大麻二酚对创伤性脑损伤大鼠脑皮质Occludin、ZO-1表达水平及血脑屏障通透性的影响

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)中紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达及变化趋势,探讨大麻二酚(CBD)对BBB的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,将大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和CBD干预组(TBI+CBD组),每组24只;每个组又分为损伤后8 h、1、2、3、5和7 d共6个时间点,通过免疫组化和免疫荧光染色,Western blot检测与BBB通透性密切相关的Occludin和ZO-1在不同时间点的表达情况;通过荧光素钠实验检测BBB通透性。结果免疫组化实验结果表明,与假手术组相比,TBI后随着时间推移Occludin和ZO-1蛋白阳性表达减少(P<0.05),2 d达到最低;CBD干预1 d后Occludin和ZO-1蛋白表达水平均上调(P<0.05);免疫荧光染色实验与Western blot结果趋势近似,与假手术组相比,TBI后Occludin和ZO-1荧光表达强度及蛋白表达量减少(P<0.05),CBD干预2 d后Occludin和ZO-1表达水平上调(P<0.05);荧光素钠实验结果表明,TBI后脑组织BBB完整性遭到破坏,通透性升高(P<0.01),CBD干预后BBB通透性下降(P<0.05)。结论TBI后紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达下降,BBB通透性升高,CBD干预可逆转TBI对BBB的破坏。

大麻二酚抑制创伤性脑损伤大鼠睾丸凋亡相关蛋白的表达

目的研究创伤性脑损伤(TBI)后大鼠睾丸的损伤情况,并分析大麻二酚(CBD)对TBI引起的睾丸损伤的干预作用。方法将18只SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、模型组(TBI组)和治疗组(TBI+CBD组)。采用HE染色法观察大鼠睾丸组织病理学变化,采用ELISA法检测大鼠血清中的睾酮水平。采用TUNEL染色法观察细胞凋亡,同时采用免疫荧光染色、Western blot和RT-qPCR法检测Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白及mRNA表达。结果HE结果显示,与Sham组比较,TBI组大鼠睾丸出现病理改变。ELISA检测表明,与Sham组比较,TBI组的睾酮水平下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光结果显示,与Sham组比较,TBI组大鼠睾丸Bax荧光表达强度升高(P<0.01);而CBD干预后Bax荧光强度下降且Bcl-2荧光强度升高(P<0.01)。Western blot结果表明,大鼠经CBD治疗后降低了睾丸凋亡相关蛋白(Bax和Cleaved Caspase-3,均P<0.05)和炎症相关蛋白(TNF-α,P<0.01)的蛋白水平,升高了抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白水平(P<0.05)。RT-qPCR结果趋势近似,与TBI组比较,CBD干预后Bax(P<0.05)和TNF-α(P<0.01)的mRNA表达下降,而Bcl-2的mRNA表达升高(P<0.05)。结论TBI导致睾丸损伤,CBD能够减轻TBI大鼠睾丸组织的凋亡和炎症反应。

TBI大鼠Claudin-5紧密连接蛋白表达变化及CBD干预研究

目的观察大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑微血管内皮细胞间紧密连接蛋白Claudin-5表达的时序性规律,探讨大麻二酚(cannabidiol,CBD)的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体撞击法建立SD大鼠TBI模型,随机分为对照组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和干预组(TBI+CBD组),每组分8 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d 6个亚组(n=3)。运用RT-PCR、免疫组织化学染色和免疫荧光双标染色实验,观察CBD干预对TBI后Claudin-5阳性表达与星形胶质细胞(astrocyte,AST)激活的影响。结果PCR结果表明:TBI后不同时间段Claudin-5的mRNA表达下降,CBD干预后,其表达有明显回升。免疫组化及免疫荧光结果表明,Sham组Claudin-5蛋白表达于脑微血管内皮细胞连接处,呈点状、线条状,AST胞体较小、突起少呈细长状;TBI后Claudin-5阳性细胞线条断裂,其表达显著减弱且呈下降趋势,以2 d组表达最低(P<0.05),此外,AST被激活,胞体变大、突起增多肿胀;CBD干预后Claudin-5阳性表达显著升高,AST激活状态明显减弱,胞体有所回缩,足板肿胀减轻。胶质纤维酸性蛋白阳性表达的AST和Claudin-5蛋白不存在共表达,但是AST伸出的足板与微血管内皮细胞直接相贴附。结论TBI后AST激活并参与Claudin-5蛋白表达的调节;CBD可能通过调控AST的激活状态调节Claudin-5阳性表达,进而改善血脑屏障的通透性。

创伤性脑损伤大鼠不同脑区胶质纤维酸性蛋白表达的变化

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达及脑区之间的差异变化。方法采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,将其随机分为假手术组(Sham组)和模型组(TBI组)。采用免疫组化染色、Western blot和RT-qPCR实验方法,观察TBI后不同脑区活化星形胶质细胞的形态学变化以及GFAP表达情况。结果免疫组化染色结果显示,TBI右侧各脑区的星形胶质细胞均发生激活,并且波及到对侧(左侧)的脑区仅有皮质1区和中脑区。RT-qPCR结果显示,TBI右侧各脑区GFAP的mRNA均出现高表达,并波及到对侧的皮质和中脑区。Western blot结果显示,TBI右侧各脑区GFAP蛋白均出现高表达,并波及到对侧的中脑区。结论TBI会引起右侧各脑区的星形胶质细胞激活以及GFAP表达增多,同时会累及对侧(左侧)的皮质1区和中脑区。

大麻二酚对创伤性脑损伤大鼠脑组织AQP4表达的影响

目的观察创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)大鼠脑组织中水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)的表达及其时程变化规律,探讨大麻二酚(cannabidiol,CBD)对AQP4的干预作用。方法采用改良“Feeney自由落体法”制备大鼠TBI模型,然后随机分为致伤后8 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d 6个损伤组和6个CBD干预组,另设正常对照组、假手术组。采用免疫荧光单标染色和Western blotting实验观察各组大鼠损伤侧皮质区AQP4蛋白表达情况。结果免疫荧光染色结果显示,与假手术组相比,TBI致伤后AQP4阳性表达随时间推移逐渐增高,3 d达到高峰,5 d、7 d有所下降(P<0.05),但仍高于假手术组;CBD干预后1 d、2 d、3 d和5 d的AQP4阳性表达均下降(P<0.05)。Western blotting实验结果显示,与假手术组相比,TBI致伤后8 h、1 d、2 d、3 d的AQP4蛋白表达水平均有所增加(P<0.05);CBD干预后AQP4蛋白表达水平较TBI组均有所下降(P<0.05)。结论TBI可引起AQP4表达升高,3 d达到高峰,而CBD能够抑制AQP4过表达,以1 d、2 d、3 d干预效果最为明显。

支链氨基酸转氨酶1基因沉默对缺血脑损伤大鼠的保护作用

目的:探讨支链氨基酸转氨酶1(BCAT1)基因沉默对大鼠缺血性脑损伤的保护作用。方法:选取40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、MCAO模型组(MCAO)、MCAO+空白质粒脑室注射组(NC-shRNA)、MCAO+BCAT1干扰质粒脑室注射组(BCAT1-shRNA),利用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备脑缺血模型,通过神经功能缺损评分判断大鼠神经功能损伤情况;real time RT-PCR检测大鼠脑缺血部位BCAT1 mRNA的表达水平;利用商品化试剂盒测定缺血脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;TUNEL染色检测缺血脑组织细胞凋亡情况。结果:MCAO组大鼠神经功能缺损评分升高(P<0.05),BCAT1 mRNA表达水平升高(P<0.05),脑组织梗死灶增大,SOD活性降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05),TUNEL染色阳性细胞数量增多(P<0.05)。而BCAT1基因沉默可降低缺血性脑损伤后大鼠神经功能缺损评分(P<0.05),降低BCAT1 mRNA表达水平(P<0.05),缩小脑组织梗死灶范围,上调SOD活性(P<0.05),下调MDA含量(P<0.05),减少细胞凋亡(P<0.05)。结论:大鼠脑缺血可导致BCAT1表达上调,BCAT1基因沉默具有一定神经保护作用。