缩泉益肾方含药血清通过抑制KDM6A调节肾小球足细胞上皮-间充质转化

目的:探讨缩泉益肾方含药血清通过抑制组蛋白去甲基化酶(Histone demethylase,KDM6A),调控上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物和足细胞损伤因子的表达,改善足细胞(Podocyte)EMT和足细胞损伤的机制研究。方法:除正常对照组外,高糖胁迫足细胞损伤后,随机分为模型对照组、缩泉益肾方14.4 g/kg含药血清5%、10%、20%组和卡格列净4.45μg/mL组。采用显微镜观察足细胞形态实验、CCK-8法、细胞划痕实验和流式细胞术,分别检测足细胞形态变化、活力、迁移力和凋亡率;RT-qPCR和Western blot检测足细胞中组蛋白去甲基化酶(Kdm6a)、Krüppel样因子10(Klf10)、足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、α-平滑肌肌动蛋白(Asma)、N-钙粘蛋白(Ncadherin)和P-钙粘蛋白(Pcadherin)mRNA和蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组足细胞活力、迁移力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.01),Kdm6a、Klf10、Asma、Ncadherin mRNA和蛋白的表达显著上调(P<0.01),Pcadherin、Nephrin mRNA和蛋白的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,缩泉益肾方14.4 g/kg含药血清5%、10%和卡格列净4.45μg/mL组足细胞活力、细胞迁移力显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),缩泉益肾方14.4 g/kg含药血清10%组和卡格列净4.45μg/mL组中Kdm6a、Klf10、Asma、Ncadherin mRNA和蛋白的表达下调(P<0.05或P>0.01),Pcadherin、Nephrin mRNA和蛋白的表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:缩泉益肾方含药血清可能通过抑制KDM6A,调控EMT相关标志物和足细胞损伤因子,从而改善足细胞EMT和足细胞损伤。