Pyrococcus furiosus耐热淀粉酶工程菌的构建及直链麦芽寡糖的制备

为了制备特定长度的直链麦芽寡糖,利用PCR方法得到了极端耐热古生菌激烈热球菌Pytococcus furiosus的耐热淀粉酶基因pfta,对其进行序列分析表明,其编码区含有1938 bp,编码含645个氨基酸残基的蛋白质。将该基因系列与表达载体pT7473连接,构建重组质粒pT7473-pfta,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主表达。重组菌株经诱导表达后SDS-PAGE电泳结果显示有明显的分子量约76 kD的特异蛋白条带出现。表达的蛋白经过金属镍离子亲和层析纯化后电泳鉴定出现的条带与预期相符。以环糊精为原料,利用获取的PFTA的单点水解开环反应活性,在90℃、pH5.0、10 min的条件下,能够生产出特定长度的直链麦芽寡糖。