透明细胞肾细胞癌外泌体miR-133a表达及临床意义

目的 探讨外泌体微小RNA(miR)-133a在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)中的表达及临床意义。方法 收集2015年9月至2019年1月在我院行根治性肾切除术的293例ccRCC患者的血清样本,另外收集200例健康体检者的血清样本作为对照组。提取血清及组织外泌体总RNA,采用TaqMan低密度芯片(TLDA)鉴定差异表达的miRNA,并通过实时荧光定量PCR(qPCR)进行验证。随访患者的总生存期(OS)和无病生存期(DFS)。结果 与健康对照组血清和癌旁正常组织比较,TLDA筛选得到3个在ccRCC患者血清外泌体和肿瘤组织中差异表达的miRNAs(miR-133a、miR-210、miR-7-1)。qPCR证实外泌体miR-133a表达在ccRCC患者中显著下调(P<0.001)。ccRCC患者外泌体miR-133a表达与肿瘤组织表达呈正相关(r=0.467,P<0.001)。受试者工作特征(ROC)曲线证实血清外泌体miR-133a诊断ccRCC曲线下面积(AUC)为0.78(95%CI:0.747~0.729)。术前血清外泌体miR-133a表达与TNM分期、Fuhrman分级有关(P<0.05),与肾功能指标无关(P>0.05)。术前血清外泌体miR-133a高表达患者的DFS和OS均长于低表达者(P<0.001)。Cox风险比例回归分析显示血清外泌体miR-133a是影响ccRCC患者OS的独立预后因素[HR=0.486(95CI:0.226~1.043);P=0.034]。结论 血清外泌体miR-133a与ccRCC的发生、发展及预后密切相关,可能是预测ccRCC患者预后的生物标志物。

黄芩苷调节galectin-3/Akt/GSK-3β/Snail信号通路改善慢性肾脏病大鼠的肾纤维化机制

目的 探讨黄芩苷调节半乳糖凝集素3(galectin-3)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶(GSK-3β)/Snail信号通路对慢性肾脏病大鼠肾纤维化的影响。方法 采用腺嘌呤诱导制备慢性肾脏病大鼠肾纤维化模型,随机将健康雄性SD大鼠分为对照组、模型组、阳性药物(氯沙坦,9 mg/kg)组、低剂量黄芩苷组(20 mg/kg)、中剂量黄芩苷组(40 mg/kg)、高剂量黄芩苷组(80 mg/kg),模型组和对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。30 d后,检测6组大鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平;Masson染色检测肾脏组织胶原分布面积;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化学法检测肾脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原A1(CoLIA1)表达;蛋白印迹(Western blot)法分析肾脏组织中galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肾脏损伤严重并伴有黑色腺嘌呤代谢物结晶沉积,胶原纤维增多,肾脏组织胶原分布面积、α-SMA、CoLIA1、Scr、BUN、galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail水平升高(P<0.05);与模型组比较,阳性药物组、黄芩苷低、中和高剂量组大鼠肾间质、肾小球和肾小管病变明显减轻,腺嘌呤代谢物结晶和纤维化组织减少,肾脏组织胶原分布面积、α-SMA、CoLIA1、Scr、BUN、galectin-3、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、Snail水平降低(P<0.05)。结论 黄芩苷可能通过抑制galectin-3/Akt/GSK3β/Snail信号通路,进而改善慢性肾脏病大鼠肾纤维化。

金合欢素对糖尿病肾病大鼠肾损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨金合欢素对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量(40、80 mg·kg^(-1))组,金合欢素(80 mg·kg^(-1))+脂多糖(LPS,0.1 mg·kg^(-1))组,缬沙坦(20 mg·kg^(-1))组,每组10只,并以正常喂养且不ip STZ的10只大鼠作为对照组。干预结束后,尾静脉取血,检测大鼠空腹血糖含量;收集大鼠24 h尿液,分析尿蛋白含量;腹部主动脉取血,ELISA法检测血清中血肌酐、血尿素氮水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;分离双肾组织,透射电镜及HE染色检测肾组织损伤情况;Western blotting检测Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组肾组织严重受损,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加(P<0.05);与模型组比较,缬沙坦和金合欢素低、高剂量组肾组织损伤得到缓解,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05);与金合欢素高剂量组相比,金合欢素+LPS组肾组织损伤加剧,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论金合欢素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路改善DN大鼠肾损伤。