慢性排斥肾肥大细胞形态与超微结构的研究

目的： 了解肾移植慢性排斥反应时肥大细胞在排斥肾中的形态、超微结构特点及分布规律，以探讨肥大细胞是否在肾移植慢性排斥反应中所起的作用。方法：采用甲苯胺蓝、爱尔沙蓝特殊染色法及电子显微镜技术。结果：发现慢性排斥肾中， 有较多的肥大细胞， 主要分布于肾皮质区。特殊染色及超微结构的结果显示，排斥肾中至少存在幼稚与成熟两种类型的肥大细胞。在移植后３ 个时间段（ ＜ １ 年， １ 年～４ 年及＞ ４ 年） ，每个高倍视野中，肥大细胞的平均数分别为２ ．０９ ±２ ．８４ ，８ ．９３ ±４ ．２５ 和１３ ．７６ ±４ ．５３ ，随着移植时间的延长，肥大细胞呈增加的趋势。４ 年以上组明显高于１ 年～４ 年组，（ Ｐ ＜ ０ ．０１） ；小于１ 年组的病例中５２ ％ 未见到肥大细胞。结论：肥大细胞可能参与了肾移植慢性排斥反应，其作用机理尚需进一步研究。

慢性排斥患者移植肾组织中肥大细胞亚类分析

目的：了解慢性排斥患者移植肾中的肥大细胞是否存在不同亚类。方法：采用甲苯胺蓝特殊染色及肥大细胞特异酶Ｔｒｙｐｔａｓｅ（类胰蛋白酶）免疫组织化学染色，对１０例切除的慢性排斥患者移植肾标本进行了肥大细胞形态观察。结果：发现慢性排斥患者移植肾中存在三种类型的肥大细胞。分别为甲苯胺蓝染色阳性，Ｔｒｙｐｔａｓｅ阳性及以上二种方法双阳性的细胞类型。三种类型肥大细胞占肥大细胞总数的百分比分别为：２３１２％；８０５％与６８８６％。结论：经由甲苯胺蓝特染及免疫组化染色证明：在慢性排斥患者移植肾中存在三种不同类型的肥大细胞，其功能特性尚需进一步研究。

重组人γ－干扰素单克隆抗体的制备及初步应用

应用常规方法制备了４株能稳定分泌抗人重组γ－干扰素单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系：３Ｄ３、３Ｄ１２、３Ｆ９和３Ｂ８．经免疫琼脂双扩散法鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的亚类分别为：ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ１和１ｇＧ１．相对亲和常数前两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１１、后两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１３．问接ＥＬＩＳＡ法测培养上清的效价为２×１０２～１．２８×１０５．由小鼠腹水提取的４株ＭｃＡｂ与天然γ－干扰素均产生交叉反应，对重组的人γ－干扰素均具有中和活性．其中３Ｆ９和３Ｄ３培养上清对重组人γ－干扰素亦有明显的中和活性。用３Ｆ９ＭｃＡｂ与溴化氢活化的ＳｅＰｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制备了亲和层析柱，用其纯化粗提的γ－干扰素纯度达到９５％以上，比活性达１．９×１０７ＩＵ／ｍｇ蛋白．

Tryptase阳性细胞在移植后不同时间段排斥肾中的分布

目的 了解Tryptase阳性肥大细胞在肾移植后不同时间段的排斥肾组织中的分布规律。方法 采用抗Tryptase单抗免疫组化染色法与甲苯胺蓝特殊染色方法 ,对移植后 8d～ 7a手术切除的排斥肾进行了染色。结果 在移植后的各个时间段的排斥肾中均见到较正常肾明显偏多的肥大细胞 ,且随着移植时间的延长呈增长的趋势。其中移植后 7a以上组的肥大细胞明显高于 1～ 2a组和 5～ 6a组 (P <0 .0 1)。甲苯胺蓝染色结果与Tryptase免疫组化结果相一致 ,但Tryptase免疫组化方法更为敏感。结论 肥大细胞可能参与了肾移植的排斥反应 。

肿瘤抗原穴位注射抑制肿瘤生长的实验研究

目的:探讨肿瘤抗原穴位注射对肿瘤的形成是否产生抑制作用。方法:采用小鼠 S180细胞株粗提物(瘤苗)作为抗原,在后海穴间断免疫后,于小鼠腋下接种10~6个 S180细胞。结果:发现穴位抗原注射组的未荷瘤且生存期达到100天的小鼠只数明显多于对照组。后海穴注射瘤苗和生理盐水(HS180和HNS)及股骨外侧中点肌肉注射瘤苗和生理盐水(MS180和 MNS)各组未荷瘤鼠所占百分比分别为80.0%、21.4%、71.4%、15.3%。HS180组脾细胞培养上清的IL-2水平明显高于其他各组(P【0.05),ConA 和 LPS 诱发脾细胞增殖百分比,前者高于对照的各组,后者则低于 HNS 及 MNS 组(P【0.05)。结论:本法可有效抑制肿瘤的生长,此作用可能是细胞免疫参与所至.

类胰蛋白酶阳性细胞在肾移植排斥肾中的分布

为了解排斥肾中肥大细胞的变化规律,采用抗类胰蛋白酶(tryptase)单抗免疫组化方法,对46例术后不同时间段的排斥肾石蜡标本进行了肥大细胞数量的观察。结果表明,在移植肾存活≤1年组(17例),2～5年组(18例)及>5年组(11例),排斥肾中tryptase阳性细胞相对密集区的每高倍视野计数分别为5.24±6.97、10.44±9.73和14.06±8.78个。结论:肥大细胞可能参与了肾移植排斥反应。

慢性排斥肾肥大细胞形态与超微结构观察

为了解肥大细胞在肾移植慢性排斥反应时排斥肾中的形态、超微结构特点、分布规律及其作用,采用甲苯胺蓝、爱尔沙蓝特殊染色对57例慢性排斥肾进行了观察,并对其中8倒作了电镜观察。结果发现,慢性排斥肾中有较多的肥大细胞分布于肾皮质区;至少存在幼稚和成熟两种形式的肥大细胞。在移植后的3个时间段(<1年、1～4年和>4年),每个高倍视野中肥大细胞的平均数分别为2.09±2.84、8.93±4.25和13.76±4.53,呈现随着移植时间的延长肥大细胞增多的趋势。4年以上组明显高于1～4年组(P<0.01);小于1年组的病例中52%未见到肥大细胞。结论:肥大细胞可能参与了肾移植慢性排斥反应。

固相萃取反相高效液相色谱法测定人血浆麦考酚酸浓度

目的 建立固相萃取反相高效液相色谱法测定人血浆麦考酚酸 (MPA)浓度 ,探讨MPA与其代谢产物间的转化。方法 用固相萃取法处理样品 ,以泼尼松为内标物 ,C18硅胶键合相为固定相 ,甲醇 四氢呋喃 水 (6 0∶2∶5 0 )作流动相 ,在波长 2 5 4nm处紫外定量检测。结果 MPA浓度在 0 .2～ 40 μg·mL-1范围内与色谱峰高呈良好线性关系 ,血浆MPA回收率为 92 .3%～10 3.1% ,绝对回收率为 5 0 .2 %～ 5 3.7%。最低检测极限为 0 .2 μg·mL-1,批内与日间 (n =5 )RSD为 3.34%和 4.70 %。结论 本法用于MPA测定具有准确、灵敏、简便等特点 。

SLE患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体水平及意义

目的探讨系统性红斑狼疮 (SLE)与可溶性肿瘤坏死因子受体 (sTNF R)的关系。方法利用双抗体夹心ELISA法检测了活动期SLE患者35例,稳定期患者25例及健康对照40例血清中sTNF RI和sTNF RII的水平。结果患者血清sTNF RI和sTNF RII的水平分别为(2.34±0.76)μg/L和(4.33±1.15)μg/L ;健康对照组分别为(1.09±0.11)μg/L和(2.05±0.29)μg/L ,患者明显高于健康对照组(P<0.01)。活动期SLE患者血清sTNF RI和sTNF RII水平分别为(2.93±0.32)μg/L和(5.19±0.53)μg/L ,明显高于稳定期SLE组分别为(1.46±0.15)μg/L和(3.04±0.28)μg/L(P∨0.01)。稳定期也明显高于健康对照组(P<0.01)。在SLE患者组中 ,血清sTNF RI和sTNF RII的水平与疾病活动积分呈显著的正相关(相关系数分别为0.76和0.69)(P<0.01) ;与抗ds DNA抗体水平亦呈显著的正相关(相关系数分别为0.67和0.58)(P<0.01) ;与补体C3的水平呈显著的负相关(相关系数分别为 -0.62和 -0.84)(P<0.01)。结论SLE患者血清sTNF RI和sTNFRII的水平明显增高 ,且与疾病的活动度呈显著正相关 ,这对于SLE的诊断及监测疾病的活动性 ,以及患者的判断预后可能是一种有用的实验室指标。

肾移植供受者DR4-DRB1等位基因的分型

目的研究HLA DRB1等位基因的分型配合 ,因为相配的肾移植 ,其急性排斥反应的发生率明显降低 ,移植肾的存活时间明显延长。方法我们合成了一对DR4特异性引物 ,对DR4阳性的肾移植供受者的DNA样品进行PCR扩增后 ,将PCR产物分别用限制性核酸内切酶SacII,AvaII ,HinfI,HaeII ,HphI和MnlI进行酶切。结果根据酶切结果及RFLP图型 ,可将DR4进一步分为DR4 DRB1 0401～0411。结论本方法快速、简便、精确 ,可为肾移植中DR4阳性供受者HLA DRB1等位基因的配型提供可靠的方法。

血小板生成素诱导胎肝CD34^+造血干/祖细胞增殖分化与周期蛋白表达的关系

为了解胚胎时期巨核细胞增殖分化特有的内在机制 ,本研究观察了在体外培养体系中 ,胎肝源CD3 4 +造血干 /祖细胞在血小板生成素 (thrombopoietin ,TPO)作用下增殖分化特征与相关周期蛋白B1、D1和D3表达及细胞内水平变化的关系。结果发现 :( 1)经 12d培养后 ,TPO使胎肝源CD3 4 +细胞数从 1× 0 5个细胞 /ml增加到 13 12± 4 0 6× 10 5个细胞 /ml,CD4 1+细胞增加到了 95 % ,CD3 4 +细胞下降到了 3 % ,大部分细胞的DNA倍性为 2N ,少数为 4N ,无大于 4N巨核细胞 ,TPO对MegaCultTm C胶原半固体培养体系中胎肝源CD3 4 +细胞形成CFU Mk集落产率的影响呈明显的剂量效应关系 ;( 2 )在整个培养期间 ,周期蛋白B1表达逐渐增加 ,并保持在一个高水平上 ,培养后期 ,高水平的周期蛋白B1出现在G1期细胞上 ;( 3 )周期蛋白D1和D3表达先增加 ,培养后期细胞内水平下降 ,且以G2期细胞为主。该结果提示 :( 1)TPO通过上调周期蛋白B1和在所有细胞周期时限上调周期蛋白D1和D3表达 ,促进巨核细胞祖细胞的增殖分化 ;( 2 )周期蛋白B1在G2 +M期的持续高水平和周期蛋白D1和D3在G2 +M期的水平下降 ,可能导致胎肝源巨核细胞核内有丝分裂延迟或阻滞。

IgA肾病患者肾间质肥大细胞浸润的临床意义

目的研究肥大细胞MC在IgA肾病患者肾间质中的分布及与间质纤维化的关系。方法采用甲苯胺蓝特殊染色法及MC特异酶(即类胰蛋白酶,tryptase免疫组化染色法对12例IgA肾病患者肾活检标本中的MC进行了观察。结果⑴肾脏皮、髓质均可见到MC多见于纤维化区域、血管周围、萎缩或扩张小管周围及肾小球周围。⑵系膜细胞的增殖程度与MC数无关而随着IgA肾病患者MC的数增加间质纤维化加重差异显著(P<0.025)。结论IgA肾病患者的肾间质中存在MC并与肾间质的纤维化有关。

CD226在TPO诱导胎肝Lin-细胞增殖分化过程中的表达

目的研究CD226在造血干/祖细胞上的表达分布。TPO诱导胎肝造血干/祖细胞增殖分化过程中，CD226表达的变化及可能的信号调控途径。方法采用鸡尾酒单抗阴性分离富集Lin－造血干/祖细胞，培养于含TPO的无血清培养体系中，用PD98059阻断MAPK信号转导途径，流式细胞仪双荧光分析CD226、CD34、CD41a和CD61的表达。结果CD226在Lin－CD34＋细胞和Lin－CD34－细胞上均有表达。TPO可诱导Lin－CD41a－CD226－细胞先分化为CD41a＋CD226－细胞，再进一步分化为CD41a＋CD226＋细胞，TPO也可诱导Lin－CD226＋细胞表达CD41a和CD61。在培养的早期，PD98059可抑制CD34＋CD226＋细胞的减少，在晚期则可抑制CD41a＋CD226＋细胞的增多。结论CD226与造血干/祖细胞和巨核细胞的增殖分化可能具有密切的关系。

p27^(kipl)蛋白与雌、孕激素受体在子宫内膜组织中的表达及其意义

目的 探讨 p2 7kipl、雌激素受体 (ER)与孕激素受体 (PR)在子宫内膜癌中的表达及意义。方法 用免疫组化法检测 6 6例子宫内膜癌、2 9例子宫内膜非典型增生病变和 31例正常子宫内膜组织中p2 7kipl蛋白及其癌组织中ER和PR的表达。结果 在癌组织中p2 7kipl的表达率为 5 3.0 % ,明显低于非典型增生病变的 75 .8%和正常子宫内膜的 87.1% ,并与其分级有关 ;ER和PR的表达与p2 7kipl相似。结论 p2 7kipl与此癌的发展和恶性程度有关 ,这对其治疗和预后有参考价值。

类风湿性关节炎患者血清TNF-α,IL-6和IL-8的水平及临床意义

类风湿性关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）的主要特征是，免疫调节功能紊乱导致关节、肌腱、软骨、韧带的侵蚀性破坏［１］。目前许多研究显示，细胞因子是ＲＡ发病过程中的重要介质。ＴＮＦ－α，ＩＬ－６和ＩＬ－８既参与ＲＡ免疫应答中Ｂ细胞的...