补虚解毒化瘀方通过调控NCC/HIF-1α信号通路对梗阻性肾病大鼠的作用

目的探究补虚解毒化瘀方对梗阻性肾病大鼠对侧肾脏肾小管上皮细胞表型转化的作用。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、依普利酮组和中药(补虚解毒化瘀方)组,采用单侧输尿管结扎法制备梗阻性肾病大鼠模型,给予相应药物干预后,采用Masson染色观察肾脏病理形态,Western blot、免疫组化和免疫荧光法检测血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶-1(SGK-1)、钠氯协同转运蛋白(NCC)、低氧诱导因子(HIF-1α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,RT-qPCR法检测SGK-1、TGF-β1 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾小管间质炎性细胞浸润和局灶性胶原纤维沉积增加(P<0.01),SGK-1、NCC、HIF-1α、TGF-β1、Vimentin、α-SMA蛋白表达和SGK-1、TGF-β1 mRNA表达均升高(P<0.05,P<0.01);给予中药治疗后可改善以上指标(P<0.05,P<0.01)。结论大鼠单侧输尿管梗阻可以上调对侧肾组织NCC表达,刺激HIF-1α表达并诱导小管上皮细胞表型转化,而补虚解毒化瘀方可调控NCC/HIF-1α信号通路抑制细胞表型转化。

益气活血解毒方抑制UUO大鼠肺脏淋巴管生成及淋巴管内皮细胞表型转化

目的研究益气活血解毒方抑制梗阻性肾病大鼠肺脏淋巴管生成及淋巴管内皮细胞表型转化的作用。方法选用雄性Wistar大鼠80只,随机分为假手术组(Sham)、单侧输尿管结扎组(UUO)、依普利酮治疗组(EPL)和中药治疗组(TCM),每组20只。采用结扎左侧输尿管复制梗阻性肾病大鼠模型。术后给予含药饲料(依普利酮100 mg·kg^(-1)·d^(-1)、益气活血解毒方免煎颗粒1.92 g·kg^(-1)·d^(-1))。180天后摘取大鼠肺脏。HE及天狼星红染色观察肺组织病理,Western blot、免疫组化及免疫荧光染色法检测淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)、血管内皮生成因子-C(VEGF-C)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、I型胶原蛋白(Collagen I)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)、血清糖皮质激素诱导蛋白激酶-1(SGK-1)以及盐皮质激素受体(MR)等指标表达情况。结果UUO大鼠肺脏呈现明显的纤维化改变,胶原沉积明显增多,伴有淋巴管增多及大量炎性细胞浸润,α-SMA、Vimentin、LYVE-1、VEGFR3、VEGF-C、IL-1β、MCP-1、TNF-α、NF-κB、p-SGK-1、MR及CollagenⅠ表达增强(P<0.05)。益气活血解毒方治疗后纤维化程度、淋巴管生成及炎症损伤等均明显减轻。结论益气活血解毒方可通过调控MR/NF-κB/VEGF-C通路,抑制肺淋巴管生成及淋巴管内皮细胞表型转化,减轻梗阻性肾病诱导的肺脏纤维化。

依普利酮通过下调VEGF表达抑制UUO模型大鼠对侧肾脏血管新生并减轻肾脏纤维化

目的:观察依普利酮抑制单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠对侧肾脏血管新生及肾脏纤维化的作用。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO组和依普利酮组,每组10只。除假手术组外,其余各组大鼠行UUO手术复制梗阻性肾病模型。依普利酮组以100 mg·kg^(−1)·d^(−1)加入饲料中喂养,连续给药180 d后摘取对侧肾脏。天狼星红染色观察大鼠肾脏组织纤维化改变;免疫荧光检测血管新生标志物CD34、血管内皮生长因子A(VEGF-A)和VEGF受体2(VEGFR2)的表达;免疫组化检测血清/糖皮质激素调节激酶1(SGK1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)和结缔组织生长因子(CTGF)等促炎、促纤维化细胞因子的表达;RT-qPCR检测SGK1、TGF-β1和NF-κB的mRNA表达;Western blot检测VEGF-A、VEGFR2、SGK1、TNF-α、TGF-β1和CTGF的蛋白表达。结果:UUO大鼠对侧肾脏胶原纤维沉积明显增多,血管增生明显,VEGF-A、VEGFR2、SGK1、TNF-α、TGF-β1和CTGF的表达均显著增强(P<0.05);RT-qPCR结果显示,UUO组SGK1、TGF-β1和NF-κB的mRNA表达较假手术组显著升高(P<0.05)。依普利酮治疗后,CD34、VEGF-A、VEGFR2、SGK1、TGF-β1和NF-κB的表达均受到抑制(P<0.05)。结论:依普利酮可通过下调VEGF的表达抑制UUO大鼠对侧肾脏病理性血管新生并减轻纤维化损伤。

益气活血解毒中药调控VEGF通路抑制单侧输尿管结扎大鼠对侧肾脏淋巴管生成的研究

观察益气活血解毒中药对单侧输尿管结扎大鼠对侧肾脏淋巴管新生的影响及作用机制。将40只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)、单侧输尿管结扎组(UUO)、依普利酮治疗组(EPL)和中药治疗组(TCM),每组各10只。除假手术组外,其余大鼠结扎单侧输尿管(UUO)复制肾间质纤维化动物模型。术后10天摘取大鼠对侧肾脏,HE、Masson检测肾脏病理,免疫荧光及组化方法检测NCC、VEGF-C、VEGFR-3、LYVE-1、PDPN、α-SMA、Vimentin的表达。Western blot检测肾组织NCC、VEGF-C、VEGFR-3和α-SMA的蛋白表达。病理结果显示UUO大鼠对侧肾脏小管间质炎性细胞浸润增多并伴局灶胶原纤维沉积;NCC及VEGF-C表达增强;淋巴管生成标志物LYVE-1、VEGFR-3、PDPN表达增强并与肌成纤维细胞标志物α-SMA、Vimentin呈共表达;益气活血解毒中药可抑制NCC表达、淋巴管生成及表型转化。以上结果说明益气活血解毒中药可调控VEGF通路,抑制梗阻性肾病对侧肾脏淋巴管生成及表型转化,减缓肾脏纤维化进展。

丹参多酚酸盐减轻糖尿病肾病小鼠肾纤维化的机制研究

【目的】探讨丹参多酚酸盐对小鼠糖尿病肾病的干预作用及机制。【方法】将60只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、贝那普利组、丹参多酚酸盐组,每组15只。除正常组,其他组别采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法复制糖尿病肾病小鼠模型。造模成功后随机分为模型组、贝那普利组、丹参多酚酸盐组,丹参多酚酸盐组、贝那普利组分别灌胃相应的药物,正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水,共4周。给药结束后,检测24 h尿蛋白定量(UTP),血清空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr),酶联免疫吸附分析(ELISA)检测小鼠肾组织中超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,分别采用过碘酸六胺银(PASM)染色和Masson染色法观察肾脏病理学变化,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法分别检测小鼠肾脏组织中p-Smad2/3、Smad2/3、Smad7蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠肾脏组织中Smad7、Smad2/3、TGF-β1 m RNA表达水平。【结果】与正常组比较,模型组FBG、UTP均显著增加(P<0.05),肾脏组织可见明显病理改变,肾脏组织中的MDA含量显著升高,SOD、GSH-Px活性下降,p-Smad2/3/Smad2/3比值,Smad2/3、TGF-β1 m RNA表达水平明显升高,Smad7蛋白与m RNA表达水平明显下降(均P<0.05);与模型组比较,丹参多酚酸盐组、贝那普利组UTP降低(P<0.05),受损的肾组织得到改善,肾组织中MDA含量下降,SOD、GSH-Px活性升高,p-Smad2/3/Smad2/3比值,Smad2/3、TGF-β1 m RNA表达水平显著降低,Smad7蛋白与m RNA表达水平升高(均P<0.05)。【结论】丹参多酚酸盐可明显改善糖尿病肾病小鼠肾功能,其机制可能与抑制氧化应激反应和调控TGF-β1/Smad信号通路,从而减轻肾纤维化有关。