免疫佐剂MF59稳定性的优化及其局部免疫调节效果比较

目的:观察不同匀浆速度下制备的佐剂MF59的物理学性状并比较其免疫调节效果。方法:将角鲨烯、司盘85、Tween-80按一定比例溶于柠檬酸缓冲液,分别经5000、10000、15000、20000和25000 r/min的转速搅拌及超声乳化,显微镜下观察乳化剂颗粒大小及稳定性。将上述MF59乳化剂与卵清蛋白水溶液进行混合,分别在BALB/c小鼠左、右后肢腹股沟进行皮下免疫,采用ELISA检测总IgE抗体、IFN-γ、IL-4含量。同样方法注射MF59于小鼠右后肢,同时设PBS组,注射等量的PBS,HE染色观察巨噬细胞募集情况。结果:5000、10000、15000、20000和25000r/min及超声乳化制备的MF59颗粒直径分别约为<16.5、<10.2、<5.6、<1.3、<0.5和<0.38μm,静置24 h后外观均无改变;静置30 d后,5000、10000r/min条件下制备的MF59底层出现明显澄清现象,但未出现分层。25000r/min组和超声乳化组IgE抗体高于其他组(P<0.01)。15000r/min组IFN-γ水平均高于其他组(P<0.05);超声乳化组IL-4表达水平最高(P<0.05)。PBS组、5000 r/min组及10000 r/min组的组织切片中均未观察到巨噬细胞;15000~25000r/min组和超声乳化组仅在皮下组织切片中观察到巨噬细胞,且超声乳化组[(16.10±5.30)个/视野]多于其他3组(P<0.01)。结论:MF59颗粒越小稳定性越高;5000~15000r/min制备的MF59易诱导Th1型免疫应答,>20000r/min和超声乳化制备的MF59易诱导Th2型免疫应答,且募集巨噬细胞的能力优于前者。

linc00619通过AKT/ERK信号抑制BEAS-2B细胞的增殖和迁移

目的:探讨长链非编码RNA 00619(linc00619)在人肺上皮细胞BEAS-2B中的生物学作用。方法:用RNA原位杂交对linc00619进行BEAS-2B亚细胞定位;采用CRISPR/Cas9方法构建linc00619慢病毒敲除载体,CCK8和Transwell试验检测linc00619敲除对BEAS-2B增殖和迁移的影响;lncRNA芯片检测linc00619敲除后差异表达的mRNAs并进行KEGG富集分析;Western blot检测AKT、MEK和ERK等增殖相关分子。结果:linc00619定位于细胞质。linc00619敲除促进了BEAS-2B的增殖和迁移。linc00619敲除后得到了3461个差异表达mRNAs。共有922个mRNAs被富集进KEGG信号通路,其中MAPK信号是显著富集的信号之一。Western blot证实,linc00619敲除活化了AKT和ERK。结论:细胞质表达的linc00619通过抑制AKT/ERK信号抑制了BEAS-2B的增殖和迁移。