时间分辨荧光免疫分析法检测血清HBsAg的临床价值——附328份样本检测结果

目的：了解时间分辨荧光免疫分析法（time-resolved fluoroimmunoassay，TR-FIA）检测血清HBsAg的临床价值。方法：比较TR-FIA和微粒子酶免疫分析法（microparicle enzyme immunoassay，MEIA）对血清标本HBsAg的检测情况，结果：328份血清标本中，MEIA检出291例HBsAg阳性，阳性率为88．7％（291／328）；TR-FIA检出289例HBsAg阳性，阳性率为88．1％（289／328），两种方法HBsAg阳性检出率比较差异无统计学意义。以MEIA检测结果为标准，TR-FIA的敏感度为99％，特异度为100％，准确度为99％，假阴性率为0．7％。MEIA和TR-FIA分别在1：8092-1：64和1：8092-1：4稀释范围内呈良好的线性关系。定值准确度试验和可靠性评价显示TR-FIA定量准确，重复性好，结果可靠。结论：TR-FIA与MEIA定量检测HBsAg的敏感度、特异度、准确度和线性范围相当，且定值准确性高，具有重复性好、结果可靠的优点。随着仪器及试剂的国产化，检测费用的降低，TR-FIA在HBV标志物的检测中有着广泛的应用前景。

乙型肝炎病毒前S_2抗原和抗前S_2抗体的检测及临床意义

本文对141例急、慢性 HBV 感染者进行了血清前 S_2和抗前 S_2测定。急性乙肝、慢迁肝、慢活肝、无症状 HBV 携带者和肝炎后肝硬化患者的前 S_2阳性率分别为52. 9％,71. 0％,71. 4％,58. 8％和16. 7％。前 S_2在血清学表达上与 HBV-DNA,HBcAg、HBeAg 和抗 HBc-IgM 等病毒复制标志有明显相伴随关系(P<0. 005) 。抗前 S_2可出现于少数急性乙肝和从急性乙肝进展为慢性乙肝的患者,也可见于慢活肝和肝炎后肝硬化患者,且与血清 HBV-DNA 的存在与否似无明确关系。

甘草甜素对HepG2.2.15细胞株HBV感染的影响

目的探讨甘草甜素(GL)对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg、HBeAg、HBV DNA的作用,及对细胞存活率的影响。方法实时荧光定量PCR检测HBV DNA的表达,ELASA检测HBV所分泌抗原,MTT检测细胞的增殖活性,计算细胞存活率。结果给药后各组HBsAg分泌结果显示总体均数间差异显著(P=0.000),GL各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),抑制作用存在剂量依赖关系;而对HBeAg水平的影响因剂量不同而表现为升高和降低两种趋势,除50μg/mL组外,其余各组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但800μg/mL组HBeAg分泌增加,400μg/mL以下组为HBeAg降低;HBV DNA的表达显示GL各组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但400μg/mL以下组为HBV DNA降低,800μg/mL组出现HBV DNA复制增强;MTT实验显示,200μg/mL以下3个剂量组均可促进细胞增殖(P<0.01),400、800μg/mL2组均显著抑制细胞增殖(P<0.01);MTT分别与HBeAg和HBV DNA水平呈显著负相关(P<0.01),但与HBsAg呈显著正相关(r=0.869,P=0.000)。结论GL对HepG2.2.15细胞株上清中的HBeAg和HBV DNA水平可能具有双向作用,而对HBsAg具有剂量依赖的抑制作用,提示GL的使用应注意选择适应证及合适的剂量。

广州地区散发性慢性非甲乙丙丁戊型肝炎中庚型肝炎病毒感染状况

８３例散发性慢性非甲乙丙丁戊型肝炎患者，以逆转录聚合酶链反应检出庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ２１例（２５．３％），证实广州地区存在有慢性ＨＧＶ感染，ＨＧＶ感染是导致慢性病毒性肝炎的病因之一。本研究证实ＨＧＶ感染可经非输血途径传播。ＨＧＶ感染后所致的肝病，临床表现呈现多样性。８３例散发性慢性非甲乙丙丁戊型肝炎患者中，尚有６２例（７４．７％〕ＨＧＶＲＮＡ阴性，提示可能还存在其他新型肝炎病毒。

临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体检测的比较

目的比较分析临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体(抗HAV-IgM和抗HEV-IgM)检测状况。方法收集非流行年份成人临床检验样本32600份。采用酶免疫法(EIA)捕捉抗体法检测抗-HAVIgM,EIA间接法检测抗-HEVIgM。结果32600份中送检抗-HAVIgM者为1785份,阳性34例,阳性率为1.9%,送检抗-HEVIgM者1820份,阳性88例,阳性率为4.84%。比较分析显示,抗-HEVIgM阳性率相对较高(χ2=23.668,P<0.01),且具有季节上相对分散,年龄上以30岁以上为主,性别上男女相差相对较小等特点。结论非流行年份成人临床检验样本中,抗HAV-IgM和抗HEV-IgM检出率相对较低,但相对甲型肝炎来说,戊型肝炎更值得广泛注意。

乙型肝炎病毒对HepG2细胞表达TLR3的影响

目的乙肝病毒全基因组体外扩增,构建质粒并测序,酶切后瞬时转染HepG2细胞,观察对HBV抗原分泌,病原识别受体Toll样受体3(TLR3)的表达及细胞增殖的影响。方法长片段PCR法扩增HBVDNA全长,构建pBlueScript-HBV质粒并转化宿主菌,摇菌后提取质粒经测序,用SapⅠ酶切,获得HBV3.2kb基因组,采用脂质体瞬时转染HepG2细胞株,IMX检测HBV所分泌抗原,台盼蓝计数检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测表达TLR3的阳性细胞百分率,并与空白对照组对比。结果HBsAg和HBeAg的分泌随着转染HBVDNA量的增加而升高,除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外,差异均有显著性(P<0.05)。TLR3在转染后均有上调,除4μg与6μg组间比较外,各组间差异有显著性(P<0.05)。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少(P<0.05),但4μg和6μg两组间比较差异无显著意义(P>0.05)。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR3的表达呈显著正相关(P<0.01)。结论本研究初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR3的上调,而且上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制,成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。

1653例血清乙型肝炎核心抗原的放射免疫分析

抗HBs固相吸附Dane氏颗粒,开壳剂释放HBcAg和竞争放射免疫测定HBcAg,检测1177例HBsAg阳性血清和476例常规法HBsAg阴性血清,结果HBcAg检出率前者70.4%后者1.7%。1177例HBsAg阳性血清,HBeAg阳性453例、抗HBe阳性497例、HBe系统阴性227例,HBcAg检出率分别为72.2%、70.6%和66.5%。此外还对100例HBsAg和HBcAg双阳性血清进行了HBv-DNA、前S_2蛋白、多聚蛋白受体的检测。

TLR2、TLR4在乙型肝炎病毒转染的HepG2细胞株的表达

目的探讨乙肝病毒全基因组瞬时转染HepG2细胞后,对HBV抗原分泌,病原识别受体Toll样受体2、4(TLR2、4)的表达及细胞增殖的影响。方法已构建pBlueScript-HBV质粒并经测序,转化宿主菌,菌后提取质粒,用Sapl酶切,获得HBV3.2kb基因组,采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2,IMX检测HBV所分泌抗原,台盼蓝计数检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率,并与空白对照绗对比。结果HBsAg利HBeAg的分泌随着转染HBVDNA量的增加而升高,除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外,差异均有显著性意义(P<0.05)。TLR2、4在转染后均有上调,TLR4在各组间差异显著(P<0.05),但TLR2只在最大剂量转染组时差异有显著性(P<0.05)。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少(P<0.05),但4μg和6μg两组间比较无显著意义(P>0.05)。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR2、4的表达呈显著正相关(P<0.01)。结论研究结果初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR2、4的上调,而且TLR的上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制,成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。

甘草甜素对HepG2.2.15细胞株HBeAg水平及TLR4表达的影响

目的探讨甘草甜素(GL)对HepG2.2.15细胞上清HBeAg分泌,Toll样受体4(TLR4)信号分子的表达及对细胞增殖的影响。方法实时荧光定量PCR检测TLR4表达;直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测表达TLR4的阳性细胞率;ELASA检测HBV所分泌抗原;MTT检测细胞增殖活性,并与空白对照组比较。结果给药后HBVe抗原(HBeAg)的分泌结果显示,总体均数间差异显著(P<0.05),但甘草甜素各组与对照组比较差异无统计学意义;GL各组TLR4 mRNA及流式细胞TLR4的表达总体均数间均有显著差异(P<0.01),分别与对照组相比差异有显著性(P<0.01),100μg/mL组尤其明显;MTT实验显示,200μg/mL以下三个剂量组均可促进细胞增殖,50μg/mL组与对照组间差异显著(P<0.05);400μg/mL、800μg/mL两组均显著抑制细胞增殖(P<0.01);而MTT结果与HBeAg水平呈显著负相关(P<0.01),与TLR4表达无相关关系(P>0.05)。结论研究表明,甘草甜素对HepG2.2.15的e抗原分泌可能具有双向作用;细胞的存活率与e抗原呈负相关;TLR4在HepG2.2.15细胞株低表达,GL可上调TLR4表达,甘草甜素可影响先天免疫中的TLR4信号分子,有可能在体内通过免疫途径影响HBV复制和抗原分泌。

TRFIA法与ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物的比较

目的探讨时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)定量检测乙肝病毒血清学标志物(HBV-M)与酶联免疫吸附试验(ELISA)一步法定性检测HBV-M的关系及其临床意义。方法采用TRFIA和ELISA分别检测436份血清标本的HBV-M。结果对于稍高于临界值的血清,TRFIA检出率明显高于ELISA。结论 TRFIA检测HBV-M比ELISA敏感,能为乙肝的临床诊断、疗效观察提供动态数据,是一种比较理想的定量检测方法。

用聚合酶链反应快速检测痰液中结核杆菌

本研究以结核杆菌染色体中重复出现的长度为１２３个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段作为聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的模板，合成一对寡核苷酸引物。痰液标本先经三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ），乙二胺四乙酸二钠（ＥＤＴＡ－２Ｎａ）和三硝基甲苯（Ｔｒｉｔｏｎｘ－１００）加热、震荡处理，裂解结核杆菌，再作ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝胶电泳。同时，与痰液直接涂片、抗酸染色镜检抗酸染色阳性杆菌作比较。用该ＰＣＲ检测的检出率为９１．４％（３２／３５），而涂片抗酸染色的检出率仅为３４．３％（１２／３５）。两者相比有非常显著性差异（ｘ２＝２４．４７６，Ｐ＜０．００１）。由于改进了ＰＣＲ前痰液标本的处理方法，使整个ＰＣＲ检测过程所需时间缩短至９ｈ。我们认为该ＰＣＲ检测结核杆菌是特异、敏感和快速的，可在临床实验室应用。

血液透析患者单个核细胞中TTV-DNA的研究

目的 :探讨血液透析患者血清和外周血单个核细胞 (PBMC)中输血传播病毒 (TTV)检测状况及意义。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)对 6 6例血液透析患者血清及PBMC进行TTV DNA检测 ,同时采用酶免疫分析 (EIA)检测血清中HBsAg和抗 HCV。结果 :血液透析患者TTV、HCV、HBV检出率分别为 18.2 %、2 4 .2 %、7.6 %。血清TTV DNA阳性与阴性患者 ,抗 HCV阳性率分别为 9.1%与 2 7.3% ,HBsAg阳性率分别为 0 %与 9.1% ,经统计学分析均无显著差异。PBMC中TTV DNA检出率 2 2 .7% ,PBMC中TTV DNA检出率在血清TTV DNA阳性者显著高于血清TTV DNA阴性者 (5 8.3%vs 14 .8% ,P<0 .0 5 )。结论 :血液透析患者TTV感染不依赖于HCV或HBV而存在。PBMC中TTV DNA主要在血清TTV DNA阳性患者中检出 ,PBMC可能是TTV的一个贮存场所。

HBV S基因、PreS2/S基因真核重组载体的构建与鉴定

[目的]构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)S基因与PreS2／S基因的重组载体。[方法]设计合成2对寡核苷酸引 物,以adr亚型HBV质粒pHBV DNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV S基因、PreS2／S基因片段;用HindⅢ和BamHⅠ双酶 切后,分别连接到质粒pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。 [结果]酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。[结论]成功构建了S基因与 PreS2／S基因的重组载体。

供血员、血液透析及非甲～庚型肝炎患者中TTV的感染状况

目的:了解供血员、血液透析及非甲～庚型肝炎患者中输血传播病毒(TTV)的感染状况。方法:对40份供血员标本、27例血液透析及60例散发性非甲～庚型肝炎患者血清标本,采用PCR方法检测TTV-DNA,分析TTV的感染状况。结果:40份供血员血清中,有5例检出TTV—DNA阳性,检出率为12.5％;血液透析患者中TTV的检出率为22.2％(6/27),而60例散发性非甲～庚型肝炎患者血清中,无1例检出TTV-DNA。在11例TTV-DNA阳性的观察对象中,只有1例AlT轻度异常(58U/L)。结论:①广州地区存在TTV感染者。②输血具有传播TTV的风险,血液透析患者是TTV感染的高危人群。③TTV感染可能有一定的致病性,但其致病性强弱,有待进一步探讨。

宝宝怎么脱皮了

我的宝宝出生十天了。晚上睡觉前都还好好的，早上醒来，只见宝宝手脚又粗又干并开始脱皮，好像涂了一层浆糊一样。宝宝是得了怪病吗，该怎样做呢？

成人乙型肝炎疫苗无（弱）应答者不同剂量复种效果分析

目的探讨成人乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后无（弱）应答者不同方案再免疫的效果，以提高乙肝疫苗预防接种的保护率。方法采用随机、开放性的研究方法，对2年内至少完成1个标准乙肝疫苗免疫接种程序、复查HBV标志物均为阴性的健康人群，随机接受4种接种方案，按常规程序（0、1、6个月）在上臂三角肌予肌内注射。国产10μg组73例，国产基因重组乙肝疫苗复种，每次剂量为10μg；国产20μg组69例，国产基因重组乙肝疫苗复种，每次剂量为20μg；进口20μg组70例，基因重组酵母乙肝疫苗（商品名：安在时）复种，每次剂量为20μg；进口40μg组48例，基因重组酵母乙肝疫苗，每次剂量为40μg。在复种首针乙肝疫苗前及复种首针后第1、2、8、12个月采血检测抗-HBs。均数比较采用单因素方差分析，率的比较采用Х^2检验。结果接种后8个月，国产20μg、进口20μg、进口40μg组抗-HBs阳性率最高，分别为68．1％、70．0％和77．1％，均高于国产10μg组的53．4％（Х^2=21．465，P〈0．01）。国产20μg、进口20μg、进口40μg组随接种次数增加及时间延长，抗-HBs阳性率有所增加，但差异无统计学意义，12个月时有所下降；国产10μg组首次接种后1、2、8、12个月，抗-HBs阳性率依次为8．2％、19．2％、53．4％和43．8％，差异有统计学意义（Х^2=53．07，P〈0．01）。12个月时，国产20μg、进口20μg、进口40μg组抗-HBs效价均高于国产10μg组（F=7．551，P〈0．05）。国产20μg、进口20μg、进口40μg组不同时间点抗-HBs效价比较，差异无统计学意义。结论对乙肝疫苗无（弱）应答者复种疫苗仍能产生免疫应答，增加疫苗剂量可提高疗效。

血清CysC联合β_2-MG检测在诊断肾脏疾病中的应用

目的检测血清胱抑素C(Cys C)和β2-微球蛋白(β2-MG)在肾脏疾病中的表达水平,分析其在诊断中的应用价值。方法采用免疫透射比浊法测定149例肾病患者中血清Cys C和β2-MG的浓度,并分析其与血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的相关性。结果肾病组血清Cys C含量(4.40 mg/L±2.01 mg/L)高于健康对照组Cys C含量(0.82 mg/L±0.17 mg/L)(P<0.01);肾病组血清β2-MG含量(16.84 mg/L±11.60 mg/L)高于对照组β2-MG含量为(1.75 mg/L±0.43 mg/L)(P<0.01)。肾病组血清Cys C、β2-MG表达水平与血清BUN、Cr呈正相关(P<0.05)。结论联合检测血清Cys C和β2-MG可以作为早期肾损伤诊断的指标。

聚合酶链反应检测结核杆菌DNA对结核病诊断的可靠性探讨

聚合酶链反应检测结核杆菌ＤＮＡ对结核病诊断的可靠性探讨杨绍基，凌小强，高志良，姚集鲁，彭文伟为了探讨用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测结核杆菌ＤＮＡ作为结核病诊断的可靠性，我们对一年来有关结核病的实验室检查结果和临床医疗情况进行了分析研究，现报告如下。材料...