血清氯化物对慢性肾脏病患者并发心力衰竭的预测价值

目的:通过分析影响慢性肾脏病(CKD)患者并发心力衰竭患病特征,探究血清氯化物对CKD患者并发心力衰竭的预测价值。方法:选取收治的CKD患者252例为研究对象,分为心力衰竭组(n=72)与无心力衰竭组(n=180),随访1年,比较两组性别、年龄及实验室检查结果。结果:多因素Logistic回归分析显示血清氯化物、白蛋白是CKD患者并发心力衰竭的保护因素,左室收缩末期内径是CKD并发心力衰竭的危险因素(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线显示,血清氯化物预测CKD并发心力衰竭的曲线下面积(AUC)为0.7270、临界值为103.6 mmol/L、敏感性为64.9%、特异性为80.00%。线性相关结果示,血清氯化物与血肌酐呈负相关(r=-0.2650,P=0.0225)。结论:CKD有较高的心力衰竭发生率(28.8%),血清氯化物是CKD并发心力衰竭的独立影响因素,其监测对预测CKD并发心力衰竭有重要的应用潜力。

清肾颗粒通过调控外泌体、miR-330-3p以及CREBBP表达抑制小鼠肾纤维化

目的探讨清肾颗粒对腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型及尿酸刺激下NRK-49F细胞的作用及其调控外泌体、miR-330-3p和CREBBP的机制。方法动物实验:构建腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型,分为正常组、模型组和清肾颗粒组(8.0 g·kg^(-1)·d^(-1)),6只/组,灌胃12周。采用尾静脉注射腺相关病毒载体,实验结束后收集双侧肾组织。观察小鼠肾组织外泌体标记蛋白CD9,Hsp70,TSG101蛋白水平变化;Western blotting及免疫荧光检测小鼠肾组织Col-III、α-SMA、FN和E-cad表达变化;HE和Masson染色观察小鼠肾组织病理学变化。细胞实验:构建尿酸刺激下的NRK-49F细胞模型(尿酸400μmol/L),SD大鼠灌胃制备清肾颗粒含药血清用于细胞实验,分为正常组、模型组和清肾颗粒含药血清组。观察NRK-49F细胞中外泌体标记蛋白CD9,Hsp70,TSG101蛋白水平变化;Western blotting及免疫荧光检测NRK-49F细胞中Col-III、α-SMA、FN和E-cad表达变化;双荧光素酶报告基因检测miR-330-3p与CREBBP靶向关系;RT-qPCR和Western blotting检测NRK-49F细胞中miR-330-3p与CREBBP表达变化。结果动物实验中,Western blotting结果显示,与正常组相比,模型组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平降低(P<0.05)。Western blotting及免疫荧光结果显示,与正常组相比,模型组Col-III、α-SMA、FN表达增加,E-cad表达减少(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组Col-III、α-SMA、FN表达减少,E-cad表达增加(P<0.05)。肾脏病理检查显示,清肾颗粒可以明显减轻小鼠肾组织纤维化(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,尾静脉注射腺相关病毒病毒载体抑制miR-330-3p表达,增加CREBBP水平,减轻肾纤维化(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,CREBBP是miR-330-3p的靶点(P<0.05)。RT-qPCR和Western blotting结果显示,与正常组相比,模型组miR-330-3p表达增加,CREBBP表达减少(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组miR-330-3p表达减少,CREBBP表达增加(P<0.05)。细胞实验结果与动物实验结果趋势一致。结论清肾颗粒通过干预外泌体,降低miR-330-3p水平,增加CREBBP表达抑制肾纤维化。

王亿平“宣、化、渗、利”四法在慢性肾脏病湿热证中的应用

湿热是慢性肾脏病的常见病因,湿热证是慢性肾脏病的主要证候之一,也是导致肾功能损害进展的关键因素,因而诊治“湿热证”对于延缓慢性肾脏病进展具有重要意义。王亿平教授长期从事中医药防治肾脏疾病临床及科研工作,根据慢性肾脏病湿热的证候特点,总结出宣肺利湿热、健脾化湿热、淡渗利湿热、利尿清湿热之“宣、化、渗、利”四法治疗慢性肾脏病湿热证,取得满意疗效。同时强调临证时需注意湿热有偏盛,病位侧重亦有所不同,当具体分析,合理配伍。该文从病因病机、治疗组方用药等方面,分析了王亿平教授诊治慢性肾脏病湿热证的经验。

油菜主要病虫害与防治方法研究——以重庆市长寿区为例

油菜是长寿区重要的油料作物,确保油菜安全稳定生产非常关键。油菜种植时,病虫害防治是一项非常关键的工作,其技术方法应用是否科学、规范,会对油菜的产量、品质以及粮油稳定性产生极大的影响。为实现油菜高产稳产的目标,做好油菜病虫害防治工作具有重要的现实意义。文章以长寿区为例,着重对油菜主要病虫害防治方法展开了深入研究。

优化水稻种植技术提高种植效益策略分析

水稻是重庆地区重要的粮食作物,近年来,当地不断推进农业现代化水稻种植模式,并通过对种植技术优化调整的方式,提升水稻种植产量和品质,在很大程度上增强了水稻种植的经济效益。从现阶段水稻种植情况来看,由于水稻种植容易受到外界因素的影响,会阻碍水稻种植效益的提升。面对此种情况,应落实对水稻种植技术的优化,从而解决种植中存在的问题,实现高品质、高产量种植,提升种植效益。本文就从重庆长寿区水稻种植技术的现状进行分析,结合优化水稻种植技术的策略,提出水稻种植技术的推广措施,从而实现水稻种植效益的提升。

成花素基因PdFT的克隆及其对牡丹成花的影响

【目的】克隆紫牡丹FT同源基因,分析其表达模式以及对紫牡丹成花的调控作用。【方法】以紫牡丹为试验材料,通过RT-PCR的方法克隆紫牡丹FT同源基因PdFT。通过实时荧光定量PCR分析PdFT在紫牡丹不同组织、紫牡丹开花物候期各过程及不同处理的表达情况,并探讨PdFT与花芽发育状态的关系。同时,将克隆到的紫牡丹PdFT克隆到表达载体pET-28a上,构建融合表达载体pET-28a-PdFT,转化到大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。【结果】克隆得到包括完整开放阅读框(ORF)的PdFT cDNA序列,ORF长度为522 bp,编码173个氨基酸,GenBank登录号为KF113360。氨基酸序列比对表明:PdFT蛋白具有一个典型的PEBP结构域,属于PEBP家族;并且与GenBank中已克隆的FT同源基因具有高度的同源性。实时荧光定量PCR分析结果表明,PdFT在紫牡丹根、茎、叶、芽中均有表达,芽中表达量最高,叶中表达量最低。紫牡丹开花物候期各过程PdFT的表达分析表明,在花芽膨大期表达量最高,随着花蕾的发育,PdFT的表达量逐渐降低。PdFT在不同光照温度条件下的表达分析表明,短日照和低温处理均抑制PdFT基因的表达。不同状态花蕾中PdFT的表达分析结果表明,败育花蕾PdFT的表达量低于正常花蕾。同时,GA3及去叶处理均能提高PdFT的表达量。所构建的原核表达载体,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白与预期蛋白大小一致。【结论】紫牡丹PdFT与已克隆的FT同源基因高度同源,属于FT亚家族,在紫牡丹顶芽中表达量最高,可能调控牡丹开花,PdFT的克隆及表达分析为研究紫牡丹成花的分子机理奠定了基础。

牡丹开花调控转录因子基因PrSOC1的克隆与表达分析

以紫斑牡丹(Paeonia rockii)花芽为试验材料,采用RT-PCR的方法克隆得到1个牡丹开花调控的重要转录因子SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1(SOC1)基因的同源基因PrSOC1,其c DNA开放阅读框长度为678 bp,3′非编码区为421 bp,编码225个氨基酸,Gen Bank登录号为KJ427808。序列比对和结构域分析表明,此蛋白包含典型的MADS-box和K-box结构域,C末端还含有一个保守性很高的基序—SOC1 MOTIF,与葡萄中的SOC1蛋白最为相似。系统进化树分析表明,PrSOC1与葡萄Vv SOC1的亲缘关系最近,属于MADS基因家族中的SOC1/TM3亚家族。半定量RT-PCR表明,PrSOC1基因在紫斑牡丹花芽中的表达量最高,根、茎、叶片中次之,种子中最少。在不同品种牡丹的花芽中,PrSOC1和其光周期途径上游的CO家族基因Ps COL4的表达量没有显著的品种间差异,推测PrSOC1具有很高的保守性,可能是参与牡丹成花的重要基因。利用原核表达系统成功表达了PrSOC1蛋白,并构建了PrSOC1的植物超表达载体,为进一步研究PrSOC1的功能奠定了基础。

牡丹泛素延伸蛋白基因ubiquitin的克隆及其作为内参基因的研究

以牡丹品种‘洛阳红’(Paeonia suffruticosa‘Luoyanghong’)为试验材料,采用RT-PCR方法获得一个牡丹泛素延伸蛋白基因Psubiquitin(PsU BI),其c DNA开放阅读框(ORF)长度为447 bp,编码148个氨基酸,Gen Bank登录号为KP742952。序列比对发现,该基因与其他23种植物泛素延伸蛋白核苷酸序列的相似性均在81%以上,氨基酸序列的相似性达96%。进化分析表明,牡丹泛素延伸蛋白与棉花泛素延伸蛋白的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果显示,在牡丹不同组织器官中,相对于其他5个常用看家基因(GAPDH、GAPDH1、tubulin、tubulin2、18S r RNA),ubiquitin的PCR扩增曲线的CT值最为恒定,尤其是在不同花器官中的CT值完全一致。进一步分析发现该基因在牡丹的根、茎、叶片、花、雄蕊和心皮组织中均恒定表达,特别是花器官中的表达量几乎完全一致。以ubiquitin作为内参基因探讨控制花器官发育的基因Ps AG的表达情况,结果显示PsA G的表达模式与其作用位点相吻合,ubiquitin更适宜作为牡丹花器官研究的内参基因。

牡丹开花调控转录因子基因PsCOL4的克隆、表达与系统进化分析

采用RT-PCR方法从‘紫罗兰’牡丹(Paeonia suffruticosa‘Ziluolan’)花芽中克隆得到1个重要开花调控转录因子基因CONSTANS-like,其cDNA全长1 125 bp,编码373个氨基酸。序列比对和结构域分析表明,此蛋白包含两个B-box型锌指结构和1个CCT结构域,与拟南芥的AtCOL4最为相似,将其命名为PsCOL4,GenBank登录号为KF113358。系统进化树分析表明,PsCOL4与葡萄编码的VvCOL4的亲缘关系最近,属于第1群组CO类似基因。实时定量PCR表明,PsCOL4在不同组织器官中均有表达,其中茎和叶中的表达量最高,根中最低。在花芽不同发育时期,PsCOL4的表达呈现递减趋势。不同光周期条件下,PsCOL4的表达稍有不同,短日照条件下在叶中的表达有所增加,茎中稍有减少。

牡丹PobZIP1在种子发育中的表达及其与ABA含量的关系

采用RT-PCR方法从‘凤丹’牡丹(Paeonia ostii‘Fengdan’)种子中克隆得到1个与ABA信号途径相关的转录因子基因PobZIP1,并利用超高效液相色谱—串联质谱(UPLC–MS/MS)的方法测定了不同发育时期种子的ABA含量。PobZIP1 cDNA全长957 bp,编码318个氨基酸,其编码的蛋白C末端含有bZIP转录因子的典型结构域,GenBank登录号为KJ009392。PobZIP1蛋白与拟南芥bZIP转录因子聚类分析显示,PobZIP1转录因子属于拟南芥bZIP转录因子的A亚族,与AtbZIP39/ABI5聚在一起。与其他物种bZIP蛋白的系统进化分析表明,牡丹PobZIP1与蔷薇科的苹果bZIP亲缘关系最近。SqRT-PCR结果表明:PobZIP1在‘凤丹’牡丹根、茎、叶和花芽中均有表达,其中花芽中的表达量最低,根、茎、叶中的表达量相近。在种子发育过程中,PobZIP1的表达呈现出先增加后降低的趋势。ABA含量测定结果显示,随着种子的发育ABA含量迅速上升,达到最大值后缓慢下降并保持在较高水平。推测种子发育后期,较高含量的ABA和表达相对较高的PobZIP1可能是诱导种子休眠形成的原因。

牡丹隐花色素基因PsCRY2的克隆与表达分析

以‘秋发1号'和‘洛阳红'牡丹(Paeonia suffruticosa)为试验材料,采用RT-PCR的方法从花芽中克隆得到1个隐花色素基因Cryptochrome 2,其ORF全长为1902 bp,编码633个氨基酸,基因登录号为KP982893。序列比对和结构域分析表明,此蛋白包含1个PHR和1个CCT结构域,与拟南芥中AtCRY2最为相似,将其命名为PsCRY2。系统进化树分析表明,PsCRY2与甜橙(Citrus sinensis)CsCRY2亲缘关系最近。实时荧光定量PCR表明,PsCRY2在牡丹的不同组织器官中均有表达。其中,成年植株的花芽以及种子胚的表达量最高,幼苗根、茎、叶次之。在整个花芽分化不同时期,PsCRY2的表达呈现较高的表达水平;在花蕾发育不同时期,PsCRY2的表达呈现先降低再升高而后有降低的趋势,大风铃期表达量最高,推测PsCRY2在花芽分化和花蕾发育的过程中均起到重要作用。在‘洛阳红'和‘秋发1号'牡丹春季花芽发育过程中,PsCRY2的表达均呈升高的趋势,‘秋发1号'显著高于‘洛阳红'。不同光周期条件下,PsCRY2表达稍有不同。与长日照条件相比,短日照条件下PsCRY2在现蕾期和小风铃期的表达量均下降。