Loop结构引入半胱氨酸对木聚糖酶XynASP热稳定性的影响

为了探究Loop结构引入半胱氨酸对GH11家族木聚糖酶热稳定性的影响,以溶糖曲霉(Aspergillus saccharolyticus)JOP 1030-1木聚糖酶XynASP Loop结构为研究对象,通过定点突变技术,将第95位点天冬酰胺(Asn)突变成半胱氨酸(Cys),获得突变体XynN95C,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达。酶学性质分析结果表明,突变体XynN95C最适温度为50℃,酶活性半衰期t_(1/2)^(40℃)为38 min,相比野生型XynASP分别提高了5℃、18 min,最适pH从6.0降至5.0。另外,XynN95C的金属离子耐受性较强,经Fe^(3+)处理1 h,相对酶活性为93.9%,较野生型(65.9%)明显提高。由此得出,在Loop结构引入半胱氨酸可有效提高木聚糖酶的热稳定性,这为GH11家族木聚糖酶的热稳定性改造又提供一新思路。