食管鳞癌Eca109细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路对LSD1的调控作用

目的:探讨食管鳞癌Eca109细胞中PI3K/AKT/m TOR信号通路对LSD1的调控作用。方法:用不同浓度的PI3K/Akt/m TOR信号通路抑制剂LY294002(0.5、1.0、5.0、10.0、20.0和50.0μmol/L)、RAD001(0.05、0.50、5.00、10.00、20.00和50.00μmol/L)分别处理Eca109细胞24、48 h,采用CCK-8实验检测细胞增殖;然后分别用0、10、20μmol/L LY294002或RAD001处理Eca109细胞24 h或20μmol/L LY294002或RAD001处理不同时间(0~72 h),采用Western blot检测PI3K/Akt/m TOR信号通路因子、LSD1及组蛋白H3K4me2表达的变化。结果:LY294002、RAD001处理后,食管鳞癌细胞增殖受抑,且随浓度的增加,抑制作用有增强的趋势(P<0.05);LY294002抑制Eca109细胞中p-p70S6K的表达,上调Raptor、Rictor、p-Akt(Ser473)以及组蛋白H3K4me2的表达;而RAD001抑制了Raptor、Rictor、p-p70S6K表达,增加p-Akt(Ser473)的表达,并且下调LSD1表达,上调组蛋白H3K4me2的表达(P<0.05)。结论:PI3K/AKT/m TOR信号通路对LSD1存在调控作用。

网络药理学结合分子对接技术探索灭幽汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的作用机制

目的:探讨中药制剂灭幽汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的潜在作用机制。方法:运用TCMSP、TCMID数据库以及相关文献检索灭幽汤所含活性成分及对应的靶点。运用Genecard数据库检索幽门螺杆菌相关性胃炎的疾病相关靶点。将活性成分靶点与疾病靶点相互映射取交集,得到灭幽汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的潜在作用靶点。将潜在作用靶点导入String数据库,分析蛋白间相互作用关系。运用Autodock Vina软件对活性成分与核心靶点进行分子对接,并用Pymol软件进行对接结果可视化。将潜在作用靶点导入Metascape数据库进行GO和KEGG富集分析。结果:共获得灭幽汤活性成分62种,主要活性成分有槲皮素、柚皮素、川陈皮素、β-谷甾醇和木樨草素。治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的潜在靶点共97个,其中核心靶点10个。分子对接结果显示,主要活性成分与前列腺素内过氧化物酶2(PTGS2)、肿瘤蛋白P53(TP53)、丝/苏氨酸蛋白激酶B1(AKT1)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)结合活性较好。KEGG结果显示潜在作用靶点主要通过调控癌症途径、IL-17信号通路、NF-κB信号通路等发挥治疗作用。结论:灭幽汤主要活性成分包括槲皮素、柚皮素、川陈皮素、β-谷甾醇和木樨草素,通过多个靶点和多条通路发挥治疗作用。

食管鳞癌细胞中LSD1通过与Notch靶基因启动子结合调控Notch通路相关蛋白表达

目的:探讨食管鳞癌细胞中LSD1对Notch信号通路的调控作用及调控机制。方法:Western blot法检测5种食管鳞癌细胞KYSE450、KYSE790、Eca109、EC9706和TE-1中LSD1及Notch通路相关蛋白的表达情况。用LSD1抑制剂TCP处理KYSE450、KYSE790和Eca109细胞或用LSD1 siRNA处理Eca109细胞,Western blot检测处理前后细胞中LSD1、组蛋白H3K4me2和Notch信号通路相关蛋白的表达情况。结果:5种食管鳞癌细胞中均存在LSD1及Notch信号通路相关蛋白的表达,且表达水平不同;TCP处理后,与未处理组相比,KYSE450、KYSE790和Eca109细胞中LSD1的表达水平均降低,组蛋白H3K4me2表达升高,Notch信号通路相关蛋白的表达均降低(P<0.05);LSD1 siRNA同样使Eca109细胞中LSD1与Notch信号通路相关蛋白表达受到抑制(P<0.05)。结论:食管鳞癌细胞中LSD1对Notch信号通路有调节作用,且LSD1可能是通过与Notch靶基因Hes1的启动子区域结合实现的。

miR-199a-3p对Eca109和KYSE450细胞周期和迁移的影响

目的:观察miR-199a-3p对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法:常规培养Eca109和KYSE450细胞,分别转染miR-199a-3p mimics及miR-199a-3p mimics negative control(阴性对照)。采用qRT-PCR法检测3组细胞中miR-199a-3p的表达水平,并用流式细胞术及划痕实验分别检测细胞周期及细胞迁移能力,用Western blot检测细胞中m TORC2信号通路相关蛋白[m TOR、Rictor、PI3K、p-Akt(T308)、p-Akt(S473)]的表达。结果:与阴性对照相比,转染miR-199a-3p mimics后,Eca109和KYSE450细胞中miR-199a-3p表达量增加;G1期细胞增多,细胞相对迁移率降低,m TOR和Rictor蛋白的表达水平降低,而PI3K、p-Akt(T308)和p-Akt(S473)蛋白的表达水平升高(P均<0.05)。结论:miR-199a-3p可能通过调控m TORC2信号通路来影响食管鳞癌细胞周期进程及细胞迁移。

miR-199a-3p在食管鳞癌细胞中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-199a-3p在食管鳞癌细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Realtime PCR法检测miR-199a-3p在5株食管鳞癌细胞TE1、Eca109、EC9706、KYSE450、KYSE790中的表达。用siRNAMateTM转染试剂将人工合成的miR-199a-3p模拟物mimics转染Eca109、EC9706细胞后,采用Real-time PCR法检测miR-199a-3p的表达,采用克隆形成实验、CCK-8法及双染法检测细胞克隆形成能力、增殖能力和凋亡率,Western blot检测m TOR、p-p70S6K和Bcl-2蛋白的表达。以未转染细胞为空白对照,以转染mimics阴性对照的细胞为阴性对照。结果:miR-199a-3p在5株食管鳞癌细胞中均有表达,表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和阴性对照组细胞相比,转染mimics的Eca109和EC9706细胞中miR-199a-3p相对表达量显著升高(P<0.001),细胞克隆形成能力降低(P<0.001),细胞增殖能力降低(P<0.001),细胞凋亡率增加(P<0.001),m TOR、p-p70S6K及Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:miR-199a-3p可能是通过调节m TORC1/p70S6K信号通路来抑制食管鳞癌细胞的增殖并促进细胞的凋亡。

奥沙利铂+替吉奥对进展期胃癌患者近期疗效及血清CTC、IGF-1、MMP-9水平的影响

目的探讨奥沙利铂+替吉奥对进展期胃癌患者近期疗效及血清循环肿瘤细胞(CTC)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法将进展期胃癌患者102例随机分为研究组与对照组,各51例,对照组给予替吉奥治疗,研究组给予奥沙利铂+替吉奥治疗,观察比较两组治疗后的临床疗效,检测两组治疗前后血清肿瘤标志物[糖类抗原50(CA50)、糖类抗原125(CA125)]、血清CTC、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)、IGF-1水平,记录两组治疗期间不良反应的发生情况。结果经治疗后,研究组疾病总控制率明显高于对照组(P<0.05),血清CA50、CA125、CTC、MMP-9、VEGF、IGF-1水平均明显低于对照组(P<0.05)。两组治疗期间不良反应无明显差异(P>0.05)。结论奥沙利铂+替吉奥能提高进展期胃癌患者近期疗效,抑制肿瘤增生,降低肿瘤侵袭力,且不会明显增加不良反应,具有较高的用药安全性。