BC047440-siRNA对肝癌HepG2细胞增殖抑制及其分子机制的初步探讨

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌相关基因BC047440的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响并初步分析其抑制增殖的分子机制。方法设计针对BC047440基因的siRNA,构建pGenSil-1-BC047440-siRNA真核表达载体。分别用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenSil-1-BC047440-siRNA、空载体质粒pGenSil-1转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;随后实验分为3组:转染siRNA表达载体组(PP2)、转染空质粒组(PP1)和未处理的亲本HepG2细胞组(PP0)。采用荧光定量PCR检测BC047440mRNA表达变化;CCK-8分析细胞增殖活性;平板克隆形成实验检测单个细胞的增殖能力;最后选取NF-κB下游增殖相关基因c-myc、bcl-2、cyclin D1,用荧光定量PCR检测其mRNA水平的变化。结果成功转染并获得PP1、PP2组抗性克隆,PP2组与PP0组比较,BC047440mRNA水平明显降低,抑制率约为75%;细胞增殖实验中PP2组细胞增殖能力明显降低,平板克隆形成实验结果显示PP2组克隆形成率为(8.42±0.82)%,明显低于PP1组[(39.31±5.39)%]和PP0组[(40.96±3.21)%](P<0.01)。检测NF-κB下游增殖相关的几个基因时发现PP2组c-myc mRNA表达明显降低,约为PP0组的12/25;其余基因无明显变化。结论干扰BC047440基因表达可以抑制肝癌细胞的增殖,初步揭示BC047440基因可以对c-myc起正向调控作用,从而促进肝癌细胞的增殖,提示抑制BC047440基因可能成为控制人肝癌细胞生长的有效靶点。

托出式胰后入路脾门淋巴结清扫在腹腔镜胃癌根治术中的临床应用

目的探讨经腹腔镜胰后入路脾托出式脾门淋巴结清扫术在近端胃癌根治术中应用的可行性、安全性,并初步分析其解剖特点。方法采用回顾性队列研究方法,收集2014年6月至2017年1月宜宾市第二人民医院收治的84例进展期近端胃癌患者的临床资料。其中44例为观察组,采用经腹腔镜托出式胰后入路法;40例为对照组,采用经腹腔镜左侧入路法。所有手术均由同一团队完成。观察并比较2组患者手术情况、术后情况、随访情况。结果 84例患者均顺利完成根治性全胃切除术(D2根治术),成功保留脾,完成第10组淋巴结清扫,未中转开腹。观察组与对照组术中出血量分别为(107.9±52.9)m L和(153.1±72.2)m L,手术时间分别为(228.8±27.7)min和(244.7±31.3)min,第10组淋巴结清扫数量分别为(5.0±2.2)枚和(2.9±1.3)枚。2组术中出血量、手术时间、第10组淋巴结清扫数量比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组与对照组术后首次下床活动时间分别为(1.6±0.4)d和(1.5±0.4)d,术后肛门排气时间分别为(2.9±0.8)d和(2.6±0.5)d,术后住院时间分别为(7.5±1.4)d和(7.0±1.3)d。观察组术后发生并发症4例,对照组术后发生并发症5例,均经非手术治疗痊愈。2组术后首次下床时间、肛门排气时间、术后住院时间、并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。84例患者中共82例获得随访,随访时间为6~36个月,中位随访时间为15.5个月,随访中2组分别有1例因癌性腹水死亡。结论经腹腔镜胰后入路脾托出式脾门淋巴结清扫术可行性较高,与常规腹腔镜左侧入路相比,能减少术中出血量,缩短手术时间,增加第10组淋巴结清扫率。

肿胀麻醉技术在腹股沟疝腹膜前间隙修补术中应用的回顾性分析

目的评价肿胀麻醉技术在腹股沟疝腹膜前间隙修补手术的疗效及安全性。方法回顾性分析本院2012年1月至2016年3月诊断为腹股沟疝患者的临床资料。根据病例资料术中麻醉方法不同分为两组,采用0.5%利多卡因的常规局部麻醉(LA组)和采用肿胀麻醉(TLA组),均使用强生公司疝修补装置(ultrapro hernia system,UHS)补片行腹膜前间隙修补完成手术。以手术时间、术中利多卡因的使用剂量、术后镇痛效果持续时间、术后3 d疼痛消失例数、术后1 d止痛药使用例数、术后7 d疼痛发生例数,以及术后并发症发生率作安全性指标。结果共筛选出86例术中采用常规局部麻醉的临床资料,98例术中采用肿胀麻醉的临床资料。两组的一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组均顺利完成手术,未出现局麻中毒反应,术中均未更改麻醉方法。TLA组利多卡因使用量和手术时间明显低于LA组[(140±8)mg vs(278±9)mg;(41±7)min vs(48±7)min,P<0.01],术后镇痛持续时间长于LA组[(4.2±0.8)h vs(1.2±0.3)h,P<0.01],TLA组术后1 d使用镇痛药物的比例低于LA组(P<0.01),两组术后3 d疼痛消失例数、持续性疼痛发生率,术后并发症发生率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论肿胀麻醉在腹股沟疝腹膜前修补术中缩短了手术时间,减少了利多卡因用量,有良好的术中麻醉镇痛效果以及安全性,术后镇痛持续时间优于常规局部麻醉。

肝细胞移植的研究进展

目的研究肝细胞移植的临床应用及其最新研究进展。方法对有关肝细胞移植的文献进行综述分析。结果肝细胞移植经过几十年的发展与临床运用,出现了以基因修饰细胞作为种子细胞,结合高分子材料的皮下移植、包囊化预处理等新技术与新进展。结论随着肝细胞移植研究的深入以及基因技术和高分子材料的运用,肝细胞移植作为一种治疗急、慢性肝病的方法有着广泛的临床应用前景。

探究腹腔镜胃十二指肠溃疡穿孔修补术的临床应用价值

目的分析在胃十二指肠溃疡穿孔患者治疗中行腹腔镜修补手术治疗的有效性。方法分析2016年12月-2017年12月收治的88例胃十二指肠溃疡穿孔患者的临床资料,患者手术均由同一手术团队施行,对照组44例患者采用传统开腹手术治疗,实验组44例患者行腹腔镜修补手术治疗。观察指标:手术时间,术后肛门排气时间,首次下床时间,术后住院时间,术后并发症。结果实验组与对照组手术时间分别(42.25±5.48)min和(63.29±7.51)min;首次下床活动时间分别为(1.5±0.4)d和(3.5±0.4)d,术后肛门排气时间分别为(1.8±0.8)d和(3.6±0.5)d,术后住院时间分别为(4.2±1.4)d和(8.0±1.3)d。实验组与对照组分别有两例并发症,实验组中发现2例麻痹性肠梗阻,对照组中1例麻痹性肠梗阻,1例腹腔脓肿,均保守治疗治愈。结论腹腔镜胃十二指肠溃疡穿孔修补手术时间短,术后恢复快。

BC047440基因通过NF-κB调节HepG2细胞增殖的初步研究

目的观察BC047440基因能否通过增强NF-κB的活化而促进HepG2细胞的增殖。方法设计针对BC047440基因的小干扰RNA(siRNA),构建pGenesil-1-BC047440-siRNA真核表达载体,用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenesil-1-BC047440-siRNA、pGenesil-1-HK-siRNA转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;实验分为3组:转染siRNA表达载体组、无关质粒组和未处理的亲本HepG2细胞组。采用平板克隆形成实验分析细胞的增殖活性,通过Western blot检测细胞质p50含量,EMSA检测NF-κB的核转位,荧光素酶试验检测各组细胞的NF-κB活化情况。结果细胞增殖实验显示转染siRNA组细胞增殖能力明显降低,BC047440基因沉默后的HepG2的细胞质p50含量低于野生株HepG2,NF-κB核转位低于野生株HepG2,其荧光素酶和海肾荧光素酶活性比值只有野生株的1/4。结论BC047440基因能促进肝癌细胞的增殖,其调节机制可通过NF-κB信号途径实现,提示BC047440基因可能成为抑制人肝癌细胞生长的有效靶点。

新基因BC047440在多种肿瘤组织中的表达及其意义

目的探讨新基因BC047440在多种恶性肿瘤及对应癌旁组织中的表达,对该基因的癌表达谱进行初步研究。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测肝癌、胆管癌、胃癌、大肠癌、神经胶质瘤、乳腺癌及其相对应的癌旁组织中BC047440 mRNA的表达。结果在48例肿瘤中,BC047440基因的mRNA表达在肝癌、胃癌、胆管癌、大肠癌中较其对应癌旁组织高,差异有统计学意义(P<0.05或0.01);在神经胶质瘤及瘤旁脑组织中均呈高表达,表达量差异无统计学意义(P>0.05);在乳腺癌及其对应癌旁组织中不表达或低表达(P>0.05)。临床病理学分析提示,BC047440基因的表达水平与肝癌及胃肠道肿瘤的生长、侵袭和转移能力有关。结论BC047440基因在肝癌、胃癌、胆管癌、大肠癌及神经胶质瘤中广泛高表达,在这些肿瘤发病过程中可能是一个通过表达升高而发挥功能的结构基因。

腹腔镜腹壁切口疝无张力修补术47例回顾

目的:探讨腹腔镜腹壁切口疝无张力修补术的手术方法及临床效果。方法:回顾分析2006年2月至2011年8月为47例患者行腹腔镜腹壁切口疝无张力修补术的临床资料。结果:41例(87.23%)顺利完成手术;6例中转开腹,其中2例小肠肠管破裂,1例腹腔内粘连广泛无法分离,3例肠管与腹壁及切口粘连致密无法分离。手术时间34～158 min,平均76 min。术后住院4～13 d,平均8.6 d。术后34例(72.34%)腹壁钉合区域腹壁疼痛,3例(6.38%)疼痛达2个月以上;14例(29.79%)发生浆液肿;无手术死亡、切口感染、补片感染及肠漏发生。随访8～46个月,平均13个月,无一例复发。结论:腹腔镜下松解腹腔内粘连,采用钉合器或钉合器加缝线贯穿腹壁双重固定补片法修补腹壁切口疝安全、有效,腹腔粘连严重分离困难的患者应及时中转开腹。

皮粘膜瓣痔切除术治疗环状混合痔的临床观察

目的观察皮粘膜瓣痔切除术治疗环状混合痔的临床疗效。方法将符合《痔诊治暂行标准》中，诊断Ⅲ期内痔及以上环状混合痔且具备手术指征的81例患者，采用原住皮粘膜瓣修复肛管（垫）术，手术后随访18～24个月。结果81例采用皮粘膜瓣痔切除术治疗组术后愈合时间为11天，与对照组相比无差异；术后出血1例，明显低于对照组；未出现术后肛门狭窄、粘膜外翻及复发病例。结论皮粘膜瓣痔切除术是临床治疗环状混合痔的有效方法，值得推广应用。

肛瘘管切除加异体脱细胞真皮基质填塞治疗肛瘘的临床对比观察

目的观察肛瘘管切除+异体脱细胞真皮基质材料治疗肛瘘的临床效果。方法将50例行肛瘘管切除+异体脱细胞真皮基质材料填塞进行治疗的肛瘘患者作为治疗组,与50例单纯行肛瘘管切除术的对照组行临床疗效对比观察。结果两组比较,在治愈率、愈合时间、肛门畸形率及复发率有差异(P<0.05),治疗组明显优于对照组。结论应用肛瘘管切除+异体脱细胞真皮基质材料治疗肛瘘,具有治愈率高、疗程短和不损害肛门功能及外形的优势,可在临床推广应用。

腹腔镜与传统开腹术联合淋巴结清扫治疗进展期老年胃癌的疗效、预后及安全性评估

目的探讨腹腔镜与传统开腹术联合淋巴结清扫对进展期老年胃癌患者的根治疗效、预后及安全性。方法本研究共招募80例进展期老年胃癌患者,其中腹腔镜组施行腹腔镜下胃癌D2淋巴结清扫术,传统开腹组进行开腹胃癌D2淋巴结清扫术进行治疗。观察2组患者围术期指标,以及第10组和11组淋巴结清扫时间、检出数、阳性数、阳性率及转移率等。治疗后3年内定期随访,记录患者生存情况及生活状态。对相关数据进行统计学分析。结果腹腔镜组的手术时间显著长于开腹组,第10、11组淋巴结的清扫时间也显著高于开腹组(P <0. 05)。开腹组的术中出血量、术后首次排气时间、肠胃功能恢复时间及住院时间均显著高于腹腔镜组(P <0. 05)。此外,开腹组患者术后并发症(17. 5%)显著高于腹腔镜组(7. 5%)(P <0. 05)。术后7天,腹腔镜组患者的生活质量优于开腹组(P <0. 05)。2种手术方式的总体淋巴结检出数,第10、11组淋巴结检出数,第10、11组淋巴结阳性率及第10、11组淋巴结转移率无显著性差异(P> 0. 05)。2组患者3年生存率无统计学差异(P> 0. 05)。结论腹腔镜下全胃切除D2淋巴结清扫对老年进展期胃癌患者的预后及安全性方面均有优势。

从上到下“翻页式”腹腔镜右半结肠D_3根治术临床体会

目的:探讨经上下入路"翻页式"腹腔镜右半结肠D3根治性切除的手术路径要点及临床意义。方法:回顾分析2012年2月至2014年2月为102例右半结肠癌患者行经上下入路"翻页式"腹腔镜右半结肠D3根治术的临床资料。结果:95例(93.14%)患者顺利完成手术,7(6.86%)例中转开腹。术中清扫时间42~96 min,平均(78.2±11.3)min。术中出血量10~40 ml,平均(24.3±6.4)ml。清扫淋巴结11~46枚,平均(20.9±5.5)枚。术后肛门排气时间17 h^8 d,平均(64.8±27.3)h;术后住院7~13 d,平均(9.8±2.1)d。术后发生吻合口漏1例(0.98%)、切口脂肪液化2例(1.96%),均经治疗后痊愈,无围手术期死亡病例。结论:经上下入路"翻页式"腹腔镜右半结肠D3根治性切除术显露方便,对助手的腹腔镜经验要求较低,术中有良好的参照作为引导,清扫较流畅,很好地体现了"无瘤原则",达到了腹腔镜右半结肠D3根治手术的基本要求,且降低了腹腔镜右半结肠癌手术的难度,手术安全、可行,具有一定的临床实用价值。

腹部手术留置尿管时间的选择

目的探讨腹部手术围手术期留置尿管的时间。方法纳入符合入选标准80例全麻下行腹部手术的患者,行术前麻醉后置放尿管,术后麻醉复苏前拔除尿管。术后观察尿潴留及膀胱刺激症状。结果 80例术后患者75例均能自行排尿,仅5例再次置放尿管。=3.3,P>0.05,差异没有统计学意义。术后1d,发生膀胱刺激症状5例,与术前比较=72.05,P<0.01,v=1,二者差异有统计学意义;术后3d,发生膀胱刺激症状2例,与术前比较=0.01,P>0.05,v=1,二者差异没有统计学意义。术后7d,发生膀胱刺激症状1例,与术前比较=0.01,P>0.05,二者没有统计学意义。结论全麻腹部手术,术前麻醉后置放尿管、术后麻醉复苏前拔除尿管,不会导致排尿困难,能减少膀胱刺激症状。

痔PPH荷包缝合高度与疗效关系的临床探讨

目的:研究痔PPH荷包缝合高度与疗效的关系。方法:通过2年时间将符合《痔诊治暂行标准》诊断痔在Ⅲ期及以上环状混合痔且具备痔PPH手术指征的72例患者,分为三组,荷包缝合线的高度分别在肛齿状线上2、3、4cm。结果:痔PPH荷包缝合线高度在2～3cm时,痔核消失或萎缩及症状改善时间明显缩短,术后不易发生肛门狭窄等并发症。结论:痔PPH荷包缝合线高度在2～3cm时,手术效果最佳。结论:2～3cm是痔PPH手术荷包缝合线一个较好的选择高度。

一次性胸腔引流瓶自体血回收在腹腔内出血行探查性手术中的应用

目的探讨利用一次性胸腔闭式引流瓶自体血回收在腹腔内出血行探查性手术中的应用价值。方法将38例腹腔内出血行探查性手术的患者按入院顺序随机分成两组(各19例),观察组术中应用一次性胸腔闭式引流瓶进行血液回收,对照组应用自体-3000P型血液回收机进行血液回收,并比较两组患者血液回收效果及成本效益。结果观察组与对照组自体血回输分别为(1227.78±336.44)ml(n=9)与(1337.5±293.68)ml(n=8),差异无统计学意义;观察组与对照组因腹腔污染而弃去自体血分别为(1275±353.75)ml(n=10)与(1222.73±297.79)ml(n=11),差异无统计学意义;观察组与对照组血液回收的平均成本分别为,差异具有统计学意义。结论在腹腔内出血行探查性手术中应用一次性胸腔闭式引流瓶进行血液回收,可以充分有效利用自体血回输,为抢救患者赢得时间,并可节约医疗成本,具有较高的推广应用价值。

NOSES在结直肠癌手术中的近期疗效及安全性

目的 研究腹腔镜下结直肠癌根治术中经自然腔道取标本手术(NOSES)的临床疗效及安全性。方法 收集昆明医科大学第一附属医院肿瘤科2016年6月至2020年11月诊治的83例乙状结肠癌及直肠癌患者的临床资料,根据标本取出方式分为NOSES组(34例)和腹腔镜辅助(LAP)组(49例)。观察比较两组患者手术时间、术中出血量、术后住院天数、术后排便时间、淋巴结检出数目、术后合并严重并发症、术后合并切口感染、术后使用额外镇痛药物、切口满意程度是否存在差异。结果 两组间一般资料、手术时间、术中出血量、淋巴结的检出数目、术后合并严重并发症比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。NOSES组手术后排便时间较对照组提前,NOSES组术后住院天数少于LAP组,NOSES组额外使用镇痛药物占比低于LAP组,NOSES组切口满意占比高于LAP组,NOSES组术合并切口感染占比低于LAP组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 NOSES在结直肠癌根治术中是安全可行的,且具有更微创及减少术后并发症的优势。

胰后入路拖出清扫与原位清扫脾门淋巴结在D2全胃根治术中的对比分析

目的:评估腹腔镜D2全胃根治术中胰后入路拖出清扫脾门淋巴结的安全性及可行性。方法:回顾分析2016年1月至2018年1月收治的49例进展期近端胃癌患者,分为拖出组(n=24)与原位组(n=25),拖出组借助胰腺下缘肠系膜上血管处融合筋膜进入胰后间隙,并在此间隙向上、向左拓展,彻底游离胰腺体尾部、脾脏、网膜囊;通过上腹部取标本小切口拖出胰腺远端、脾脏进行脾血管周围淋巴结清扫。对比分析两组短期结局指标。结果:胰腺下缘与肠系膜上血管交界处作为辨别胰后间隙的解剖标志具有可行性。拖出组手术时间[(190.6±49.7)min vs.(248.0±71.0)min,P=0.002]更短;脾门淋巴结清扫数量[(3.8±2.6)vs.(2.0±1.3),P=0.007]更多,两组总体并发症发生率差异无统计学意义(P=0.791)。两组共清扫1425枚淋巴结,其中阳性377枚,39例(79.6%)存在淋巴结转移。结论:胰后入路拖出式清扫脾门淋巴结治疗进展期近端胃癌安全、可行,利于血管后方淋巴结的清扫。

腹腔镜辅助下直肠癌根治术的护理

目的总结腹腔镜直肠癌手术的护理配合经验。方法通过掌握腹腔镜相关设备、器械功能,术前与患者有效沟通、术中与手术者密切配合进行23例腹腔镜结直肠癌根治术并回顾总结。结果顺利完成20例腹腔镜辅助下直肠癌根治术,3例中转开腹手术。结论通过术前、术中的配合以及良好的设备保障,可以有效提高腹腔镜辅助下直肠癌根治术手术配合质量,保证手术顺利展开。

全麻腹部手术围手术期置放、拔除尿管的最佳时机的初步探讨

目的:探讨腹部手术围手术期留置尿管的理想时机。方法:纳入符合入选标准80例全麻下行腹部手术的病例,行术前麻醉后置放尿管,术后麻醉复苏前拔除尿管。术后观察尿潴留、膀胱刺激症状及术后1,3,7 d尿中白细胞的改变。结果:80例术后患者75例均能自行排尿,仅5例再次置放尿管。术后第1天,发生膀胱刺激症状5例,与术前比较,有统计学意义(P<0.01);术后第3,7天,发生膀胱刺激症状分别为2例和1例,与术前比较,无统计学意义(P>0.05)。术后第1,3,7天,尿中白细胞>10/HP者分别为2,5,4例,与术前比较均无统计学意义(均P>0.05)。结论:全麻腹部手术,术前麻醉后置放尿管、术后麻醉复苏前拔除尿管,不会导致排尿困难,能减少膀胱刺激症状及尿路感染率。

BC047440基因RNA干扰抑制肝癌HepG2细胞增殖

目的构建shRNA并干扰肝癌HepG2细胞中BC047440基因，观察其对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法根据BC047440基因序列，设计和合成两条特异表达该基因shRNA序列并克隆载体pGenesil-1，转染肝癌HepG2细胞并用定量PCR观察抑制BC047440基因表达的效果，并通过MTr法和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化。结果酶切和序列测定提示成功构建了特异表达BC047440基因的shRNA1和shRNA2两个质粒。shRNA1和shRNA2对BC047440mRNA的抑制率分别为80．22％和58．63％。干扰BC047440基因后，肝癌HepG2细胞增殖受到明显抑制，主要停滞在s期。结论构建的shRNA能有效干扰肝癌HepG2细胞BC047440基因的表达，并抑制肝癌HepG2细胞的增殖，提示BC047440基因和肝癌HepG2细胞增殖有关。