草莓黄单胞菌RPA-LF快速检测方法的建立与应用

建立一种适用于田间稳定、快速、准确地检测草莓黄单胞菌的技术方法,有助于该病原菌的早期诊断和有效控制。将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)和胶体金侧流层析试纸条技术(lateral flow strip,LF)相结合。根据草莓黄单胞菌的限制性核酸内切酶亚基S基因序列保守区设计RPA特异引物及探针,通过对反应条件优化及对灵敏性、特异性与疑似样本的分析,成功建立了草1莓黄单胞菌RPA-LF检测方法。该方法最佳反应条件为39℃恒温反应10 min,最低检测限为1.0×10^(1)copies/μL,能够特异地检测出草莓黄单胞菌,从采集疑似症状植株到检测可在30 min内实现,而且用RPA-LF方法检测疑似样本结果与常规PCR检测方法一致。综上,建立的草莓黄单胞菌RPA-LF检测方法快速、简单、准确、可视化,可用于该病原菌的早期诊断。

小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因导入西瓜的遗传转化

研究了西瓜品种ZKM的再生体系和农杆菌介导小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellowmosaic virus,ZYMV)的外壳蛋白(cp)基因导入西瓜的遗传转化体系。结果表明,质量分数0.6%琼脂是适宜种子萌发的基本培养基,切取5d龄的西瓜无菌苗子叶为外植体,接种在MS+BA2.0mg/L诱导培养基上,诱导不定芽效率最高。选用75mg/L卡那霉素筛选西瓜抗性芽较为合适,外植体经预培养2～3d,菌液浓度以OD600nm值为0.4,共侵染10min有利于提高西瓜转化的效率。经PCR检测,ZYMVcp基因已经导入西瓜植株,转化频率为0.15%。

西瓜组织培养与遗传转化研究进展

西瓜是我国重要的经济作物,其面积和产量居世界水果前列。由于西瓜资源的遗传背景相对狭窄,对于一些重要病害缺乏可利用的抗性材料,采用转基因手段有助于创制新种质。转基因技术是生物遗传改良和基因功能验证的重要方法,而组织培养和遗传转化是植物转基因成功与否的2个前提条件。西瓜遗传转化采用的方法有多种,而农杆菌介导法应用最广泛。大量的研究表明,西瓜是被公认比较难于转化的作物,目前为止转化效率低仍然是阻碍西瓜转基因的主要瓶颈。本文分析了西瓜组织培养的影响因素,如西瓜的种子贮存时间、基因型、苗龄、外植体类型、激素组合、培养条件;同时分析了农杆菌介导法影响西瓜遗传转化效率的主要因素,包括筛选标记基因、农杆菌菌株类型、预培养时间、农杆菌侵染时间和浓度、共培养时间;探讨了目前西瓜组织培养和遗传转化体系所存在的问题,提出了今后的研究方向。

西州密25号哈密瓜叶片再生体系建立

以西州密25号哈密瓜的叶片作为外植体,探讨了不同激素组合、暗培养时间等条件对无菌条件下和温室培养条件下的材料诱导丛生芽及生根的影响,以期建立高效的哈密瓜叶片再生体系,为哈密瓜转基因技术提供适宜的外植体培养方法。结果表明,无菌条件下生长10 d的幼嫩叶片,在培养基MS+2.0 mg·L^(-1)BA+0.2 mg·L^(-1)IAA中诱导丛生芽效率相对较高,达14.8%;温室培养的哈密瓜植株叶片在MS+2.0 mg·L^(-1)BA+0.2 mg·L^(-1)IAA培养基中丛生芽诱导率高达85.2%。暗培养条件下均可以诱导丛生芽,其中暗培养12 d,丛生芽的诱导率最高,可以达到66.7%。哈密瓜生根相对容易,0.5~4 mg·L^(-1)IBA均可诱导生根,在培养基1/2 MS+1.0 mg·L^(-1)IBA中,生根效果最好,平均根数达到7.7,主根长达到9.6 cm,生根率达到100%。

苹果轮纹病菌种内遗传多样性研究

【目的】分析苹果轮纹病菌(Botryosphaeria berengeriana)的遗传多样性并确认其优势类群。【方法】对采集分离的64个菌株进行形态特征和致病性测定,对部分菌株的进行了ITS序列测序,采用ISSR分析这些菌株的遗传多样性。【结果】通过形态特征和致病性明确了所分离的64个菌株是苹果轮纹病菌。17个菌株ITS序列与贝格伦葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengeriana de Not f.sp.piricola(Nose)Koganezawa et Sakuma)的序列一致,并且被分成两个类型H1和H2。用13条ISSR引物从64个菌株中扩增出121条条带,其中88条多态性条带,多态性比率为72%。64个菌株的遗传相似性从0.44到0.99,并且被分成2个ISSR类群,类群1包含21个菌株、类群2包含43个菌株。【结论】本研究中贝格伦葡萄座腔菌的遗传多样性与菌株的地域、症状以及分离部位没有相关性。苹果轮纹病菌被分成2个ISSR类群,类群2是优势类群。

地高辛标记探针检测5种葫芦科作物病毒的斑点杂交方法

【目的】探索5种葫芦科作物病毒即小西葫芦黄花叶病毒(Zuccini yellow mosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番木瓜环斑病毒西瓜株系(Papaya ringspot viruswatermelon strain,PRSV-W)和南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)的斑点杂交检测技术,为葫芦科作物种子带毒的快速准确鉴定、流行病学研究和转基因检测等提供技术和方法。【方法】以构建的重组质粒为模板,用PCR方法合成了相应的地高辛标记的cDNA探针。通过斑点杂交检测西葫芦病叶汁液来考察探针的灵敏性和特异性。同时设计了3种不同长度的SqMV探针(0.55、1.6、2.7kb)对杂交效果进行了研究。【结果】ZYMV、WMV、CMV、PRSV-W和SqMV的5种探针检测各自侵染西葫芦病汁液的稀释低限分别为1﹕160、1﹕160、1﹕320、1﹕160、1﹕320,而每种探针与健康西葫芦和其它4种病毒的反应均为阴性。不同长度的SqMV探针杂交结果相同。【结论】用PCR方法合成的地高辛标记的探针,能够直接在植物组织中将5种病毒检测出来,具有较好的灵敏性、特异性和重复性。探针的长度对杂交的灵敏性和特异性没有影响。

新型冠状病毒肺炎与2型糖尿病炎性风暴特质的交互影响

目的 通过比较新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者伴或不伴2型并糖尿病(T2DM)的炎症指标、凝血功能及疾病转归的差异,讨论COVID-19合并2型糖尿病患者的炎性特质及其相互影响。方法 回顾性纳入2022年12月至2023年4月于太原市人民医院住院治疗确诊为COVID-19的轻型或普通型患者311例,其中T2DM组115例,选取同时段就诊的与之匹配的非糖尿病患者(对照组)196例。比较2组患者血细胞分析、炎症指标、凝血功能等实验室指标及核酸转阴时间、住院时间、是否使用激素等临床资料的差异。结果 T2DM组淋巴细胞计数水平低于对照组,中性粒细胞计数、C反应蛋白高于对照组(P<0.05);T2DM组D-二聚体显著升高(P<0.05);T2DM组核酸转阴时间及住院时间更长,使用激素者更多。结论 糖尿病是COVID-19发生的高危因素,新型冠状病毒感染增加了糖尿病患者的血糖调控难度。糖尿病合并COVID-19更容易发生“炎性风暴”,对患者的预后有严重的影响,住院时间更长,死亡风险大。

草莓新品种华艳的选育

华艳是以达赛莱克特为母本、章姬为父本经杂交选育而成的草莓新品种。该品种果实圆锥形,一级序果平均果质量29.3 g,整株平均果质量21.4 g,果面红色、光泽强,果肉橙红色。果实风味脆甜爽口,香气浓郁,全年平均可溶性固形物含量(w,后同)为12.6%,总糖含量7.18%,可滴定酸含量0.42%,果实硬度2.35 kg·cm^(-2),较耐贮运,果实适宜鲜食。华艳在河南郑州地区,9月上旬定植,果实始熟期为11月下旬。植株抗逆性较强,育苗容易。华艳是一个早熟、优质、丰产、抗白粉病、适合保护地促成栽培的草莓新品种。

甜瓜响应甜瓜坏死斑点病毒侵染的cDNA文库构建

为解析甜瓜坏死斑点病毒(melon necrotic spot virus,MNSV)与寄主甜瓜的互作,筛选病毒编码的蛋白与寄主的互作因子,构建了MNSV侵染的甜瓜cDNA文库。在甜瓜品种白玫子叶期接种MNSV,待植株表现典型的系统坏死斑点症状后,收集症状明显的整株甜瓜幼苗,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术合成cDNA,利用DSN(duplex-specific nuclease)对cDNA均一化处理后,首次构建了MNSV侵染甜瓜的cDNA文库并评价了文库的质量,文库容量为4.5×106 cfu,文库滴度为3.6×10^7 cfu·mL^-1,文库克隆重组率为100%,文库插入片段大小在500~2000 bp之间,说明文库质量很好。该文库的构建为解析MNSV与寄主互作及甜瓜响应MNSV的致病机制奠定了基础。

甲基磺酸乙酯诱变瓠瓜种子的条件筛选

为构建瓠瓜突变体库,以瓠瓜材料‘安生葫芦’种子为试材,探索甲基磺酸乙酯(EMS)诱变的最佳条件。设置种子开壳和不开壳2种处理,0.8%、1%、1.5%、2%、3%和4.5%共6个不同EMS浓度,2、4、8、12 h共4个不同诱变时间,分析24个不同浓度和时间处理组合对开壳种子相对发芽率的影响。结果表明,种子开壳处理后对EMS诱变浓度的敏感性显著提高。在相同EMS浓度下,诱变时间越长瓠瓜种子相对发芽率越低,8 h为最佳诱变时间;在相同EMS诱变时间下,EMS浓度越大相对发芽率越低;随着EMS诱变时间的增加,不同EMS浓度间种子发芽率的差异显著性降低,半致死浓度为1%~2%。综合分析,确定EMS诱变最佳条件为:瓠瓜种子开壳后温水浸种4 h,然后用1.5%EMS诱变处理8 h。

CMV甜瓜分离物外壳蛋白基因的克隆及植物表达载体的构建

从河南省临颖县采集的病毒感染的甜瓜样本经ELISA检测和接种分离获得黄瓜花叶病毒(Cucunbermosaicvirus,CMV)分离物。把该分离物接种西葫芦,从发病的叶片中提取总RNA,并以此为模板经RTPCR扩增获得CMV的外壳蛋白(cp)基因,将其克隆到pUCmT质粒上。经序列测定和分析,结果表明该cp基因由657个核苷酸组成,编码218个氨基酸。其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组I的分离物有较高的同源性,达92.2%～93.9%,与亚组II的同源性仅为76.8%～77.8%,与我国报道的CMV分离物的cp基因序列比较,除香蕉株系XB外核苷酸序列的同源性达91.8%～93.4%。根据这些分析,该CMV分离物属于亚组I。将cp基因通过中间载体pJIT163定向克隆到植物表达载体pBINPLUS中(重组双元载体质粒命名为pBCP),并经冻融法导入农杆菌中,经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入。利用该植物表达载体对西瓜的遗传转化工作目前正在进行中。

西瓜抗病毒RNAi植物表达载体的构建

为了研究转化同一种病毒的不同基因在转基因西瓜中引发RNA沉默的效果以及利用RNA沉默培育抗多种病毒的策略,以pFGC5941为骨架质粒,分别构建了ZYMV cp、nib和Hc-Pro基因的反向重复植物表达载体pFIRZYMVCP、pFIRZYMVNIb和pFIRZYMVHc-Pro;利用重叠延伸PCR的方法,首先构建了含有CMV cp、WMV cp和ZYMV cp部分基因片段的CWZ cp三价基因,采用该三价基因构建了CWZ cp基因的反向重复植物表达载体pFIRCWZ CP。研究首次在国际上构建了西瓜转基因抗病毒RNAi植物表达载体,为探讨RNA沉默在转基因抗病毒西瓜中的应用奠定了基础。

哈密瓜‘西州密25’在河南地区的栽培技术

我国哈密瓜的种植主要集中在新疆地区,因其地处偏远,商品瓜在向内地运输的过程中有部分腐烂变质,严重影响其商品性。为开辟新疆哈密瓜种植区域,丰富果品市场,满足消费需求,笔者从2011年开始在河南省不同区域进行了哈密瓜试种试验,筛选出市场表现优异的新疆哈密瓜品种‘西州密25’,其充分成熟时,果实网纹清晰、皮薄肉脆、味正爽口,中心可溶性固形物含量平均在16%以上,有的高达20%,单瓜质量一般在1.5-3.0 kg,春茬瓜平均1.7kg,秋茬瓜平均2.2kg。在新疆哈密瓜在河南地区的成功种植的基础上,优化其栽培与植保技术,总结出适合河南地区哈密瓜种植的栽培和植保方案,对促进河南地区种植业结构调整,实现农业增效和农民增收均具有重要意义。

瓜类新病毒病害(二):甜瓜坏死斑点病

介绍了我国最新发现的瓜类病毒病害——甜瓜坏死斑点病的症状、分布、病原及基因组、寄主范围、传播途径、防治措施,抗性和分子生物学研究等方面的内容。

瓜类新病毒病害(三):甜瓜黄化斑点病

介绍了我国最新发现的瓜类病毒病害——甜瓜黄化斑点病(图版见彩色插页第26页)的症状、分布、病原及基因组、寄主范围、传播途径、病毒检测及防治等内容。

小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因植物表达载体的构建

小西葫芦黄花叶病毒(Zucchiniyellowmosaicvirus,ZYMV)是危害中国葫芦科作物主要病毒之一。试验以该病毒中国分离物外壳蛋白基因的克隆载体pZCP-87(含ZYMV的CP基因)为材料,经SalⅠ和BamHⅠ双酶切,从胶上回收目的基因,与经过同两种酶酶切的植物表达载体pBIN438连接,转化感受态的大肠杆菌细胞,提取质粒,经PCR和SalⅠ/BamHⅠ双酶切验证,已将该病毒外壳蛋白基因克隆到植物表达载体上(重组质粒命名为pBZCP5),采用冻融法完成了对pBZCP5质粒的农杆菌转化。该工作是通过转基因获得抗ZYMV病毒研究的基础。

大棚哈密瓜、香菜、芹菜、生菜一年四茬高效栽培模式

随着国家精准扶贫政策的实施,产业扶贫政策使广大农民得到了谱遍性的实惠,塑料大棚瓜菜产业的发展目前已经成为贫困户脱贫致富的有效途径之一.笔者结合扶贫工作的实际,总结出哈密瓜、香菜、芹菜、生菜一年四季种植的高效栽培模式,该高效栽培模式的推广应用,有效提高了塑料大棚的利用率,对加快贫困地区贫困户的有效脱贫起到了积极的推动作用.

5种病毒侵染葫芦科作物的症状观察

对小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、西瓜花叶病毒(WMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、番木瓜环斑病毒西瓜株系(PRSV-W)和南瓜花叶病毒(SqMV)人工接种侵染7种葫芦科作物后的症状反应进行了初步的观察和探讨,初步筛选出SqMV与南瓜(耳突)、西葫芦(锯齿状叶缘),ZYMV与西葫芦(蕨叶),丝瓜(锯齿状叶缘),CMV与丝瓜(子叶早期褪绿斑)、西葫芦(后期叶片坏死斑)等几种具有比较鉴定作用的植物与病毒的组合。

中世纪晚期西欧的实验科学思想

自然科学在近代得到了巨大的发展,但是追根溯源,离不开早期的思想萌芽,17世纪是大多数人所认同的科学开始快速发展时期,人们往往在承认文艺复兴对近代科学发展影响的同时,忽视了被称为"黑暗的"中世纪的这段时期。而正是在中世纪的后期,开始于罗吉尔.培根等人的实验科学思想不断发展,在黑暗中闪现出一丝微光,并直接影响了后来的自然科学的发展。