miR-155表达变化对TGF-β1损伤足细胞蛋白podocin、CD2AP、synaptopodin的影响

目的:研究miR-155 mimics/inihibitor转染足细胞后微小RNA-155(miR-155)的表达变化及其对TGF-β1损伤足细胞的影响。方法:体外培养小鼠足细胞,细胞免疫荧光染色鉴定足细胞分化成熟;用TGF-β1处理足细胞构建足细胞损伤模型,RT-PCR和Western blot分别检测miR-155和CD2AP的表达;免疫荧光显微镜观察转染成功指示剂Cy3,RT-PCR检测miR-155 mimics/miR-155 inihibitor转染(0 h、24 h、48 h、72 h)后miR-155的表达;选取转染时间48~72 h,RT-PCR检测Normal、TGF-β1、TGF-β1+mimics、TGF-β1+mimics NC、TGF-β1+inhibitor、TGF-β1+inhibitor NC组细胞miR-155及podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA表达,Western blot检测3种蛋白的表达,免疫荧光观察各组CD2AP的荧光分布和表达。结果:CD2AP呈足细胞分化成熟的特征分布;TGF-β1干预后miR-155表达上升,CD2AP蛋白表达下降(P<0.05);miR-155 mimics或miR-155 inihibitor转染48 h、72 h后,miR-155表达明显增加或减少(P<0.05);miR-155 mimics可上调TGF-β1诱导的miR-155表达(P<0.05),且可促进TGF-β1诱导的足细胞podocin、CD2AP、synaptopodin的mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),而转染miR-155 inihibitor对足细胞蛋白的作用与miR-155 mimics相反。免疫荧光结果显示CD2AP蛋白的表达与Western blot、RT-PCR结果一致。结论:miR-155可靶向足细胞蛋白podocin、CD2AP和synaptopodin的表达,miR-155过表达可促进足细胞损伤,miR-155表达下调则可改善足细胞的损伤,因此,miR-155可作为足细胞损伤新的药物靶标。

不同浓度miR-155mimics和miR-155 inihibitor在足细胞中的转染效果

目的探讨瞬时转染miR-155mimics和miR-155 inihibitor化学合成物在足细胞中表达变化及其稳定情况。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,用脂质体法将miR-155mimics/NC、miR-155 inihibitor/NC、Cy3 miR-155 mimics/inhibitor NC转染足细胞,构建足细胞内miR-155高表达模型、低表达模型、荧光基团。然后用免疫荧光显微镜观察不同剂量LipofectamineTM 2000转染不同浓度Cy3 miR-155 NC后的荧光转染效果。用实时荧光定量PCR技术检测足细胞中miR-155mimics浓度梯度(50、80、100 nmol/mL)、miR-155 inihibitor浓度梯度(80、100、150 nmol/mL)的miRNA-155表达。结果达到一定剂量的LipofectamineTM 2000足以饱和不同浓度的miRNA,并将不同浓度Cy3 miR-155 NC成功转入足细胞内,且转染效率达80%以上。qRT-PCR结果显示转染miR-155mimics、miR-155 inihibitor 24 h后,miR-155在足细胞中的表达明显改变,与阴性对照组(NC)比较差异有统计学意义,表明转染成功。转染80 nmol/mL浓度的miR-155mimics,miR-155在足细胞中的表达明显上调(P<0.001),与其他浓度对比表达量升高,差异有统计学意义。转染150 nmol/mL浓度的miR-155 inihibitor,miR-155在足细胞中的表达明显下调(P<0.001),与其他浓度对比表达量降低,差异有统计学意义。结论 LipofectamineTM 2000达到适当剂量时将各工作浓度的miRNA-155转入足细胞内的转染效果高。80 nmol/mL的miR-155mimics和150 nmol/mL的miR-155 inhibitor可能较适合用于实验研究。

铁皮石槲对D-半乳糖致阿尔茨海默病模型小鼠大脑病理的影响

目的探讨铁皮石槲对D-半乳糖加亚硝酸钠致阿尔茨海默病(AD)模型小鼠大脑病理的影响。方法用D-半乳糖加亚硝酸钠给小鼠作腹腔注射60 d,建立拟AD模型,将造模小鼠分成铁皮石槲组、首乌复方组、金银花组、模型组,另设正常组。实验结束,取小鼠大脑,测定脑匀浆的生化指标,并作病理检查。结果正常组、铁皮石槲组、首乌复方组、金银花组、模型组,脑匀浆乙酰胆碱酯酶(Ach E)活力依次为(1.50±0.07)U/mg、(1.88±0.19)U/mg、(1.70±0.21)U/mg、(1.72±0.23)U/mg、(1.76±0.20)U/mg,正常组明显低于铁皮石槲组(P<0.05)和模型组(P<0.01);病理检查,正常组:大脑皮质及海马区神经细胞、神经胶质细胞无变性、坏死,组织结构及层次未见显著改变。模型组:大脑皮质和海马区少数神经细胞胞体肿胀、胞质空亮、Nissl体消失、胞核缩小偏位深染,呈急性神经细胞溃变改变,少数神经细胞胞核、胞体收缩,核仁不明显、核与胞质融合固缩,呈慢性进行性神经细胞坏死改变。铁皮石槲组:病变程度与模型组基本一致。首乌复方组:病变程度比铁皮石槲组轻,金银花组:病变程度比模型组和铁皮石槲组轻。结论中药铁皮石槲与首乌复方、金银花口服液对D-半乳糖加亚硝酸钠致AD小鼠模型均有一定的抗衰老作用。

miR-155调控线粒体自噬对足细胞损伤的机制研究

目的探讨miR-155对足细胞凋亡的影响,并深入研究其机制。方法MPC5细胞(经H 2O 2预处理)分为miR-155抑表达组、miR-155过表达组、对照(空质粒)组、空白组。分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot法检测线粒体自噬通路相关因子FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1、p62及凋亡相关因子Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA或蛋白表达;JC-1探针检测线粒体膜电位;ELISA检测细胞内ROS含量;CCK8、流式细胞术检测细胞活性及凋亡。结果相较于对照组,miR-155抑表达组的FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1和Bcl-2表达明显升高,细胞活性和线粒体膜电位明显增加(P<0.05),p62、Caspase-3和Bax的表达明显降低,ROS含量和细胞凋亡率显著下降(P<0.05);miR-155过表达组的FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin1、Bcl-2的表达明显下调,细胞活性和线粒体膜电位明显降低(P<0.05),p62、Caspase-3和Bax表达,细胞内ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。对照组与空白组的结果比较无统计学意义(P>0.05)。结论上调miR-155表达,可促进足细胞凋亡,其机制可能与miR-155靶向FOXO1,抑制线粒体自噬,促进足细胞氧化应激损伤有关。

我院2012年医院感染病例调查分析

目的了解医院感染的易感人群、易感部位、易发时间和其他相关因素,以便更好地预防和控制医院感染。方法按《实用医院感染病例监测》的要求对2012年全年的出院患者进行医院感染情况调查。结果 2012年全年我院出院患者人数为52 800例次,发生医院感染者为1 126例次,医院感染率为2.13%,全年各个病区皆有医院感染情况发生,但是医院感染主要分布在儿科、肾内科、神经消化内科、肿瘤科、重症监护病区等;发生医院感染的部位以呼吸道感染为主,呼吸道感染729例次,占64.74%,其中上呼吸道感染269例次,占23.89%,下呼吸道感染460例次,40.85%;其次是泌尿道感染(6.57%)和手术部位感染(6.04%);全年四个季度均有医院感染发生,且各季度的医院感染率各不相同,其中第一季度的医院感染率最低(1.34%),第二季度的医院感染率小于第四季度。结论只有各科室的医务人员加强对医院感染相关知识的培训和学习,提高预防和控制医院感染的意识,认真贯彻落实预防和控制医院感染的各项制度措施,积极开展预防和控制医院感染的各种活动,才能防止或减少医院感染的发生。

民用建筑外墙防渗漏施工措施

民用建筑外墙渗漏的原因复杂,渗漏的源头很难判断确切,因此施工过程控制极其重要。本文分析民用建筑外墙渗漏常见原因,并着重对预防渗漏的施工措施加以阐述。

施工缝的设置与处理方案

施工缝指的是在混凝土浇筑过程中,因设计要求或施工需要分段浇筑,而在先后浇筑的混凝土之间所形成的接缝。设置施工缝应该严格按照规定,认真对待。介绍施工缝的设置及施工,希望对相关施工有所帮助。

神经内科抗菌药物应用调查及相关因素分析

目的了解医院抗菌药物专项整治活动的实施效果,为抗菌药物的合理应用提供依据。方法回顾性调查2012年1～12月神经内科二病区965名出院患者的基本用药情况,以限定日剂量(DDD)分析法对用药频率(DDDs)和使用强度(AUD)进行统计分析。结果 2012年1～12月AUD均<40DDD;标本送检率均>30.0%,DDDs排序前3位的药物分别为注射用头孢曲松钠(进口)、头孢呋辛酯片、乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液。结论某院神经内科抗菌药物临床使用中以β-内酰胺类抗菌药物占主导地位,抗菌药物使用强度符合卫生部要求;随着抗菌药物的大量使用,细菌耐药性不断发展,医院加强抗菌药物的临床应用监管力度,严格按照《抗菌药物临床应用指导原则》合理使用,使抗菌药物的使用越来越规范。

miR-155在TGF-β1诱导足细胞损伤中的表达及其与synaptopodin、CD2AP表达的相关性

目的:探讨TGF-β1诱导的足细胞损伤中miR-155的表达变化及其与足细胞损伤的关系。方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,用TGF-β1刺激足细胞构建足细胞损伤模型,用CCK8法检测各浓度梯度(0、4、8、12 ng/ml)、时间梯度(0、24、48、72 h)的细胞增殖活性。实时荧光定量PCR技术检测足细胞损伤模型中synaptpotodin、CD2AP mRNA及miR-155的表达。Western blot法检测足细胞损伤模型中synaptpotodin、CD2AP蛋白的表达。结果:一定浓度的TGF-β1可抑制足细胞增殖,降低细胞存活率(P <0. 05)。TGF-β1诱导的足细胞损伤模型中miR-155表达水平上调(P <0. 05),TGF-β1诱导足细胞损伤后,可引起synaptpotodin、CD2AP mRNA和蛋白表达水平下调,且与miR-155表达水平呈负相关(P <0. 05)。结论:miR-155表达上调与TGF-β1诱导的足细胞损伤有关,可能作为足细胞损伤诊断和治疗的靶点。

U0126对TGF-β1诱导足细胞炎症因子分泌和miR-155表达的影响

目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(erk)1/2通路抑制剂U0126对转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导足细胞炎症因子分泌和微RNA(microRNA,miR)-155表达的影响。方法 体外培养小鼠足细胞,随机分为正常对照组、TGF-β1组和TGF-β1+U0126组,使用Westernblot法检测erk1/2磷酸化水平,ELISA法检测足细胞上清TNF-α及IL-6蛋白表达水平,RT-qPCR法检测足细胞miR-155表达水平。结果 与正常对照组相比,TGF-β1诱导足细胞后,erk1/2磷酸化水平明显上升,足细胞上清IL-6和TNF-α蛋白分泌增多,足细胞miR-155表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β1组相比,TGF-β1+U0126组erk1/2磷酸化水平被抑制,足细胞上清IL-6和TNF-α蛋白分泌减少,足细胞miR-155表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 erk1/2通路抑制剂U0126可抑制足细胞炎症因子IL-6、TNF-α分泌,下调足细胞miR-155的表达。

肠道微生物菌群与足细胞损伤的研究进展

原发性或继发性肾小球疾病均能造成足细胞损伤,而足细胞是肾小球滤过屏障的主要组成部分,也是肾小球疾病防治的关键靶点。目前,肾小球疾病的治疗仍以免疫抑制剂为主,其毒副作用不可避免。随着“微生物组基因计划”的开展,人类微生物菌群对人类健康和疾病的影响得到了更深入的研究,也成为医学科学研究领域的热点之一。研究成果不仅强调了免疫和饮食在肠道微生物菌群组成中的重要作用,同时也表明了肠道微生物菌群对宿主的营养、肥胖、代谢、免疫功能有着很大程度的影响。近年来,肠道微生物菌群在肾脏生理学和病理生理学中的作用已被揭示,肠道微生物菌群组成和结构发生变化,会使其产生的毒性代谢产物积聚,随之免疫炎症失调促进足细胞损伤和肾脏功能障碍。尽管目前确切的发病机制尚未完全清楚,但是肠道微生物代谢组学在足细胞损伤的新见解将会为足细胞的防治提供新的理论依据和策略。现就肠道微生物菌群在足细胞损伤中的研究现状进行综述。

某药物对铅染毒小鼠抗氧化作用的实验研究

目的研究某药物对铅染毒小鼠抗氧化作用的影响。方法用醋酸铅水溶液为小鼠腹腔注射染毒。然后将染毒小鼠分成治疗1组、治疗2组和模型组,另设正常组。治疗1组、治疗2组用不同剂量的某药物灌服治疗。实验结束,从眼球取血,分离血清。处死动物后,取大脑制成10%脑匀浆。测定各组血、脑超氧化物歧化酶(SOD)、脑谷胱甘肽(GSH)、乙酰胆碱酯酶(TCHE)等生化指标。结果血清总SOD活力模型组明显低于其他各组,差异有统计学意义(P<0.01);脑SOD活力正常组和治疗1组明显高于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);脑GSH含量模型组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01);脑TCHE活力治疗1组明显低于正常组和治疗2组,差异有统计学意义(P<0.01);脑铅含量模型组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)模型组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01);血清尿素各组间比较,差异无统计学意义。结论治疗1组和治疗2组的血清SOD、ALT、脑SOD,脑铅和GSH均接近正常组,与不治疗的模型组比较,差异有统计学意义,治疗后小鼠抗氧化能力和肝功能均得到保护。