bFGF促增殖后骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元样细胞的分化

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)体外作用于骨髓间充质干细胞(Mesen-chymal stem cells,MSCs)后,诱导其向神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞定向分化的情况。方法从鼠骨髓中获得MSCs,培养传代,用MTT法检测bFGF对骨髓MSCs生长的影响。10 ng/ml bFGF作用2 d后,通过IBMX、细胞因子bFGF、GDNFI、L-1β、中脑神经胶质细胞条件培养基和中脑神经细胞膜碎片等分组联合诱导骨髓MSCs向神经元样细胞、多巴胺能神经元样细胞分化,免疫细胞化学方法鉴定特异标志NSE、MAP-2a,b和TH的表达。结果在一定范围内,bFGF对骨髓MSCs具有明显的促增殖作用。分化的神经元样细胞表达NSE、MAP-2a,b和TH,联合应用GDNFI、L-1β、中脑条件培养基和中脑神经细胞膜碎片诱导7 d后,NSE阳性率为(27.774±2.747)%,MAP-2a,b为(28.006±3.080)%,TH为(3.098±0.352)%。结论体外骨髓MSCs被诱导分化成神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞,为帕金森等中枢神经系统疾病的细胞移植治疗奠定了基础。

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞及其对坏死胰腺组织的修复

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)体外诱导转化为胰岛样细胞及其对坏死胰腺组织修复的可能性.方法:①取大鼠骨髓细胞,进行MSC培养纯化扩增,用bFGF、EGF、条件培养液、高糖培养基、B27、地塞米松、胰岛素等培养体系诱导MSC向胰岛细胞转化;双硫腙染色鉴定胰岛样细胞.②结扎大鼠胰腺组织及其血管6～7 h制作胰腺局部坏死模型.将分离、纯化、诱导的MSC和骨髓细胞用DAPI标记,分别移植到实验组(移植MSC)和对照组(移植骨髓单个核细胞).观察大鼠生存状态并于2周后取胰腺组织检测.结果:①体外扩增的MSC诱导转化后,细胞由初期的长梭形变成多角形或圆形并逐渐聚集成团.双硫腙染色大部分细胞团呈亮红色,初步表明MSC可诱导转化为胰岛样细胞.②实验组大鼠成活率达80%,坏死的胰腺组织被修复,变黑的胰腺组织基本恢复正常,胰腺组织中存在核呈兰色荧光的细胞;对照组的动物腹腔积水、粘连,2周内全部死亡.结论:大鼠骨髓MSC可在体外诱导转化为胰岛样细胞,并可修复损伤的胰腺组织.

PCNA、IL-6和IL-1β在肿瘤组织中的表达

目的:探讨接种肿瘤细胞株所导致的肿瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)的表达情况及其与临床病理参数之间的关系。方法:应用免疫组织化学的方法检测PCNA、IL-1β和IL-6在结肠癌细胞、肝癌细胞接种后的小鼠肿瘤组织中的表达,确定PCNA、IL-1β和IL-6在结肠癌和肝癌组织中的表达与肿瘤淋巴结转移之间的关系;探讨PCNA、IL-1β和IL-6与肿瘤重量和体积的相关性。结果:PCNA在小鼠结肠癌和肝癌组织中有较高水平的表达,IL-1β、IL-6在肿瘤间质的血管中有明显表达,PCNA、IL-1β的表达与肿瘤的重量和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:IL-1β、IL-6和PCNA在肿瘤组织中的表达具有一致性。

骨髓间充质干细胞向神经元的诱导分化

目的 :探讨大鼠骨髓间充质干细胞 ( rat mesenchymal stem cells,r MSCs)体外诱导分化成神经元的能力。方法 :用 0 .2 5、0 .5、1 .0 mmol· L-1IBMX诱导传代的 r MSCs,待细胞分化后进行形态学观察 ,并用免疫细胞化学方法进行细胞鉴定。结果 :0 .5 mmol· L-1IBMX诱导细胞效果最好 ,2 d即可见有神经元样细胞出现 ,6d神经元样细胞占细胞总数的 ( 2 3.2± 2 .3) %,NSE染色阳性。未分化细胞表达 nestin,诱导 3d,阳性细胞增多 ,6d减少。结论 :体外 r MSC能扩增、传代 。

骨髓间充质干细胞向早期神经元样细胞诱导分化的研究(英文)

背景:骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)不仅能分化成间质细胞,而且能向实质细胞(如心肌细胞)转化。在体外定向诱导MSCs分化成神经细胞,是目前国内外研究热点,具有重大理论意义。目的:探讨大鼠MSCs体外诱导分化成神经元的能力。设计:随机空白对照实验的研究。地点、材料和干预:实验在吉林大学公共卫生学院毒理教研室完成。实验动物采用Wistar大鼠(吉林大学实验动物中心),6周龄,雌雄不限。将2～4代的rMSCs接种在铺有盖玻片的24孔板中。分为3个实验组,一个对照组。实验组分别加入终浓度为0.25,0.50和1.00mmol/L异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethylxanthine,IBMX)诱导传代的rMSCs,待细胞分化后进行形态学观察,对照组中不加诱导剂,并用免疫细胞化学方法进行细胞鉴定。主要观察指标:培养MSCs的生长情况,诱导后细胞的形态学变化及nestin(小鼠抗大鼠,单克隆),神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)抗体(兔抗鼠,多抗)、微管相关蛋白-2a,b(microtubule-associatedprotein-2a,b,MAP-2a,b)的免疫细胞化学检测。结果:加入IBMX后,0.25mmol/L组分化成神经元样细胞较少。1.0mmol/L组细胞加入IBMX第2天开始可见细胞陆续死亡。0.5mmol/L组2d即可见有神经元样细胞出现,细胞具有典型的神经元形态特征。

骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤后肾功能及氧化应激水平的改善作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)促肾缺血再灌注损伤修复的能力,为肾脏疾病治疗提供新的思路。方法:健康3周龄C57BL/6J小鼠的骨髓细胞悬液进行BMSCs体外扩增培养。8周龄C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、平行对照组和细胞移植组,每组16只小鼠。建立肾缺血-再灌注损伤模型,将BMSCs通过尾静脉注射到细胞移植组小鼠中,平行对照组注射生理盐水。检测肾功能指标血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平变化、损伤肾组织自由基——羟自由基和超氧阴离子自由基变化和肾形态学变化。结果:①分离培养的BMSCs增殖旺盛,纯度较高,且均质性和稳定性好。②平行对照组小鼠整体状态差,肾功能指标、氧化应激指标明显升高,组织形态学出现肾小球崩解,肾小管结构消失,肾间质见大量炎性细胞浸润。而细胞移植组小鼠整体状态良好,肾功能指标和氧化应激指标得到明显改善(P<0.05),组织形态学未出现明显病理性改变。结论:BMSCs在体外易分离培养,具有旺盛的增殖能力;移植BMSCs后,通过抑制氧自由基的生成来促进肾缺血-灌注损伤后小鼠的恢复。

镉诱导HL-7702细胞损伤及其机制

目的：探讨镉诱导正常人肝细胞系HL-7702细胞损伤的机制。方法：镉处理组HL-7702细胞暴露于镉浓度分别为5、10、20、30及40μmol·L^-1 RPMI 1640培养液中，另设一对照组。采用生长曲线法，观察不同浓度镉作用1、2、4、6、及8d对HL-7702细胞增殖的抑制作用；采用MTT法，检测不同浓度镉作用24、48及72h对HL-7702细胞毒性作用；用PI单染流式细胞术检测不同浓度镉作用24、48及72h诱导HL-7702细胞周期的改变情况；用Annexin V-FITC／PI双染流式细胞术检测不同浓度镉作用12、24、48及72h对细胞凋亡的影响。结果：浓度5～40μmol·L^-1镉处理组与对照组比较可明显抑制HL-7702细胞生长（P〈0．05），作用48和72h时细胞发生明显的S期阻滞，作用24、48和72h均可使细胞发生不同程度的凋亡，72h时最为明显。结论：镉对HL-7702细胞生长有一定抑制作用，同时镉还可以引起HL-7702细胞发生S期阻滞和细胞凋亡。

胎鼠皮肤间充质干细胞的体外培养及成骨分化研究

目的 :分离、纯化胎鼠皮肤间充质干细胞 (MSCs) ,在体外培养、扩增并促其成骨分化 ,为骨组织工程学研究与骨质疏松症的细胞学治疗提供一种可能。方法 :体外培养胎鼠皮肤 MSCs,并在培养液中加入成骨诱导剂诱导培养 ,观察其成骨分化潜能。结果 :胎鼠皮肤 MSCs传代培养第 1 5代仍具有增殖能力 ,说明该细胞为干细胞源性 ;贴壁细胞在成骨诱导剂作用下 ,碱性磷酸酶 (AL P)水平升高 ,AL P钙钴染色呈阳性反应 ,钙结节茜素红染色反应阳性。结论 :胎鼠皮肤 MSCs具有很强的自我增殖能力 。

骨髓间充质干细胞移植对豚鼠皮肤深Ⅱ度烧伤的治疗作用

目的探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)治疗皮肤深Ⅱ度烧伤的机制。方法体外培养扩增的MSCs悬液 ,以 2× 10 6/ml(A组 )和 2× 10 7/ml(B组 )两种细胞密度移植给皮肤深Ⅱ度烧的受体鼠创面 ,观察创面愈合速度 ,用免疫组织化学检测因子Ⅷ的表达。细胞移植后的第 15、3 0、5 0天 ,通过PCR方法检测创面皮肤组织中移植供体鼠的Y染色体基因表达。结果A、B组治疗侧的创面愈合速度均快于对照侧 ,A、B组治疗侧间无显著性差异。因子Ⅷ检测示第 15、3 0天时 ,A、B两组的微血管密度均多于对照侧 ,A、B组治疗侧间无显著性差异。PCR检测结果表明 ,第 15、3 0、5 0天时在部分受体鼠恢复的创面上有供体鼠Y染色体基因表达。结论骨髓MSCs对皮肤深Ⅱ度烧伤具有明显的疗效。

甲基汞对脑神经胶质细胞凋亡及c-fos表达的影响

为探讨氯化甲基汞 (MMC)所致脑发育损伤及其与c fos表达的关系 ,采用光镜、电镜等形态学方法 ,观察了MMC对体外培养的大鼠脑神经胶质细胞的损害作用 ,并应用免疫细胞化学方法 (SP法 )观察MMC对培养神经胶质细胞c fos表达的影响。结果表明 ,体外培养的胶质细胞接触MMC后 ,出现胞浆浓缩、轴突回缩、染色质边聚、固缩等现象 ,呈凋亡的典型形态。MMC 0 0 2mmol L作用于神经胶质细胞 10min后 ,c Fos蛋白阳性细胞百分率随其后的培养时间而变化 :c Fos蛋白阳性细胞率 0 5h开始增高 ,2h达高峰 ,4～ 6h又逐渐减少。MMC 0 0 0 12 5、0 0 0 5、0 0 2、0 0 8和 0 32mmol L作用 10min后 ,0 32mmol L组的阳性率显著高于除0 0 8mmol L组外的其他各组 (P <0 0 1)。提示MMC可诱导体外培养大鼠脑神经胶质细胞c fos表达 ,并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c fos介导有关。

银杏叶提取物对糖尿病大鼠体内氧化应激的影响

目的观察银杏叶提取物对糖尿病(DM)大鼠体内氧化应激水平的影响。方法利用Wistar大鼠建立糖尿病模型,将糖尿病大鼠分为糖尿病组(DM)和银杏叶治疗组(GBE),另设正常组动物为对照。DM组和正常对照组大鼠每日通过腹腔注射给予生理盐水0.83ml.kg-1,GBE组大鼠每日通过腹腔注射给予GBE0.83ml.kg-1,连续注射30天后取血测定各组大鼠血清中丙二醛(MDA)含量和超氧阴离子(O2-)水平,然后取出胰腺、肾脏测定MDA含量并采用免疫组化S-P法(链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶)检测肾脏蛋白激酶C(PKC)的表达。结果与正常对照组相比,DM组和GBE组大鼠血清、肾脏和胰腺中MDA的含量及血清中超氧阴离子(O2-)的水平显著升高(P<0.05);GBE组大鼠血清、肾脏和胰腺中MDA的含量及超氧阴离子(O2-)的水平显著低于DM组(P<0.05)。免疫组织化学染色结果表明,DM组PKC表达显著强于GBE组。结论银杏叶提取物可减轻糖尿病大鼠体内的氧化应激水平,具有抗氧化作用,对糖尿病并发症的发生发展具有一定的预防作用。

B段紫外线对豚鼠皮肤的损伤作用

目的:探讨B段紫外线(UV-B)对豚鼠皮肤的损伤作用。方法:实验动物随机分为UV-B照射组和未照射对照组,通过大体观察、组织切片及皮下组织中氧化损伤指标MDA、超氧阴离子和羟自由基的测定,探讨UV-B对豚鼠皮肤的损伤作用。结果:照射组豚鼠皮肤表皮红肿、脱屑;照射剂量达5.28J/cm2时,组织切片中可见整个表皮层增厚,内含排列紊乱的不典型细胞,层次不清,表面有角化过度和角化不全;棘细胞层明显肥厚。全层细胞体积均增大且具异型性,核大小不一,形态各异,染色深浅不匀。UV-B照射组血清和皮下组织中MDA和ROS含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论:UV-B能够造成豚鼠皮肤的光老化并出现癌前病变。

人骨髓造血基质干细胞体外增殖方法

目的 :探讨使骨髓造血基质干细胞 ( HSSC)体外稳定增殖的方法。方法 :取开胸术剪下的人肋骨 (正常血象 ,非血液系统及恶性肿瘤病 ) ,常规制备骨髓细胞悬液 ,从胎牛血清及人 AB型血清中选择最佳血清 ,人 AB型血清浓度分别为 5 %、1 0 %、1 5 %、2 0 %、30 %、35 %、40 %。培养液分别为 RPMI1 640、DMEM、IMDM以选择最佳培养液。加入人重组碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)进行最佳浓度测定。培养物置 CO2 孵箱中培养 2周后行 HE染色 ,计数基质细胞集落数。结果 :选择出最佳培养体系为 30 %人 AB型血清、1μg· L-1 b FGF、Penicillin 1 0 0 KU· L-1 、Streptomycin5 0 KU· L-1 、氢化考的松 1 0 -6mol· L-1 和 IMDM培养液。结论 :选择最佳的培养体系可增加HSSC增殖数量 ,最宜体外培养时间 ( 1 4～ 2 1 d) ,最大限度增加回输时的 HSSC数量 ,使自体回输治疗急性白血病 ( AML)

铅对未成年小鼠骨髓干/祖细胞和外周血的毒性作用

目的:为防治铅中毒提供实验室研究资料,探讨铅染毒时铅对未成年小鼠骨髓造血干/祖细胞和外周血的毒性作用。方法:60只昆明系小鼠随机分成4组,分别以0mg Pb2+/L、164mg Pb2+/L、546mg Pb2+/L、1638mg Pb2+/L浓度的醋酸铅饮用水对小鼠染毒,于染毒的第10天取小鼠股骨骨髓细胞作体外培养,观察各组红系祖细胞成集落数(BFU-E)和粒系祖细胞成集落数(CFU-GM)的变化并进行外周血测定。结果:醋酸铅可明显抑制骨髓BFU-E和CFU-GM的生长,集落数与对照组相比差异显著(P<0·05),且随醋酸铅浓度的增加,骨髓BFU-E抑制作用增强(相关系数为rs=-0·972,P=0·000),而外周血Hb、WBC和PLT与对照组比较差异无显著性(P<0·05)。结论:骨髓造血祖细胞对铅较为敏感,铅染毒小鼠外周血变化不明显时,已引起骨髓BFU-E和CFU-GM的生长障碍。

甲基汞对培养大鼠脑神经细胞损伤的影响

目的 通过体外实验探讨氯化甲基汞 (methylmerculychloride ,MMC)所致脑发育损伤及其与c -fos表达的关系。方法 采用形态学试验方法 ,观察MMC对体外培养大鼠脑神经细胞的损害作用 ,并应用免疫细胞化学方法观察MMC对神经元、神经胶质细胞c -fos表达的影响。结果 体外培养的神经细胞接触 0 3 μmol/LMMC后 ,出现胞浆浓缩、轴突回缩 ,染色质边聚、固缩等现象 ,呈凋亡的典型形态。神经细胞培养体系中加入 0 3 μmol/LMMC持续作用后 ,神经元和神经胶质细胞中c -fos阳性细胞率在 0 5h开始增高 ,并随时间的延长而增加 ,2h以后维持较高水平。培养细胞接触MMC 10min、2h、6h后 ,实验组神经元c -fos阳性表达率分别为 8 78% ,68 2 6% ,64 96% ,神经胶质分别为 7 74% ,66 61% ,72 52 %。结论 MMC可诱导体外培养大鼠脑神经细胞c -fos高表达 ,并诱发其凋亡。MMC诱发神经细胞凋亡可能与c

混输脾基质细胞与骨髓细胞悬液在小鼠大剂量辐射损伤修复中的作用

Ｃ５７ＢＬ／６／小鼠经６０Ｃｏγ射线一次整体照射８Ｇｙ后，分成三组：（１）单纯照射８Ｇｙ组。（２）照射后单纯骨髓移植组，（３）照射后混输脾基质细胞（ＳＳＣ）与骨髓细胞（ＢＭＣ）组，以观察骨髓移植和回输脾基质细胞对大剂量照射后受体存活率及造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）的影响，并初步探讨其可能的机理。结果表明：单纯骨髓移植组受体存活率比单纯照射组高出２７％；而照射后混输ＳＳＣ组之存活率比单照射组高４７％，比单纯骨髓移植组高２２％（Ｐ＜０．０５）。混输ＳＳＣ可明显提高脾ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－Ｆ及ＡＮＡＥ染色（＋）（－）细胞数。在体外混合培养中脾基质细胞对实质细胞增殖起支持与调节作用。

大鼠骨髓间充质干细胞向软骨、脂肪和神经元样细胞分化的研究

目的 :探讨体外大鼠骨髓间充质干细胞 (r MSCs)多向分化潜能。方法 :从大鼠骨髓中获得间充质干细胞 ,体外培养传代。通过地塞米松、 TGF-β1和维生素 C诱导 r MSCs向软骨细胞分化 ,甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学检测 型胶原进行鉴定。通过地塞米松和胰岛素诱导 r MSCs向脂肪细胞分化 ,采用苏丹 染色鉴定。在含IBMX、 GDNF和 IL - 1β的培养基中诱导 r MSCs向神经元样细胞分化 ,免疫细胞化学方法检测神经细胞特异标志NSE和 MAP- 2 a,b。结果 :r MSCs被诱导 7d后 ,分化成软骨细胞 ,甲苯胺蓝异染阳性、 型胶原阳性。被诱导10 d后 ,分化成脂肪细胞 ,苏丹 染色阳性。被诱导 7d和 15 d后 ,分化成神经元样细胞 ,表达 NSE和 MAP- 2 a,b,15 d后 NSE阳性率是 (2 0 .0 6 0± 0 .790 ) % ,MAP- 2 a,b阳性率是 (17.36 4± 5 .738) %。结论 :体外 r MSCs被诱导分化成软骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞 ,证明其具有多向分化潜能 ,是组织工程研究中最有前途的种子细胞之一。

人转化生长因子β_3的构建

目的:获取人转化生长因子β3的编码基因,开发抗衰老的皮肤药物。方法:采用重叠PCR的方法,设计4对引物,进行4次PCR合成人转化生长因子β3的编码基因。结果:4次PCR后,经2%的琼脂糖凝胶电泳可见一357 bp的条带,将电泳产物回收,连接入pMD-18T载体,经测序分析证实,所获得DNA片段为人转化生长因子β3的编码基因。结论:利用重叠PCR方法能够成功构建人转化生长因子β3的编码基因。

小鼠胸腺基质细胞辐射损伤效应

体外研究胸腺基质细胞的特性及功能，发现不论是体外器官培养，还是液体单层培养，基质细胞都是在实质细胞退化死亡基础上不断增殖。单层培养可形成多角形细胞、纺锤形细胞及集落，器官培养可形成“细胞槽”滋养细胞等特殊结构。在基质细胞上可见有免疫细胞生长。在０．７５Ｇｙ及１．５Ｇｙ照射后，基质细胞（含基质祖细胞）与未照射组对比减少不明显，甚至有所增高，而４．０Ｇｙ和８．０Ｇｙ照射后其数量显著下降。胸腺基质祖细胞的Ｄ。值是２．３Ｇｙ，ｎ值是１．４。