灵芝诱导子对南方红豆杉悬浮培养细胞产紫杉醇的影响

为提高红豆杉悬浮细胞紫杉醇产量,采用制备的灵芝(Ganoderma lucidum)诱导子处理南方红豆杉(Taxus wallichiana var.mairei)悬浮细胞,通过分析细胞生长量、紫杉醇总产量,研究灵芝诱导子对红豆杉悬浮细胞的影响。结果表明,灵芝诱导子添加质量浓度为100µg/mL时,红豆杉悬浮细胞生长指数和紫杉醇总产量显著高于其他质量浓度(P<0.05),该质量浓度为灵芝诱导子的最佳添加质量浓度;灵芝诱导子在细胞生长的第8天加入时,第21天的细胞生长指数和紫杉醇总产量显著高于其他添加时间(P<0.05),细胞生长的第8天为灵芝诱导子的最佳添加时间;灵芝诱导子持续作用6 d时,细胞生长指数和紫杉醇总产量显著高于其他持续作用时间(P<0.05),该持续作用时间为灵芝诱导子的最佳持续作用时间。在悬浮细胞培养的第8天加入100µg/mL灵芝诱导子培养至第21天时,细胞干质量和紫杉醇总产量达到峰值,分别为对照(等量蒸馏水处理)的221.13%、569.69%;细胞膜表面黏膜和球状物质增加;苯丙氨酸解氨酶活性和总酚含量提高,细胞活力和多酚氧化酶活性降低。

基于HPLC的南方红豆杉悬浮培养细胞特征指纹图谱构建

为建立南方红豆杉悬浮细胞高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,给南方红豆杉积累紫杉烷类化合物的规律提供理论依据。采用HPLC法测定12批次南方红豆杉悬浮细胞紫杉烷类化合物的含量,并进行相似度评价。结果表明,7种紫杉烷类化合物的HPLC测定线性关系(R2>0.999)较好,稳定性、重现性和精密度(RSD<4.00%)较高,加样回收率高(97.51%~102.30%);建立的指纹图谱成功标出了悬浮培养细胞紫杉醇、三尖杉宁碱、巴卡亭III、10-脱乙酰基巴卡丁III、10-去乙酰基紫杉醇、7-木糖-10脱乙酰基紫杉醇和7-表-10去乙酰基紫杉醇等7个特征峰,相似度结果显示,不同批次的指纹图谱与对照图谱的相似度都大于96%,各批次的相似度较好。所建立的指纹图谱方法可用于南方红豆杉细胞紫杉烷类化合物含量测定与评价。