枯草芽孢杆菌Mn-SOD基因的克隆及原核表达

为了实现Mn-SOD基因在大肠杆菌(E.coli)中的可溶性表达,根据枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168 sodA核酸序列设计引物,以枯草芽孢杆菌ATCC 9372基因组为模板,PCR扩增获得了Mn-SOD基因。将此基因重组至原核表达载体pET-28a,构建含Mn-SOD基因的重组表达质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得Mn-SOD,蛋白分子量约为26 kD,占全菌蛋白的45.6%。改良的连苯三酚自氧化法测定SOD活力,菌体可溶性总蛋白SOD比活为51.09U·mg^(-1),是对照组的4.84倍。枯草芽孢杆菌ATCC 9372 Mn-SOD基因在大肠杆菌BL21(DE3)中首次成功表达,产物具有较高的可溶性和活性,为大量制备Mn-SOD奠定了基础。

修饰血红素提高血红蛋白类过氧化物酶活性

利用苯酚或对羟基联苯对血红蛋白的血红素辅基进行化学修饰,将修饰后的血红素与脱辅基血红蛋白进行重组得到新的血红蛋白。以光吸收扫描分析修饰血红素和重组血红蛋白,证明新的重组血红蛋白构建成功。酶活力测定表明,修饰血红素得到的重组血红蛋白的类过氧化物酶活性都比天然血红蛋白的酶活力高,用对羟基联苯修饰血红素得到的重组血红蛋白的酶活提高明显,约是天然血红蛋白的1.6倍。

亲和层析快速提取白果和大豆的抗氧化蛋白

用环氧氯丙烷活化法把血红素结合于惰性分子筛填料SephadexG-25上作为配基做成亲和层析柱,用于从白果或大豆中提取具有抗氧化活性的蛋白。此层析柱以去离子水为平衡液、0.2mol/L的NaAc-HAc缓冲液(pH3.6)为洗脱液,层析得到的蛋白经亚油酸-硫氰酸钾抗氧化活性测定证明具有较高的抗氧化活性。白果全蛋白的抗氧化活性为7.92%,经此方法提纯后得到2种抗氧化多肽,活性达到17.45%;而大豆中的抗氧化蛋白经纯化则得到多种,抗氧化活性由全蛋白时的10.52%提高至30.72%。这是一个新的、只需一个步骤即可从白果或大豆蛋白提取液中提取到具有高抗氧化活性蛋白的方法,具有成本低,快速高效的特点。

人细小病毒B19 IgM抗体间接ELISA检测方法的初步建立

目的利用原核表达并纯化的人细小病毒B19(HPV B19)结构蛋白VP1初步建立HPV B19IgM酶联免疫吸附试验(ELISA)的检测方法。方法以纯化的重组蛋白包被酶标板,建立IgM间接ELISA检测方法,确定Cut-off值,并进行初步的应用。结果建立间接ELISA方法 Cut-off值为0.25,灵敏度为84.60%,特异性为99.70%,与对照试剂盒检测结果符合率为99.47%;用自产试剂盒检测115份孕妇和1 700份健康献血志愿者血清中B19IgM抗体,阳性率分别为12.17%和1.59%。结论通过包被HPV B19-VP1蛋白建立的间接ELISA检测方法可用于HPV B19早期感染或急性感染的辅助诊断。