乳牙与恒牙牙髓干细胞成血管能力的比较

目的:探讨乳牙牙髓干细胞(SHED)和恒牙牙髓干细胞(DPSCs)成血管能力的差异。方法:体外分离培养SHED和DPSCs,采用CCK8和划痕实验检测两种细胞的增殖和迁移能力,Matrigel小管形成实验、RT-PCR以及Western blot检测成血管诱导后两种细胞的成血管情况。结果:SHED较DPSCs的增殖、迁移能力强,SHED较DPSCs在基质胶上形成更多的类血管样结构,SHED较DPSCs更高表达成血管相关基因(P<0.05)和成血管相关蛋白。结论:SHED较DPSCs具有更强的增殖、迁移及成血管能力。

晚期糖基化终产物通过调控F-actin/YAP抑制小鼠胚胎成骨细胞成骨分化

目的考察晚期糖基化终产物(AGE)对小鼠胚胎成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法用不同质量浓度(100、200、300 mg/L)AGE作用于MC3T3-E1细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用碱性磷酸酶(ALP)染色检测细胞成骨能力,采用qPCR检测成骨相关基因(骨钙素、ALP和Runx2)及Yes相关蛋白(YAP)和β-联蛋白的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测YAP和β-联蛋白的蛋白质表达,采用免疫荧光法观察YAP和β-联蛋白的细胞核内含量及细胞骨架蛋白纤丝状肌动蛋白(F-actin)的表达。结果MC3T3-E1细胞在200、300 mg/L AGE处理后增殖活性降低、凋亡率增加(P均<0.05),100 mg/L AGE对细胞增殖和凋亡无明显影响,故选取100 mg/L AGE进行实验。在成骨诱导培养条件下,与对照组相比,MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后ALP染色较浅,骨钙素、ALP和Runx2的mRNA表达均较低(P均<0.05)。在常规培养条件下,与对照组相比,MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后F-actin形态和分布发生明显改变;YAP的mRNA和蛋白质表达均无明显变化,但其细胞核内含量减少;β-联蛋白的mRNA和蛋白质表达均降低(P均<0.05),但其细胞核内含量无明显变化。结论AGE能抑制MC3T3-E1细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,降低成骨分化能力,F-actin、YAP和β-联蛋白参与其调控过程。

PVT1促进在胶质瘤C6细胞微环境中的BMSCs增殖和迁移

目的探讨与胶质瘤C6细胞间接共培养后骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和迁移能力的变化以及长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤变异异位基因1(plasmacytoma variant translocation 1 gene,PVT1)在这种变化中的作用。方法分离、培养、鉴定BMSCs后,采用Transwell小室将生长状态良好的BMSCs与胶质瘤C6细胞间接共培养(共培养组),单独培养的正常BMSCs为对照组。CCK8及软琼脂克隆形成实验检测2组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,划痕实验及Transwell法检测细胞的迁移能力,实时定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1基因的表达。在共培养组BMSCs中转染siPVT1(si-PVT1组)和si-NC(si-NC组),转染后重复上述检测,并增加qRT-PCR检测周期蛋白基因CyclinD1及迁移相关基因基质金属蛋白酶2、9(MMP2、MMP9)的表达。结果所用BMSCs具有成骨、成脂分化能力。与对照组相比,共培养组BMSCs体积变小,排列紊乱,细胞间接触抑制消失,增殖及迁移能力增强,S期及G2期细胞比例增加,PVT1表达增加(P<0.05)。与si-NC组比较,si-PVT1组抑制共培养BMSCs的增殖及迁移能力,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,PVT1、CyclinD1及MMP2、MMP9 mRNA表达也降低(P<0.05)。结论胶质瘤C6细胞微环境中BMSCs增殖及迁移能力增强可能与PVT1高表达有关。