双歧杆菌通过Zonulin影响坏死性小肠结肠炎新生大鼠模型肠道通透性

目的探讨双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)新生大鼠模型肠道通透性及血清Zonulin表达的影响,分析双歧杆菌保护NEC可能的机制。方法将60只新生1 d的SD大鼠按随机数字表法分为3组(n=20):对照组、坏死性小肠结肠炎新生大鼠组(NEC组)及双歧杆菌干预坏死性小肠结肠炎新生大鼠组(NEC+BIF组)。3组于第1、2、3天固定时间点测量体质量;第4天处死大鼠,HE染色观察回盲部肠组织病理学变化并行病理学评分,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITCDextran)示踪法检测肠黏膜通透性,ELISA检测血清Zonulin的水平,Western blot及免疫组化检测肠组织紧密连接蛋白的表达及分布,将3组大鼠血清Zonulin水平与肠道通透性及紧密连接蛋白表达量行相关性分析。结果与NEC组相比,双歧杆菌干预后大鼠肠上皮损伤明显改善;而与对照组相比,NEC组肠道通透性显著增高(P<0.05),血清Zonulin表达明显增加(P<0.05),肠上皮紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1的表达明显减少(P<0.05),且分布不连续;与NEC组相比,NEC+BIF组肠道通透性降低(P<0.05),血清Zonulin表达降低(P<0.05),肠上皮紧密连接蛋白的表达增加(P<0.05)。相关性分析显示,3组大鼠血清Zonulin水平与肠道通透性呈正相关(r=0.923,P<0.01),而血清Zonulin水平与肠组织紧密连接Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达量均呈负相关(r=-0.779,P<0.01;r=-0.920,P<0.01;r=-0.619,P<0.01)。结论双歧杆菌可明显改善NEC大鼠的肠道通透性,其机制可能与抑制Zonulin的表达有关。

Syndecan-1介导双歧杆菌对新生大鼠坏死性小肠结肠炎保护作用的研究

目的探索Syndecan-1蛋白在新生大鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)模型肠组织中的表达情况,明确双歧杆菌对Syndecan-1蛋白的修复作用。方法建立新生大鼠NEC模型。按随机数字表法将新生大鼠分为3组(n=10):健康对照组、NEC组和双歧杆菌组。HE染色观察回盲部肠组织病理学变化。qRT-PCR技术检测各组TNF-α、IL-1β、MMP-7和Syndecan-1 mRNA的表达水平。Western blot检测分析各组Syndecan-1蛋白的表达水平。免疫组化分析各组Syndecan-1蛋白的定位表达。结果 NEC组TNF-α、IL-1β和MMP-7 mRNA表达水平高于健康对照组,而双歧杆菌可以抑制TNF-α、IL-1β和MMP-7的表达。NEC组Syndecan-1 mRNA的表达水平略高于健康对照组,双歧杆菌组略低于NEC组,但差异均无统计学意义。Western blot结果显示,健康对照组Syndecan-1蛋白呈高水平表达,NEC组几乎未检测到Syndecan-1蛋白的表达,而双歧杆菌组可见Syndecan-1蛋白的表达。免疫组化结果显示,对照组绒毛上皮细胞膜呈深棕色,而NEC组绒毛上皮细胞膜棕色染色明显减弱,双歧杆菌组上皮细胞膜着浅棕色。结论 NEC炎症时,Syndecan-1蛋白被切割,双歧杆菌可保护Syndecan-1蛋白的表达。双歧杆菌对肠黏膜的保护作用可能是通过抑制MMP-7等因子的表达,从而保护了Syndecan-1蛋白。

儿童糖尿病酮症酸中毒合并高脂血症性急性胰腺炎1例并文献复习

儿童糖尿病分为1型糖尿病、2型糖尿病和其他类型糖尿病,其中1型糖尿病占95%以上,近年来的流行病学调查显示,1型糖尿病的发病率还处于上升趋势[1],同时,糖尿病患儿首次发病的症状常常不典型,20%~30%的儿童是以糖尿病酮症酸中毒(DKA)为首发症状[2]。DKA是常见的糖尿病危象之一,是由于胰岛素不足或作用明显减弱和升糖激素不适当升高引起的糖、脂肪和蛋白代谢严重紊乱的综合征[3],而DKA会出现脂肪动员增多,引起高脂血症,继而可能诱发急性胰腺炎(AP),AP是指多种病因引起的胰酶激活后导致胰腺组织的自身消化、水肿、出血,甚至坏死,继以胰腺局部炎症反应为主要特征,伴或不伴有其他器官功能改变的疾病[4-5],临床上以急性上腹痛或血、尿淀粉酶,以及血脂肪酶升高为特点。

LINC00839调节miR-142-5p/HMGB1轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的探讨LINC00839对miR-142-5p/高迁移率族蛋白1(HMGB1)轴的调节作用,及其对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为Control组、LPS组(10 mg/L的LPS处理)、si-NC组(转染si-NC后用10 mg/L的LPS处理)、si-LINC00839组(转染si-LINC00839后用10 mg/L的LPS处理)、si-LINC00839+inhibitor NC组(转染si-LINC00839和inhibitor NC后用10 mg/L的LPS处理)、si-LINC00839+miR-142-5p inhibitor组(转染si-LINC00839和miR-142-5p inhibitor后用10 mg/L的LPS处理)、si-LINC00839+oe-NC组(转染si-LINC00839和oe-NC后用10 mg/L的LPS处理)、si-LINC00839+oe-HMGB1组(转染si-LINC00839和oe-HMGB1后用10 mg/L的LPS处理)。检测细胞LINC00839、miR-142-5p和HMGB1基因表达、细胞增殖、乳酸脱氢酶(LDH)活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-18(IL-18)和白介素-1β(IL-1β)水平、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;碘化丙啶(PI)染色法检测细胞膜孔的形成;Western blot检测细胞中HMGB1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、Caspase-1、GSDMD-N、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。结果与Control组相比,LPS组和si-NC组A549细胞LINC00839和HMGB1 mRNA表达、LDH活性、TNF-α、IL-18、IL-1β水平、MDA含量、PI染色阳性率、HMGB1、NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达水平升高,miR-142-5p表达、A_(450)(24、48 h)值、SOD和CAT活性、PCNA蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与si-NC组相比,si-LINC00839组A549细胞LINC00839和HMGB1 mRNA表达、LDH活性、TNF-α、IL-18、IL-1β水平、MDA含量、PI染色阳性率、HMGB1、NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达水平降低,miR-142-5p表达、A_(450)(24、48 h)值、SOD和CAT活性、PCNA蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(t=18.003、30.209、14.283、9.526、9.242、8.625、8.856、10.386、12.645、10.590、10.943、10.614、11.182、8.492、8.405、7.934、7.436、11.103,P均<0.05)。沉默miR-142-5p表达或上调HMGB1表达均可降低下调LINC00839表达对LPS诱导A549细胞焦亡的改善作用(P<0.05)。结论下调LINC00839可调控miR-142-5p/HMGB1轴减轻LPS诱导的A549细胞焦亡。

let-7a通过抑制Fas/FasL抑制缺氧缺血性新生大鼠脑组织的细胞凋亡

该文旨在探究let-7a是否通过抑制Fas/FasL减轻缺氧缺血性新生大鼠脑组织的细胞凋亡。通过结扎颈动脉建立新生大鼠缺氧缺血性模型。将60只SPF级SD新生大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、let-7a激动剂(agomir)组、阴性对照(NC)agomir组、let-7a agomir+Fas激活剂组,每组12只。造模后进行药物注射,Sham组和Model组注射等量生理盐水。给药结束后,使用神经功能缺损程度评分法(NDS)评价各组大鼠神经功能。HE染色观察各组大鼠脑组织的病理学变化。RT-qPCR法测定各组大鼠脑组织中let-7a、Fas和FasL mRNA表达水平;Western blot检测各组大鼠脑组织中Fas/FasL信号通路及凋亡相关蛋白表达水平;TUNEL染色检测各组大鼠脑组织中细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测let-7a与Fas、FasL的靶向关系。与Sham组相比,Model组大鼠NSD评分,细胞凋亡率,脑组织中Fas、FasL mRNA表达水平,Fas、FasL、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),脑组织病理损伤严重。与Model组相比,NC agomir组大鼠各项指标均无显著性差异(P>0.05);let-7a agomir组大鼠NSD评分,脑组织的细胞凋亡及Fas、FasL表达水平显著减少(P<0.05),病理损伤有所减轻。Fas激活剂减弱了过表达let-7a对缺氧缺血性新生大鼠脑组织细胞凋亡的抑制作用(P<0.05)。let-7a与Fas、FasL均存在靶向关系。let-7a可能通过抑制Fas/FasL减轻缺氧缺血性新生大鼠脑组织的细胞凋亡。