舌鳞癌p15和p16蛋白的表达及其意义

背景与目的:多种原发性肿瘤中都存在p15、p16表达异常,但它们与舌肿瘤的关系仍不清楚。本研究旨在探讨二者在舌鳞状细胞癌中的表达特点及其与临床病理和预后的关系。方法:采用免疫组化(超敏SP法)和图像分析技术,检测45例舌鳞癌和10例正常舌组织中p15、p16蛋白表达水平,并将结果与临床病理指标及生存时间进行统计分析。结果:正常舌组织鳞状上皮中均有p15和p16蛋白表达;舌鳞癌p15、p16的缺失率分别为46.7％(21/45)和66.7％(30/45);p16蛋白表达阳性的患者中,80％(12/15)伴有p15蛋白表达,而p15缺失标本中有85.7％(18/21)伴随p16蛋白表达缺失;二者共缺失的患者绝大多数处于临床Ⅲ、Ⅳ期(16/18)。临床Ⅰ、Ⅱ期病例p15和/或p16蛋白表达水平比Ⅲ、Ⅳ期者的表达高(P<0.05);无颈淋巴结转移组蛋白附性表达率高于有转移组(P<0.01)。p15单独或与p16共缺失者与p15和p16蛋白均表达正常者比较,其术后3年生存率降低(P<0.05)。结论:p15和p16蛋白的表达与舌鳞癌的临床分期及颈淋巴结转移有关;p15蛋白单独或与p16共缺失时,舌鳞癌的预后较差。p15和p16蛋白可作为临床评估舌鳞癌浸润、转移和预后的参考指标。

368例放射性颌骨坏死的临床分析

目的:探讨以手术为主的多种治疗方案治疗放射性颌骨坏死(radionecrosis of jaws,RNJ)的临床疗效,并对术后缺损修复的近期效果进行评价。方法:对368例RNJ患者的临床资料进行回顾分析,采用χ2检验(SPSS11.0统计软件包)比较各种治疗方案的临床治愈率、好转率和总有效率,并进一步分析组织瓣修复术后缺损的近期效果。结果:本组资料显示,采用死骨刮治术对早期局限性骨坏死有效,而对中、晚期颌骨坏死只能起到暂缓病情的作用;252例RNJ患者行死骨扩大摘除或颌骨切除,术后症状有效缓解(总有效率82.9%,P<0.05);18例患者采用部分或半侧颌骨切除并同期进行血管化组织瓣移植(其中8例行折叠腓骨复合组织瓣修复缺损),除1例出现血管危象(静脉栓塞)及组织瓣部分坏死外,全部游离瓣均成活,随访期间无严重并发症,术后面部外形以及重建下颌骨高度均得到了有效恢复。结论:死骨刮治术仅适用于临床早期病例,晚期RNJ应行颌骨切除并同期血管化组织瓣移植,折叠腓骨复合组织瓣是修复下颌骨缺损较理想的方法。

PAMAM-D介导EGFP基因转染人舌鳞癌细胞的实验研究

目的:优化聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-D)纳米载体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染人舌鳞癌Tca8113细胞的条件,以获得最佳的转染效率和细胞内表达。方法:采用不同的质粒DNA浓度、PAMAM-D代数、PAMAM-D∶DNA质量比以及转染时间等参数,在激光共聚焦显微镜下,观察PAMAM-D介导pEGFP-N1体外转染Tca8113细胞,检测转染效率,并应用单因素方差分析等统计学方法进行比较分析;结合细胞生长和荧光蛋白的表达情况,进一步评估和优化转染条件。结果:1.0μg质粒DNA与2.0μlG5PAMAM-D形成复合物,转染细胞2h后,可获得最佳的转染效率(42.1%);G5PAMAM-D转染效率显著高于G2PAMAM-D(42.1%比19.4%,P<0.05);PAMAM-D基因转移系统对细胞的生长增殖无显著影响(P>0.05)。结论:PAMAM-D纳米载体在优化的转染条件下,可安全高效地介导目的基因转染Tca8113细胞,是一种较理想的基因转移系统。

非病毒载体介导的基因转染效率及其对人舌鳞癌细胞生长增殖的影响

【目的】观察多种非病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在舌鳞癌细胞内的表达情况,评价各载体的转染效率及其对细胞生长增殖的影响。【方法】采用pEGFP鄄N1评估阳离子脂质体、聚酰胺鄄胺型树枝状高聚物(PAMAM鄄D)以及SuperFect纳米微粒在舌鳞癌Tca8113细胞中的转染效率;绘制生长曲线,计算细胞的相对存活率,流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡。【结果】第5代(G5)PAMAM鄄D的转染效率明显高于第2代(G2)PAMAM鄄D(42.1%vs19.4%,P=0.003),与SuperFect和脂质体转染组的结果无统计学差异(42.1%vs35.9%和42.1%vs47.7%,P>0.05)。G5PAMAM鄄D对细胞的生长增殖无明显影响(P>0.05),而脂质体转染组细胞的生长增殖受到明显的抑制(P=0.001),细胞凋亡水平升高(P=0.01)。【结论】G5PAMAM鄄D载体安全低毒,转染效率高,是一种有良好应用前景的新型纳米载体基因转移系统。

靶向纳米转基因载体在头颈肿瘤中的研究现状

近年来利用纳米载体传递药物和转移基因的报道颇多。本文主要就纳米基因转移载体的分类熏在头颈肿瘤基因治疗中靶向性的获得与提高,以及存在问题与展望等作一综述。

INK 4家族与头颈肿瘤研究新进展

细胞恶变的基础是细胞周期调节失控,其中抑癌基因的失活起了重要的作用。研究表明,INK4蛋白家族是最重要的细胞周期调节蛋白,与人类多种肿瘤的发生、发展密切相关,本文对INK4家族各成员与头颈肿瘤关系,包括各蛋白和基因的结构特点、生物学特性及调控机理、在头颈肿瘤中的变异情况和失活机制等进行综述。

温肾助阳方药对甲低阳虚模型体温和心率昼夜节律变化的影响

对甲状腺切除兔（阳虚组）甲状腺切除后灌服温肾助阳复方煎剂治疗兔（中药组）和甲状腺假切除兔（对照组）的直肠温度和心率进行２６ｈ动态观测，结果证实甲低阳虚兔体温降低，心率减慢；同时其体温和心率的昼夜节律变化明显异常；温肾助阳方药对此有明显的纠正作用。

基质金属蛋白酶-2活性与成釉细胞瘤增殖生长关系的研究

目的探讨基质金属蛋白酶-(2MMP-2)活性与成釉细胞瘤增殖生长的关系及其在成釉细胞瘤侵袭中的作用。方法通过MMP-2抑制剂Ro31-9790抑制MMP-2活性进行干预处理,采用成釉细胞瘤细胞原代培养、瘤组织块裸鼠肾包膜下移植、MTT、流式细胞术、瘤体积测量和组织学检查等方法,观察MMP-2活性与成釉细胞瘤增殖生长的关系。结果实验各组之间在同一时间点的细胞增殖活性均无显著性差异(P>0.05)。G0/G1、G2/M期细胞比率以及凋亡细胞比率不随Ro31-9790浓度增加而增加,S期细胞比率也不随Ro31-9790浓度增加而减少。Ro31-9790治疗组瘤体积明显小于对照组(P<0.05),瘤体积增加也明显少于对照组(P<0.01)。结论Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞的体外增殖活性无影响,但可抑制体内移植瘤的生长,MMP-2活性与成釉细胞瘤细胞的增殖活性无关,但与成釉细胞瘤的生长密切相关,可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。

下颌骨放射性骨坏死临床诊疗专家共识

下颌骨放射性骨坏死(osteoradionecrosis,ORN)是头颈部大剂量放疗后的一种严重并发症,常以慢性坏死及感染为主要特征,临床表现为局部红肿、疼痛、吞咽困难、开口受限、咀嚼及语言障碍、面部软组织瘘管经久不愈、死骨暴露,严重者甚至造成病理性骨折,给患者的身心带来巨大痛苦,已成为口腔颌面外科及头颈外科领域棘手的临床难题。迄今为止,国内外对于下颌骨ORN缺乏统一的分类、分期及相关治疗共识或指南,不同单位对于下颌骨ORN的诊治水平参差不齐,缺乏统一科学的诊疗标准与规范,对该疾病的处理仍以个人或单位经验作为治疗依据,同时也缺乏客观有效的下颌骨ORN治疗后评价体系。为进一步统一和规范下颌骨ORN的诊疗标准,减少医疗资源的浪费,提高治疗效果,中华口腔医学会口腔颌面外科专业委员会召集国内颌骨放射性骨坏死研究领域的专家进行反复讨论,汇集全国17家著名医学院校及附属医院专家的诊治意见,同时借鉴和参考国内外近年来对下颌骨ORN的研究成果与诊治经验,最终制订"下颌骨放射性骨坏死临床诊疗专家共识",供临床医师参考。

基质金属蛋白酶-2活性与成釉细胞瘤侵袭力的关系

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metaⅡoproteinase-2,MMP-2)活性与成釉细胞瘤体内、外侵袭力的关系。方法:通过MMP-2活性抑制剂Ro31-9790降低MMP-2活性进行干预处理,采用成釉细胞瘤细胞原代培养、瘤组织块裸鼠肾包膜下移植、MTT、Western印迹、体外侵袭试验、组织学和免疫组织化学等方法,观察MMP-2活性与成釉细胞瘤体内、外侵袭的关系。采用SPSS10．0统计软件包对上述数据进行X^2检验和单因素方差分析。结果:Ro31-9790各处理组和对照组的生长曲线无显著差异(P＞0．05)。Ro31-9790对成釉细胞瘤细胞的体内、外侵袭均有显著的抑制作用(P＜0．01),并可增加Ⅳ型胶原在瘤组织的阳性表达,减少E-钙黏素在瘤组织的异常表达,同时在体内、外均不影响成釉细胞瘤细胞MMP-2的表达。结论:MMP-2活性与成釉细胞瘤的侵袭直接相关;Ro31-9790可通过降低MMP- 2活性而抑制成釉细胞瘤的侵袭:活性MMP-2可能通过调节Ⅳ型胶原及E-钙黏素的表达,影响成釉细胞瘤的侵袭。

舌鳞癌中“瘤芽”的病理学特征及其与上皮-间质转化之间的关系

目的:探讨"瘤芽"(tumor budding)在舌鳞癌中的病理学特征及其与上皮-间质转化(EMT)的关系。方法:HE染色评估230例舌鳞癌组织标本中肿瘤侵袭前沿和"瘤芽"的分布情况;免疫组织化学染色检测E-cadherin和Vimentin在舌癌中的表达及分布;应用SPSS13.0软件包进行Sperman相关分析,探讨"瘤芽"与临床、病理参数之间的关系,Kaplan-Meier法和Logrank分析生存率。结果:在舌鳞癌组织切片中,可见"瘤芽"位于肿瘤侵袭前缘,为单个或小于5个成簇的癌细胞。在230例病例中,111例标本呈现出高"瘤芽"状态(≥5个"瘤芽"/HPF),119例标本表现出低"瘤芽"状态(<5个"瘤芽"/HPF);"瘤芽"与肿瘤大小(P<0.05)、分化程度(P<0.05)、临床分期(P<0.05)以及淋巴结转移(P<0.001)呈正相关;与患者预后呈负相关,可作为舌鳞癌患者的独立预后判断指标(P=0.0014);构成"瘤芽"的癌细胞形态可由多边形、鱼鳞状转变成长梭形、成纤维细胞样;"瘤芽"与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.01),与Vimentin的表达呈正相关(P<0.01),提示"瘤芽"与EMT相关,是EMT在组织形态学上的一种表现。结论:"瘤芽"与EMT密切相关,代表恶性程度更高的癌细胞亚群,可作为舌鳞癌患者独立的预后判断指标。

双自杀基因CDglyTK治疗人舌鳞癌的实验研究

[目的]构建双自杀基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CDglyTK并观察脂质体介导其治疗人舌鳞癌的疗效。 [方法]将pCEA-CDglyTK中双自杀基因CDglyTK亚克隆到pcDNA(+)3.1上构建pcDNA3.1(+)-CDglyTK,脂质体介导转 染人舌鳞癌细胞,MTT法观察其生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡。[结果]成功构建双自杀基因真核表达质粒pcDNA3.1 (+)-CDglyTK,体内外实验表明5-FC和GCV同时存在时具有明显的协同效应,其疗效优于单独使用5-FC或GCV。[结论] 双自杀基因CDglyTK可显著提高人舌鳞癌的疗效。

基质金属蛋白酶与Ⅳ型胶原在成釉细胞瘤的表达

目的探讨基质金属蛋白酶和Ⅳ型胶原与成釉细胞瘤复发、侵袭的关系。方法采用免疫组织化学LABC方法检测28例成釉细胞瘤组织中MMP-2、TIMP-2和Ⅳ型胶原的表达,并用RT-PCR方法检测MMP-2、TIMP-2和MT1-MMP在20例成釉细胞瘤的表达。结果MMP-2、TIMP-2和Ⅳ型胶原蛋白在成釉细胞瘤的阳性表达率分别为92.9%、75.0%和42.9%,Ⅳ型胶原阳性着色部位均位于基底膜及部分肿瘤细胞的胞质,MMP-2和TIMP-2阳性着色部位均位于细胞质,分布于瘤组织各层;复发性成釉细胞瘤Ⅳ型胶原的阳性表达率明显低于原发性成釉细胞瘤(P<0.01)。MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2的mRNA在成釉细胞瘤组织中均有表达,复发性成釉细胞瘤的TIMP-2、MT1-MMP相对含量均显著高于原发性成釉细胞瘤(P<0.01)。结论基质金属蛋白酶MT1-MMP表达增加和Ⅳ型胶原在基底膜表达缺失与成釉细胞瘤的复发密切相关,MMP-2活性增加和基底膜Ⅳ型胶原降解增多可能是成釉细胞瘤局部侵袭的机制之一。

舌鳞癌组织中p15蛋白表达与其生物学行为及预后的关系

[目的]检测p15蛋白在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的表达,探讨其与临床病理及预后的关系。[方法]应用免疫组化超敏S-P法检测45例TSCC和10例正常舌组织中p15蛋白的表达,染色结果进一步用图像分析仪定量测定。[结果]TSCC中p15表达缺失率为46.7％(21/45);临床Ⅰ、Ⅱ期p15表达水平(54.25±21.14)明显高于Ⅲ、Ⅳ期(29.62±9.28),无颈淋巴结转移组(59.05±18.03)明显高于有转移组(26.83±8.58),各组间差异显著(P<0.05);Cox模型分析表明p15缺失与预后不良有关(P<0.05)。[结论]p15蛋白表达缺失是TSCC发生发展中较常见分子事件,对准确评估TSCC的生物学行为和预后有重要的临床意义。

聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球介导双自杀基因治疗金黄地鼠颊癌的实验研究

目的:观察聚乙二醇-聚谷氨酸(PEG-PBLG)纳米微球介导双融合自杀基因CDglyTK治疗金黄地鼠颊癌的疗效。方法:用二甲基苯并蒽(DMBA)诱导金黄地鼠颊黏膜癌变,建立颊癌动物模型。以PEG-PBLG纳米微球为载体,介导携双自杀基因CDglyTK的真核表达质粒pcDNA3．1(+)-CDglyTK瘤内转染,腹腔注射5-氟胞嘧啶(5-FC)和丙氧鸟苷(GCV),描绘肿瘤生长曲线,RT-PCR检测CDglyTK的mRNA水平,免疫组化检测细胞核增殖抗原的表达,原位末端标记法检测肿瘤细胞凋亡。采用SPSS10．0统计软件包进行两样本均数X^2检验。结果:成功建立金黄地鼠颊癌模型,RT-PCR可检测到转染肿瘤细胞中CDglyTK的mRNA表达;腹腔注射5-FC和GCV后,肿瘤生长受到明显抑制;联合使用5-FC和GCV的金黄地鼠颊癌生长抑制作用明显优于单用5-FC或GCV。5-FC和GCV联合使用组,凋亡指数(AI)显著高于对照组(P＜0．01),同时增殖指数(PI)则显著低于对照组(P＜0．01)。结论:PEG-PBLG纳米载体介导双自杀基因CDglyTK可有效治疗金黄地鼠颊癌,为口腔鳞癌的基因治疗提供了新的思路。

聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球介导双自杀基因对Tca8113细胞的杀伤作用

目的:观察聚乙二醇-聚谷氨酸(PEG-PBLG)纳米微球介导双融合自杀基因CDglyTK对舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用,为口腔鳞癌的治疗探索新的途径和方法。方法:以PEG-PBLG纳米微球为载体介导携双自杀基因CDglyTK的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CDglyTK转染Tca8113细胞,通过RT-PCR检测CDglyTK的mRNA表达,MTT法描绘细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡并评价其疗效。统计分析采用SPSS10.0统计软件包完成,两样本均数的比较采用t检验。结果:PEG-PBLG纳米微球可介导质粒pcDNA3.1(+)-CDglyTK转染Tca8113细胞,RT-PCR可检测到转染细胞中CDglyTK的mRNA表达。转染后,细胞在滴加5-FC和GCV后生长受到明显抑制,5-FC和GCV联合使用对Tca8113细胞的生长抑制作用明显优于单用5-FC或GCV。5-FC和GCV联合使用组,凋亡指数显著高于对照组(P<0.01),同时也高于单独使用5-FC或GCV组(P<0.05)。结论:PEG-PBLG纳米载体介导双自杀基因CDglyTK,可有效杀伤舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的基因治疗提供了新的途径。

放射诱导启动子介导CDglyTK基因治疗Tca8113细胞的实验研究

目的观察人工放射诱导启动子介导CDglyTK双自杀融合基因治疗Tca8113细胞的疗效,为舌鳞癌治疗探索新的途径。方法构建人工放射诱导启动子调控双融合自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK,用脂质体为载体转染Tca8113细胞后予以3Gy诱导放疗,描绘细胞生长曲线,RT-PCR检测CDglyTK的表达,流式细胞仪检测细胞的凋亡和增殖。结果诱导放疗可显著增强双自杀基因CDglyTK对Tca8113细胞的毒性作用;RT-PCR半定量分析诱导放疗增强了CDglyTK基因的mRNA表达;流式细胞检测发现治疗组细胞的凋亡指数明显高于对照组,而增殖指数则低于对照组,诱导放疗显著提升了这种差距。结论人工合成放射诱导启动子可作为基因治疗中的分子开关调节CDglyTK基因在Tca8113细胞中靶向表达。低剂量放射性照射可显著提高放射诱导启动子调控的CDglyTK基因治疗Tca8113细胞的疗效。

VEGF-C能促进舌鳞癌淋巴转移吗?

目的:观察血管内皮细胞生长因子C(vascualrendothelialgrowthfactor,VEGF-C)在舌鳞癌癌内及癌周淋巴管生成、淋巴转移中的作用。方法:以自行建立的过表达VEGF-C的舌鳞癌细胞株接种于裸鼠下肢股肌内(A组),设立对照组(B、C组),解剖观察肿瘤淋巴转移情况;RT-PCR、Western杂交检测移植瘤VEGF-C的表达情况;5’-核苷酸酶染色显示癌内及癌周淋巴管,并进行形态学测量。多组资料间的均数比较用方差分析,计数资料的比较用χ2检验。结果:各组移植瘤均接种成功,A组VEGF-C表达显著高于对照组,VEGF-C的表达强度对肿瘤生长无影响;大体解剖未发现引流区淋巴结转移,但A组的癌周淋巴管管径(128±16.7)μm、面积(104±8.5)μm2及密度(8.2±2.1)个/视野均高于对照组,分别为(96±9.5)μm,(74±6.4)μm2,(6.3±1.7)个/视野,有显著性差异(P<0.05);各组瘤内淋巴管多为闭锁结构,未进行形态学测量及图像分析。结论:过表达的VEGF-C能够诱导癌周淋巴管的增殖和扩张,但并未引起肿瘤淋巴转移,VEGF-C参与的淋巴管增殖只是肿瘤转移的步骤之一。

miR-214在口腔鳞状细胞癌中的表达及功能研究

目的:探讨mi R-214在口腔鳞状细胞癌中的表达及其对口腔鳞癌细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡能力的影响。方法:实时荧光定量RT-PCR检测31例口腔鳞状细胞癌组织和7株口腔鳞状细胞癌细胞系中mi R-214表达水平,分析其与患者临床病理参数的相关性;评估mi R-214在7株细胞系中的基础表达水平,分别选择mi R-214高、低表达的细胞系进行后续研究。对选择的细胞系分别转染mi R-214 mimics和inhibitors,采用划痕实验、Transwell实验、流式细胞仪分别检测转染后细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡能力的变化。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学处理。结果:在口腔鳞状细胞癌中,mi R-214的表达与患者颈淋巴结转移情况和临床分期呈正相关(P<0.05);转染mi R-214mimics的UM1细胞侵袭、迁移能力显著高于对照组(P<0.05),转染mi R-214 inhibitors的SCC9细胞侵袭、迁移能力显著低于对照组(P<0.05);转染mi R-214 mimics的UM1细胞周期阻滞在G1期,凋亡水平无明显变化,转染mi R-214 inhibitors的SCC9细胞凋亡水平和细胞周期无明显变化。结论:mi R-214与口腔鳞状细胞癌恶性表型相关,可增强口腔鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移能力。