石斛合剂基于PKB/FoxO1通路抑制糖尿病大鼠肝糖异生的机制研究

目的观察复方石斛合剂对糖尿病大鼠肝PKB/FoxO1信号通路分子蛋白表达的影响,探讨其抑制肝糖异生的分子机制。方法随机选取11只雌性Wistar大鼠为正常组,其余36只大鼠高脂高糖饲料喂养,6周后腹腔注射STZ 2次。按糖尿病诊断标准,筛选出糖尿病成模大鼠33只,再随机分为模型组、二甲双胍组、石斛合剂组,每组11只。给药12周后,检测空腹血糖(FBG)、血清空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA);免疫组化检测各组的肝脏的胰岛素受体(InsR)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)表达情况。Western blot检测各组大鼠肝组织PKB、p-PKB、FoxO1、p-FoxO1的蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组FBG、FINS、FFA明显升高(P<0.01);与模型组比较,石斛合剂组FBG、INS、FFA显著下降(P<0.05或P<0.01);石斛合剂组与二甲双胍组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示石斛合剂能促进InsR表达,抑制PEPCK和FoxO1的表达(P<0.05)。Western blot结果显示石斛合剂组p-PKB/PKB、p-FoxO1蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);FoxO1表达减少(P<0.01)。结论石斛合剂能抑制肝糖异生,调节糖脂代谢,增强胰岛素敏感性,可能与其调节PKB/FoxO1通路相关蛋白的表达有关。

石斛合剂对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠糖脂代谢及PINK1/Parkin信号通路的影响

目的探讨石斛合剂对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠糖脂代谢及线粒体自噬通路PINK1/Parkin的影响。方法36只SD雄性大鼠,随机分为正常组6只,造模组30只。造模组进行高脂高糖饲料喂养8周后,腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠模型,筛选出成模大鼠29只,随机分为模型组、石斛合剂组各10只,二甲双胍组9只。石斛合剂组予石斛合剂16.7 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃给药,二甲双胍组予二甲双胍100 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃给药,正常组、模型组则按10 ml·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水灌胃,共干预4周。检测(第0、7、14、21、28天)各组大鼠的空腹血糖(FBG),血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高、低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C、LDL-C)、肝功能指标谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平;苏木素-伊红染色观察大鼠肝脏组织形态结构变化;透射电子显微镜(TEM)观察超微结构;蛋白免疫印迹法检测PINK1/Parkin信号通路相关蛋白的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠FBG、TG、TC、LDL、AST、ALT水平显著升高,HDL明显降低(P<0.05,P<0.01);HE染色结果显示模型组肝组织结构破坏明显,细胞排列不整,可见明显脂肪空泡聚集;透射电镜显示线粒体多肿胀破裂,脂肪滴增多;肝组织PINK1、Parkin、Beclin1、LC3B-Ⅱ蛋白表达减少,P62蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,石斛合剂组与二甲双胍组大鼠FBG、TG、TC、LDL、AST、ALT水平明显降低,HDL含量升高(P<0.05,P<0.01);HE染色结果显示石斛合剂组与二甲双胍组大鼠肝组织结构均有不同程度的改善;透射电镜显示线粒体形态结构较完好,可见自噬小体、自噬溶酶体,脂肪滴明显减少;肝组织PINK1、Parkin、Beclin1、LC3B-Ⅱ蛋白表达增加,P62蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论石斛合剂能改善2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠的糖脂代谢和肝脏病理状态,其机制可能是通过影响PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬而发挥作用。

基于GCGR/PKA通路探讨石斛合剂抑制糖尿病大鼠糖异生的机制

目的观察复方石斛合剂对糖尿病大鼠肝GCGR/PKA信号通路分子基因和蛋白表达的影响,探讨其抑制肝糖异生的分子机制。方法SPF级Wistar大鼠50只,随机选取11只作为正常组,其余39只高脂高糖饲料喂养6周后腹腔注射2次STZ,间隔72 h,筛选出糖尿病成模大鼠36只,随机分为模型组、二甲双胍组和石斛合剂组。石斛合剂组给予石斛合剂(11.3 g·kg^(-1))灌胃,二甲双胍组以二甲双胍灌胃(100 mg·kg^(-1)),正常组和模型组以生理盐水灌胃,连续给药12周。检测各组大鼠空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG);ELISA方法检测血清胰高血糖素(Glucagon);RT-PCR法检测GCGR/PKA信号通路的肝糖异生相关基因表达。免疫组化法和Western Blot法检测上述信号通路肝糖异生相关蛋白表达。结果石斛合剂组FBG、Glucagon较模型组显著下降(P<0.01);免疫组化结果显示石斛合剂能显著抑制GCGR、G6Pase的表达(P<0.01);RT-PCR和Western blot结果显示石斛合剂组β-catenin、TCF7L2基因和蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01);GCGR、PKA基因和蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论石斛合剂能控制糖尿病模型大鼠的空腹血糖,抑制肝糖异生,可能与其通过调控GCGR/PKA信号通路相关信号分子的基因和蛋白表达有关。