透骨消痛颗粒含药血清诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化

背景:骨髓基质干细胞根据环境而有不同的分化路径,在特定的环境中有分化为透明软骨细胞的趋势,可能为治疗骨性关节炎提供新思路。目的:观察透骨消痛颗粒含药血清对骨髓基质干细胞向软骨分化的影响。方法:取SD大鼠四肢建立体外培养的骨髓基质干细胞,取第3代骨髓基质干细胞进行干预,分为生理盐水血清组、透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组、诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组。Real time PCR及Western Blot检测Sox9、collagenⅡ、collagenⅩ mRNA及蛋白表达。结果与结论:含药血清干预14d后,Sox9、collagenⅡ、collagenⅩ mRNA及蛋白表达水平,透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组、诱导软骨组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组明显高于生理盐水血清组(P<0.05,P<0.01),诱导软骨组、透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组、透骨消痛颗粒醇提物血清+诱导软骨剂组明显高于透骨消痛颗粒水提物血清组、透骨消痛颗粒醇提物血清组(P<0.01),其中Sox9表达透骨消痛颗粒水提物血清+诱导软骨剂组高于诱导软骨。说明透骨消痛颗粒含药血清通过上调Sox9的表达,加速骨髓基质干细胞细胞向软骨细胞分化。

透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变。目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白的影响。方法:将SD大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素1β诱导软骨细胞退变,取第2代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8d后,采用RT-PCR检测2组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达。结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象。说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成β-连环蛋白和Wnt4蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达。

透骨消痛颗粒干预膝骨性关节炎早期环氧合酶2和诱导型一氧化氮合酶的表达

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风、川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效改善膝骨性关节炎的症状,但其具体机制尚不清楚。目的:观察透骨消痛颗粒对膝骨性关节炎早期环氧合酶2和诱导型一氧化氮合酶表达的影响。方法:将90只新西兰大白兔随机等分为6组:除正常组外均采用改良Hulth法建立骨性关节炎动物模型,透骨消痛颗粒低、中、高剂量组及壮骨关节丸组分别在造模的基础上每天灌胃给予含透骨消痛颗粒5,10,20g或壮骨关节丸10g的水溶液。4周后,检测兔关节滑液中一氧化氮、一氧化氮合酶、前列腺素E2及关节软骨和滑膜组织中诱导型一氧化氮合酶、环氧合酶2的水平。结果与结论:骨性关节炎早期,关节滑液中一氧化氮、一氧化氮合酶、前列腺素E2水平及滑膜和软骨中环氧合酶2、诱导型一氧化氮合酶表达均明显升高。透骨消痛颗粒及壮骨关节丸均可降低关节滑液中一氧化氮、一氧化氮合酶、前列腺素E2及滑膜和软骨中环氧合酶2、诱导型一氧化氮合酶的表达,以透骨消痛颗粒中、高剂量组作用更明显。提示透骨消痛颗粒可通过抑制环氧合酶2和诱导型一氧化氮合酶表达,从而抑制软骨降解,缓解临床症状,达到保护关节软骨、防治骨性关节炎的作用。

hVEGF165基因转染后骨髓间充质干细胞蛋白分泌功能及成骨活性的检测

目的:血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在血管再生和骨组织再生过程中起着重要的调节作用。观察hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞分泌VEGF的功能及转染后细胞的成骨活性。方法:实验于2004-07/2005-12在江苏省血液研究所国家重点实验室完成。①体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,传代培养后以1μg PcDNA3.1-hVEGF165∶3μL阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过免疫组织化学SP方法检测转染后细胞中外源性VEGF的表达。②体外分离、培养大鼠肾微血管内皮细胞,分别加入hVEGF165基因转染48h及1周后细胞上清、空载体转染及未转染组细胞上清,MTT法观察细胞增殖情况,以了解转染后细胞培养上清中VEGF的生物学活性。③测定在正常条件培养和成骨条件培养下,转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平。结果:①hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞能成功分泌VEGF蛋白。②hVEGF165基因转染48h组大鼠肾微血管内皮细胞A值高于空载体转染及未转染组(P<0.05),但低于hVEGF165基因转染1周组。③成骨条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组(P<0.05);而在正常条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低。结论:①采用基因转染技术可将hVEGF165基因转染到骨髓间充质干细胞中并可有效表达具有生物活性的VEGF,且这种生物学活性呈剂量依赖性。②在成骨条件培养下,转染hVEGF165基因后骨髓间充质干细胞的成骨能力增强。

透骨消痛颗粒水提与醇提物含药血清干预骨髓基质干细胞活性的实验研究

背景:骨髓基质干细胞根据环境而有不同的分化路径,在特定的环境中有分化为透明软骨细胞的趋势,可能为治疗骨性关节炎提供新思路。目的:观察透骨消痛颗粒水提与醇提物含药血清对骨髓基质干细胞活性的影响。方法:制备透骨消痛颗粒水、醇提物,108只SD大鼠随机摸球法均分为低、中、高剂量对照组、水、醇提物组,腹主动脉采血制备含药血清。取4周龄SD大鼠四肢骨髓基质干细胞,第3代同步化后用含药血清进行干预,MTT检测其活性,流式细胞仪检测其周期分布,Real time PCR检测Cyclin D1 mRNA表达,Western Blot检测Cyclin D1蛋白表达。结果与结论:透骨消痛颗粒水、醇提物含药血清干预48h后,软骨细胞的A值中高剂量组明显高于对照组(P<0.01,P<0.05);各组G0/G1期细胞,水、醇提物组明显低于对照组(P<0.01),水提物组明显低于醇提物组(P<0.05);各组增殖指数及Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水、醇提物组明显高于对照组(P<0.01),水提物组明显高于醇提物组(P<0.05)。说明透骨消痛颗粒水醇提物含药血清通过上调Cyclin D1的表达,加速骨髓基质干细胞周期的进程,从而促进其增殖,且透骨消痛颗粒水提物的效果优于醇提物。

血管内皮细胞生长因子基因转染骨髓基质细胞的瞬时表达与稳定表达

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因修饰的大鼠骨髓基质细胞(BMCS)的表达能力及表达活性。方法取6周龄SD大鼠BMCS传代培养后以3μl阳离子脂质体(Lipofectamine):1μgpcDNA3.1-VEGF165的比例转染,通过RT-PCR技术、免疫组织化学S-P法检测转染细胞中外源性VEGF165基因的转录及瞬时表达和稳定表达,用血管内皮细胞(VEC)增殖试验测定转染细胞培养上清中VEGF的生物活性。结果VEGF基因转染的大鼠骨髓基质细胞可有效转录VEGF165,其分泌培养上清液中的表达产物可促进血管内皮细胞增殖,具有很强的生物活性。结论采用基因转染技术可将VEGF转染至BMCS中,并可有效表达具有生物活性的VEGF。

Orthofix外固定支架治疗中青年桡骨远端粉碎性骨折疗效观察

应用Orthofix外固定支架治疗16例（18处）中青年桡骨远端粉碎性骨折。经随访2～12个月（平均6．3个月），结果优11例12处．良3例4处，可2例2处，仅2例3处出现针道浅表感染，未发现其他并发症。认为外固定支架治疗中青年高能量所致的桡骨远端粉碎性骨折，不仅骨折复位满意，而且固定确实可靠。关节功能恢复满意，是一种有效的治疗方法。

透骨消痛胶囊干预膝骨性关节炎早期COX-2炎症途径的实验研究

目的探讨透骨消痛胶囊对膝骨性关节炎早期COX-2炎症途径的影响,从炎症途径阐明透骨消痛胶囊治疗膝OA的作用机制。方法改良Hulth法建立骨关节炎动物模型,随机分为6组,模型组、对照组(壮骨关节丸组)、实验Ⅰ组(透骨消痛胶囊低剂量组)、实验Ⅱ组(透骨消痛胶囊中剂量组)、实验Ⅲ组(透骨消痛胶囊高剂量组)及正常组,灌胃给药4周后处死动物取材,行关节内COX-2、PGE2浓度检测。结果骨性关节炎关节局部表达COX-2,透骨消痛胶囊可降低关节液中PGE2含量以及滑膜、软骨中COX-2水平,其中透骨消痛胶囊中剂量组及高剂量组作用更明显,与透骨消痛胶囊低剂量组及对照组比较有显著差异(P<0.05),但两者之间无显著差异。结论关节局部COX-2是引起膝骨性关节炎的重要介质。透骨消痛胶囊通过抑制OA早期滑膜和软骨细胞中COX-2的表达及其诱导产物PGE2的生成,从而达到控制OA早期炎症、缓解疼痛、减轻症状的目的 。

可吸收螺钉治疗髋关节后脱位合并股骨头骨折12例疗效观察

目的探讨应用可吸收螺钉治疗髋关节后脱位合并股骨头骨折的临床治疗效果。方法选择髋后外侧入路，采用可吸收螺钉固定手术治疗12例髋关节后脱位合并股骨头骨折患者。结果12例均获随访，时间5～36个月。依据Thompso-Epstein评分中临床和放射学评价标准，优6例，良4例，可1例，差1例。未出现可吸收螺钉断裂及异物反应现象，无深部感染及创伤性关节炎等并发症发生。结论采用髓后外侧入路可吸收螺钉治疗髋关节后脱位合并股骨头骨折，可获得较理想的治疗效果。

骨髓方急性毒性与皮肤刺激试验

骨髓方是著名中医骨伤专家许书亮教授治疗慢性骨髓炎的秘验方,按中医理论配制,长期应用于临床,效果明显.由皂角刺、蒲公英、生地黄、穿山甲、炙全蝎、芍药等组成,具有清热解毒、托里排脓、活血化瘀之功效.为考查其用药的安全性,我们对骨髓方提取液进行急性毒性和皮肤刺激试验.现将结果报告如下.

骨质疏松性椎体骨折塌陷伴迟发性神经损害的治疗进展

随着世界人口老龄化，骨质疏松已成为一项全球化的健康问题。骨折是骨质疏松最严重的后果．而骨质疏松性椎体骨折是最常见的骨折类型。骨质疏松性椎体骨折大多数可通过保守治疗获得骨折愈合，但仍有约10％～30％并发骨折不愈合，并渐进性出现骨质疏松性椎体骨折塌陷（osteoporotic vertebral collapse，OVC）；其中约3％的OVC伴有迟发性神经损害（delayed neurological deficits．DND）。

透骨消痛胶囊含药血清对膝骨关节炎关节滑膜细胞uPA系统及炎性因子的影响

背景:透骨消痛胶囊是治疗骨性关节炎的临床验方,作用机制尚未完全阐明。尿激酶型纤溶酶原激活系统参与软骨细胞外基质降解和滑膜增生,在骨性关节炎发生、发展中起重要作用。目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的膝骨性关节炎大鼠滑膜细胞表达尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、纤溶酶原激活剂抑制剂、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的影响,探讨透骨消痛胶囊防治膝骨性关节炎的作用机制。方法:采用4%木瓜蛋白酶注射关节腔复制大鼠膝骨性关节炎模型;胶原酶消化法原代培养正常滑膜细胞与骨性关节炎滑膜细胞,将所培养滑膜细胞分为正常组、模型组和透骨消痛胶囊组,前2组细胞用空白血清培养,透骨消炎胶囊用含药血清培养;透骨消痛胶囊含药血清作用骨性关节炎滑膜细胞72 h后,采用Western Blot法检测滑膜细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、纤溶酶原激活剂抑制剂、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α蛋白的表达。结果与结论:透骨消痛胶囊含药血清组尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α蛋白表达量均降低,纤溶酶原激活剂抑制剂表达量升高,与模型组相比均有显著性差异,提示透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制骨性关节炎滑膜细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的表达,提高纤溶酶原激活剂抑制剂的表达。

疏密波最佳波段组合诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化

背景:已证实疏密波对病变组织有兴奋作用,能够促进病变组织的新陈代谢,课题组前期研究发现其对骨性关节炎具有良好的治疗作用。目的:探讨疏密波诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的最佳波段组合,并从分子生物学水平阐明疏密波调控骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的机制。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-10/2008-03在福建中医学院中西医结合研究院完成。材料:清洁级健康4周龄SD大鼠45只,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。疏密波发射仪由福州大学生物医学仪器研究所提供。根据同一周期疏密波比例的不同,分为以下3种工作模式:模式Ⅰ为疏波∶密波=1∶1,模式Ⅱ为疏波∶密波=2∶1,模式Ⅲ为疏波∶密波=1∶2。方法:抽取大鼠骨髓液,用全骨髓贴壁培养法体外分离纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞。取传至第3代细胞,接种后加入含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM培养液,根据仪器工作模式的不同分为:疏密波1∶1组、疏密波2∶1组、疏密波1∶2组、空白对照组。各诱导组按干预时间的不同又分为2个亚组:诱导30min和诱导60min,每天诱导1次,共14d。主要观察指标:RT-PCR半定量分析Cbfa1mRNA及Sox9mRNA的表达,甲苯胺蓝染色检测糖胺聚糖的表达,免疫组化染色检测Ⅱ型胶原基质的表达。结果:体外培养14d可获得均质性较好的骨髓间充质干细胞,传至第3代CD45阳性率为1.91%,CD90阳性率为98.22%。诱导14d后,各疏密波诱导组Cbfa1mRNA,Sox9mRNA均呈阳性表达,而空白对照组未表达。甲苯胺蓝染色可见诱导后细胞胞质和细胞外基质异染,空白对照组无明显异染;免疫组化染色可见各诱导组多数细胞的胞浆呈棕黄色阳性表达,且疏密波1∶2组Ⅱ型胶原的表达优于疏密波2∶1组,疏密波2∶1组优于疏密波1∶1组,空白对照组细胞为阴性表达。结论:疏密波能诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为软骨细胞表型,且疏波∶密波=1∶2的波段组合效果最佳,其作用主要是通过上调Cbfa1mRNA和Sox9mRNA的表达进而促进糖胺聚糖和Ⅱ型胶原基质的表达来实现的。

川芎嗪含药血清干预软骨细胞周期作用机制的研究

目的:探讨川芎嗪含药血清干预软骨细胞周期的作用机制。方法:取4周龄新西兰兔膝关节关节软骨Ⅱ型胶原酶消化,建立软骨细胞体外培养体系,体外培养第三代软骨细胞随机分为3组,分别加入培养液、空白血清、含药血清继续培养24 h、48 h后,采用流式细胞仪检测软骨细胞周期的变化。结果:流式细胞仪细胞周期检测显示川芎嗪含药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,干预48 h后G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与正常组、空白组有显著性差异(P<0.05)。结论:川芎嗪含药血清能有效推动软骨细胞周期的进程。

骨髓方治疗慢性骨髓炎的实验研究

目的 观察骨髓方治疗大鼠慢性骨髓炎的疗效。方法 采用SD大鼠建立慢性骨髓炎模型 ,随机分成四组 :骨髓方Ⅰ组、骨髓方Ⅱ组、对照组和空白组。治疗 1个月 ,观察WBC、RBC、E -C3bRR、E -ICR、血清溶菌酶含量、骨X线、病理组织学指标。结果 骨髓方Ⅰ、Ⅱ组与空白组差异有非常显著性 (P <0 0 1) ;RBC、E -C3bRR、E -ICR、血清溶菌酶含量指标骨髓方Ⅰ、Ⅱ组明显优于对照组(P <0 0 1)。光镜下病理组织学观察骨髓方Ⅰ、Ⅱ组明显优于对照组和空白组 ;电镜下 ,骨髓方Ⅰ、Ⅱ组细胞结构受损程度小于对照组和空白组。结论 骨髓方治疗慢性骨髓炎有较好疗效 ,提示与其提高机体免疫力。

颈前路减压固定融合治疗神经根型颈椎病疗效分析

神经根型颈椎病在颈椎病中最常见约占60％～70％。临床上大部分患者均可以保守治疗，但对于疼痛较明显，影响正常生活和工作的或非手术治疗效果不佳的患者必须手术治疗。自2008年1月至2010年11月采用颈前路减压固定融合治疗神经根型颈椎病13例，疗效满意。现总结报告如下。

骨关节炎“本痿标痹”内涵探讨

基于骨关节炎的核心病机为本痿标痹,软骨退变为骨关节炎主要病理变化,炎症反应为其主要临床表现,从软骨细胞凋亡和炎症反应探讨骨关节炎"本痿标痹"的科学内涵,提出软骨细胞凋亡为本痿范畴,炎症反应是标痹体现,可为骨关节炎本痿标痹的进一步认识提供参考和可行性的研究思路。