形成的影响进行研究。结果表明,供试碳氮源中,茶花炭疽菌孢子萌发的最佳碳源为葡萄糖、最佳氮源为酵母提取物;碳源对附着胞形成的影响不显著,而所有氮源均抑制附着胞的形成。孢子萌发和附着胞形成的最适温度同为20℃;最适pH为中性偏酸。孢子萌发的最佳光照条件为先进行12 h光照培养、再进行12 h黑暗处理;自然光条件下附着胞形成率最高。可见不同外界因子对茶花炭疽病病原菌孢子萌发和附着胞形成的影响不同,对该病害发病机理与侵染机制的研究,需要进一步结合致病性试验进行深入研究。

蓝莓枝干溃疡病病原鉴定及品种抗病性研究

为明确引起蓝莓枝干溃疡病的病原菌,为该病害的田间诊断及综合防治提供参考,采用组织分离法和单孢分离法对引起蓝莓枝干溃疡病的病原菌进行了分离纯化,利用柯赫氏法则、菌落形态特征及核糖体DNA内转录间隔区序列(rDNA-ITS)对菌株进行了分类鉴定,采用活体接种病原菌和病斑长度测量的方法检测了5种蓝莓品种的抗病性。从病枝分离得到疑似病原菌菌株15株(JA1～JA8、JB1～JB7),菌株JA4和JB2均可导致蓝莓枝干溃疡病。rDNA-ITS序列分析和菌落形态学鉴定发现,JA4为拟茎点霉菌(Phomopsis sp.),JB2为葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)。接种试验表明,布里吉塔、蓝丰和蓝美人对枝干溃疡病的抗性没有显著差异。拟茎点霉菌(Phomopsis sp.)和葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)均可以引起蓝莓枝干溃疡病,拟茎点霉菌在春天条件适宜情况下可由花芽侵入,而葡萄座腔菌必须从伤口侵染,两种病原菌也可以产生复合侵染。蓝莓品种布里吉塔、蓝美人和蓝丰等品种抗性强;夏普蓝易受病原菌侵染,抗病性差。

蓝莓枝枯病病原菌分离鉴定及孢子萌发条件研究

2016年在浙江省蓝莓种植基地发现原因不明的幼苗木整株枯死现象,为明确其致病菌,通过组织分离法和单孢培养法进行菌株的分离纯化,通过科赫氏法则进行分离菌的致病性检测,运用常规形态学和rDNA-ITS序列分析相结合的方法进行病原菌分类鉴定,同时使用载玻片法进行病原菌孢子萌发条件研究。结果表明:蓝莓整株植株枯死是由枝枯病所致,纯化菌株ZA1为该病病原真菌。其菌落圆形,白色;分生孢子呈纺锤形,被4个真隔膜分成5个细胞,中间细胞呈褐色,两端细胞无色。结合r DNA-ITS 序列分析,菌株ZA1被鉴定为棒状拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis clavispora)。菌株ZA1孢子萌发的最适温度为30℃;对悬浮液酸碱度的适应性较广,p H 3~12时孢子均可萌发;光照和复合碳源均有助于孢子萌发。

珍稀药用植物石橄榄的资源调查及栽培技术

石橄榄为兰科石仙桃属植物,具有良好的食用及药用价值。对石橄榄资源进行调查并进行栽培技术的研究,以期为石橄榄的人工栽培提供一定的技术参考。

一株蓝莓灰霉病病原菌的分离与鉴定

灰霉病是近几年危害浙江省蓝莓产业的严重病害之一,分离和鉴定该病病原菌可以掌握其生物学特征和发病机理,为病害的综合防治提供参考.通过形态观察、核糖体DNA内转录间隔区(rDNA-ITS)序列分析和柯赫氏法则验证等方法,对引起蓝莓品种‘夏普蓝’灰霉病的病原菌进行了鉴定.结果表明:该病原菌为葡萄孢菌属的灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea);对‘夏普蓝’进行病原菌回接后,叶片和果实分别出现褐色病斑和软化腐烂等症状,与田间自然发病一致;将该病原菌在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上进行培养,菌落初期呈现白色,后转为灰褐色.分生孢子为单孢,卵圆形或椭圆形,无色或淡褐色,大小为(10～15)μm×(6～9)μm;将分离菌株X1-1的rDNA-ITS序列(NCBI序列号:KT343755)与GenBank中已经报道的灰葡萄孢菌进行序列比对,发现二者相似度达100%.

浙江地区金线莲种质资源调查与产业保护现状

为更好地保护与开发利用浙江地域特色物种,通过对福建、浙江等省市金线莲生产企业走访和浙江地区金线莲资源野外调研,收集不同资源组培无菌苗16份,在温州、金华、杭州、宁波、丽水等地发现浙江金线莲野生种源12份。浙江省药用野生金线莲共有3种,主要分布海拔为200~1200 m,团粒结构好,速效磷、速效钾、水解性氮含量高的地域。查阅相关文献,开展金线莲本草考证和生态生物学基础研究,为更好地服务地方经济和保护利用浙江省中药材金线莲资源。

名贵中药材金线莲人工栽培关键技术探讨

从介绍金线莲多重功能价值出发,论述了其野生资源概况及市场需求,指出其科技支撑基础薄弱。从通风、控温、控湿措施、强化病虫害绿色防控等方面阐述了金线莲规模人工栽培关键技术。