口服转胸腺素α1基因聚球藻对小鼠T细胞亚群作用的研究

为探讨口服后转胸腺α1(Tα1)基因聚球藻对T细胞亚群的作用,将小鼠随机分为空白对照组、野生藻组、转化藻(小剂量、中剂量和大剂量)组和日达仙组,用灌服的方式,给予空白对照组20mL·kg^(-1)的生理盐水,野生藻组0.4g·kg^(-1)的野生聚球藻;转化藻小、中、大剂量组,分别0.2g·kg^(-1)、0.4g·kg^(-1)和0.6g·kg^(-1)的转Tα1基因聚球藻;日达仙组则肌注给予3.2mg·kg^(-1)的胸腺素α1(日达仙)。结果表明转Tα1基因藻口服后可显著提高CD3亚群水平,显著提高CD4亚群水平,明显提高CD4/CD8的比值。提示转Tα1基因聚球藻具有增强机体免疫功能的作用。

人参根、叶皂甙对大鼠血清抗氧化酶活性和过氧化脂质的影响

人参为我国历史悠久的传统药物。《神农本草经》称,人参“主补五脏,……久服轻身延年”。本文用不同年龄大鼠探讨人参根、叶皂甙对大鼠血清抗氧化酶类的作用及对过氧化脂质的影响。

转胸腺素α1基因聚球藻抗氧化作用的研究

本试验室已在蓝藻聚球藻中高效表达了人源胸腺素α1(thymosinα1,Tα1)基因,为研究转Tα1基因聚球藻口服后的生物活性,本研究给小鼠灌服转Tα1基因聚球藻14d,研究其对小鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(Cat)和超氧化物歧化酶(SOD)活力以及丙二醛(MDA)含量的影响,结果表明:转胸腺素α1基因聚球藻可显著提高小鼠心、肝与肾中GSH-Px活力(P<0.01);明显提高心脏Cat活性(P<0.01);显著降低肝脏中MDA的含量(P<0.01);但对SOD活力无明显作用。提示转胸腺素α1基因聚球藻较强的抗氧化作用。

转hCu,Zn-SOD突变基因聚球藻抗氧化作用的研究

目的研究转人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)突变基因聚球藻口服后的生物活性。方法给小鼠灌服转hCu,Zn-SOD突变基因聚球藻20d,然后测定小鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力以及丙二醛(MDA)含量。结果转hCu,Zn-SOD突变基因聚球藻可明显提高小鼠血清GSH-Px活力和全血血红蛋白CAT活性,显著提高小鼠血清和肝脏中Cu,Zn-SOD和总SOD(T-SOD)的活力,显著降低小鼠血清和肝脏的MDA含量。结论转hCu,Zn-SOD突变基因聚球藻有较强的抗氧化作用。

磷脂酰胆碱对老年大鼠血液流变性的影响

老年大鼠用磷脂酰胆碱灌胃（６００ｍｇ／ｋｇ），每日１次，连续８日，观察其血液流变性的变化。结果表明，较之对照组，实验组血浆比粘度（ηｐ）显著降低（Ｐ＜０．０１），全血比粘度（ηｂ），红细胞压积（Ｈｃｔ）和红细胞沉降率均明显降低（Ｐ＜０．０５），全血还原粘度（ηｒ）无显著改变。提示磷脂酰胆碱可改善衰老机体的血液流变性，具有延缓衰老的作用。

磷脂酰胆碱抗氧化作用的研究

磷脂酰胆碱500mg/kg灌胃20日可使O_3环境中的小鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性显著增强,血浆丙二醛(MDA)含量显著降低,说明磷脂酰胆碱具有抗氧化作用.

气功外气对大鼠血清 SOD 及全血 GSH-Px 活性作用的研究

本实验观察了气功外气对大鼠血清 SOD,全血 GSH-PX 活性的影响。结果表明,气功外气可明显增强老年大鼠 SOD 和 GSH-Px 的活性以及中年大鼠GSH-Px 的活性,但对中年大鼠 SOD 的作用不明显。说明气功外气具有延缓衰老的作用。

蓝藻基因表达载体系统的构建和应用

蓝藻是一类具植物型放氧光合作用特性的原核生物 .多数蓝藻富含营养物质 ,无毒 ,是表达外源目的基因的独特受体系统 .因此 ,构建适用于蓝藻表达外源目的基因的载体系统 ,并用于表达药物活性肽基因 ,已成为当前蓝藻基因工程研究的热点之一 .本课题组 10多年来率先在国内开展蓝藻基因工程研究 ,从蓝藻 Plectonema botyanum中分离得到了约 1.5kb的小质粒 ,以此为出发质粒 ,构建了蓝藻穿梭质粒 p PRS- 1和穿梭质粒表达载体 p PKE2 ;同时根据 DNA片段同源重组的性质 ,构建了蓝藻 Calothrix sp.PCC76 0 1、Synechococcus sp.PCC794 2的基因整合平台系统 .在国家 86 3项目经费资助下 ,利用构建的蓝藻质粒载体和基因整合平台系统 ,把人源胸腺素基因转入蓝藻 Calothrix sp.PCC76 0 1和 Synechococcus sp.PCC794 2 ,并能高效表达 ,首次获得了可直接口服的含人源胸腺素的转基因蓝藻 ,这对研究和开发基因工程口服药物具有重大的科学意义和经济。

柔嫩艾美尔球虫厦门株(Eimeria tenella)生物学研究

采用单卵囊分离方法从厦门地区饲养的鸡盲肠中获得艾美尔球虫．经显微观察、测量和感染实验．从寄生部位、卵囊形态、孢子化时间和潜伏期等指标测定．实验结果：采用琼脂板方法分离和挑选单卵囊方法进行感染效果理想。单卵囊感染小鸡成功率为60％．该球虫寄生在鸡盲肠部位．其余部位未发现．卵囊形态长卵圆形．长25．80(23．5～28．5)．宽20．86(18．5～23．5)．长／宽：1．23(1．21～1．27)．27℃条件下孢子化时间为20h．．潜伏期为146h．与国内一些株进行比较存在差别．确定该艾美尔球虫为柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)，并定名为柔嫩艾美尔球虫厦门株．

胸腺素α1抗体的制备和鉴定

目的 :制备用于检测转胸腺素基因蓝藻表达产物的特异性抗体。方法 :用提纯的小肽 (2 8个氨基酸 )胸腺素α1与牛血清白蛋白偶联后作为抗原 ,采用皮下多点注射免疫的方法免疫大鼠。经过 3个月的免疫 ,获得抗Tα的多克隆抗体。结果 :用间接酶联免疫吸附 (ELISA)方法 ,测得抗体效价超过 40 96。蛋白印迹 (Westernblot)检测结果显示 ,该抗体能特异性地与胸腺素α1抗原产生明显免疫亲和反应。结论

蓝藻热休克诱导高效表达系统的构建

以聚球藻Synechococcussp .PCC794 2作为基因工程受体菌 ,构建了热休克诱导的高效表达系统。用PCR法扩增并克隆出Synechococcussp .PCC794 2自身的热休克基因 groESL操纵子的强启动区 (2 4 0bp) ,并紧靠其后组装上泛素 (UB)融合的胸腺素α1(Tα1)目的基因 ,在下游组装有rbcSpolyA终止子。此外 ,还组装了一个完整的卡那霉素抗性基因作为筛选标记基因。这样 ,就构建了完整的蓝藻的基因表达系统。经转化蓝藻Synechococcussp .PCC794 2细胞 ,在 4 2℃热诱导 30min后 ,目的基因UB Tα1得到较高水平表达 ,表达量约占可溶性蛋白的 8.7%

人铜锌超氧化物歧化酶基因改良及在聚球藻中表达

应用PCR定点突变技术把质粒pESOD中人铜锌超氧化物歧化酶基因(hCu,Zn-SOD)的Cys111密码子突变为Ala111密码子,再构建重组子,通过随机同源重组将突变后的hCu,Zn-SOD整合入聚球藻Synechococcussp.PCC7942,并实现表达。表达产物用SDS-PAGE、Western blot、酶活等方法测定均为阳性反应;热稳定性测定显示,hCu,Zn-SOD在80℃保温30min后仍具有95%的活力,耐热能力比天然hCu,Zn-SOD有了较大的提高。蛋白扫描结果显示目的蛋白占可溶性蛋白的3.61%。

胸腺素α_1基因在钝顶螺旋藻中的表达

将钝顶螺旋藻 (Spirulinaplatensis)在 2 4℃培养 ,并经 2mmol/LEDTA预处理16～ 2 4h ,以本实验室构建的基因整合平台系统供体质粒 pEUTISI进行超声波转化螺旋藻 ,经筛选获得了具G4 18抗性的转化藻株。通过PCR扩增和Southern杂交证实 ,pEUTISI中目的基因UB Tα1和nptII基因已整合到钝顶螺旋藻染色体上。转化藻株经4 5℃热诱导 4 0min后 ,进行蛋白质SDS PAGE电泳和Westernblot,杂交结果证实 ,外源胸腺素α1基因在螺旋藻中得到有效表达。

钝顶螺旋藻不同形态藻丝体的蛋白质表达和生理差异的比较研究

无论是在生产还是在实验室培养条件下,螺旋藻多形性变异现象普遍存在.本研究从钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)中分离纯化获得了4种不同形态的藻丝体,分别是直线形藻丝体(spL)、低度螺旋形藻丝体(sps-L)、中度螺旋形藻丝体(sps-M)和高度螺旋形藻丝体(sps-H).对这4种不同形态螺旋藻的生长速率、光合作用、叶绿素a(Chl a)含量分别进行研究,发现这4种不同形态藻丝体在生长和光合生理上存在明显的差异.而总蛋白的SDS-PAGE分析也表明,不同形态藻丝体在蛋白的表达上也有差异,其中34 ku的蛋白只在直线形藻丝体spL中大量表达.

转胸腺素基因螺旋藻的表达及免疫增强活性研究

胸腺素α_1(Tα_1)是具有免疫增强作用的28肽,通过基因工程技术构建获得了转Tα_1)基因螺旋藻,分别得到了1～4个串联目的基因的表达株,ELISA和HPLC检测结果表明：最高表达量可达藻细胞可溶性蛋白的7％,通过饲喂鳗鱼苗试验表明能有效提高鳗鱼苗体内的胸腺素含量,增强鳗鱼苗的免疫力。免疫增强蓝藻作为鱼类饲料添加剂适口性好,每公斤饲料适宜添加量为0．5～1．0 g,可望成为水产养殖的新型免疫增强饵料藻。

关键链项目管理缓冲区计算方法研究

文章在全面介绍和综合比较目前各种项目缓冲区计算方法的基础上,指出项目缓冲区大小与项目工序持续时间的不确定性、项目管理者的风险偏好、资源约束、工序的复杂程度以及项目工序开工柔性程度等因素相关,提出基于项目综合属性特征的缓冲区计算方法,并指出对链路上工序时间参数的准确估计是该方法运用成功的前提条件。

抗胸腺素α1(Tα1)多克隆抗体的纯化及转基因藻中Tα1的检测

采用不同浓度的硫酸铵分级盐析纯化抗Tα1多克隆抗体,然后用不同量的牛血清白蛋白(BSA)与兔抗Tα1抗体进行中和,以去除血清中的抗BSA抗体,并利用纯化后的抗Tα1多克隆抗体检测转基因藻中Tα1.结果表明:采用25%(NH4)2SO4进行分离纯化,并将BSA加入到血清中进行中和,37℃处理30min,BSA的量与血清的比例以1μL血清+15μgBSA可达到中和血清中的抗BSA抗体的目的.获得的抗Tα1抗体效价与未进行分离前基本相同,并且阴性本底低.采用ELISA方法检测野生藻和转基因藻中的Tα1,转基因藻的Tα1OD450值比野生藻的高2.1倍以上,提示Tα1在转基因藻中成功表达.实验证明,此方法能有效纯化抗胸腺素α1多克隆抗体,获得特异性强的抗胸腺素Tα1抗体,并且效价不受影响.

蓝藻Synechococcus sp.PCC 7942穿梭表达质粒的构建及胸腺素α_1基因的表达

利用本实验室构建的含蓝藻Plectonema boryanum内源小质粒的穿梭质粒pPRS-1,改建成含热诱导启动子、泛素融合的胸腺素α_1(UB-Tα_1)目的基因、卡那霉素抗性选择标记、rbcs终止子的新的穿梭表达重组质粒pPRFUT。将这种重组质粒转化蓝藻Synechococcus sp.PCC7942,通过抗性筛选获得了具卡那霉素抗性的转化藻株。经Southern-blot杂交证实,穿梭表达质粒已转入蓝藻Synechococcus sp. PCC7942细胞中;在42℃热诱导30min后,目的基因UB-Tα_1得到较高水平表达,表达量约占总蛋白量的7.5%。

红景天甙对老龄大鼠肝脏的抗衰老实验研究

红景天为景天科红景天属,多年生草木植物,根茎为用药部。民间多做为强状剂。红景天甙为其主要成份。本文从自由基代谢角度研究和探讨了红景天甙对老龄大鼠肝脏的影响,为红景天的临床应用提供理论依据。

乙肝表面抗原S_2S基因在蓝藻Synechococcus sp. PCC7942中的表达研究

用PCR法将乙肝表面抗原基因S2 S片段从乙肝病毒中扩增得到 ,将其插入到蓝藻热休克表达载体 pEUTMT1中 ,构建成表达重组质粒 pES2ST1。将蓝藻Synechococ cussp .PCC794 2的总染色体与质粒 pES2ST1同时进行EcoRI和SacI双酶切 ,再连接构建成为系列含有蓝藻染色体DNA同源片段的供体表达质粒。经转化筛选得到蓝藻Synechococcussp .PCC794 2转化藻株。PCR和Southern杂交证明目的基因已经整合到宿主的染色体中。转化藻通过热诱导后 ,Northern blot结果呈阳性 ,用化学发光检测技术可以检测到微量目的蛋白的表达 ,检测含量约为 0 .78～ 0 .6 4ng/ml,目的蛋白约为可溶性蛋白的 1.1× 10 - 6 ～ 1.5× 10 - 6 。