罗格列酮对大鼠系膜增生性肾炎的治疗作用

目的研究罗格列酮对大鼠系膜增生性肾炎(MsPGN)的治疗作用并探讨其可能的作用机制,寻找治疗系膜增生性肾炎的新途径。方法大鼠随机分为3组:空白对照组(A组)、模型对照组(B组)、罗格列酮治疗组(C组)。B、C组以四氯化碳及牛血清白蛋白灌胃制备系膜增生性肾炎模型,制模成功后,A、B组予生理盐水,治疗组予罗格列酮分别灌胃均8周,每周测各组大鼠24 h尿蛋白排泄量及尿红细胞计数。实验结束时,测血清白蛋白、血糖、肝肾功能、肾脏系膜细胞及系膜基质增生情况(光镜、PAS染色)及各组大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果治疗组大鼠24 h尿蛋白排泄量、尿红细胞计数、TGF-β1及α-SMA表达水平、肾小球PAS染色灰度值较模型组均明显减少,血清白蛋白明显升高,差异均有统计学意义。3组之间血糖及肝肾功能比较差异无统计学意义。结论罗格列酮对大鼠系膜增生性肾炎具有治疗作用,其作用机制之一可能是通过抑制TGF-β1及其下游因子表达。

慢性肾炎患儿治疗前后血清IL-18、IL-10、TNF-α和血浆VEGF水平的变化

目的:探讨了慢性肾炎患儿治疗前后血清白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血浆血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化及意义。方法:分别采用放射免疫分析和ELISA检测了30例慢性肾炎患儿血清IL-18、IL-10、TNF-α和血浆VEGF含量,并与35例正常健康儿作比较。结果:慢性肾炎患儿在治疗前血清IL-18、IL-10、TNF-α和血浆VEGF含量均显著高于正常儿组(P<0.01),经中西医结合治疗3个月后与正常儿比较,仍有显著差异(P<0.05)。结论:检测慢性肾炎患儿血清IL-18、IL-10、TNF-α和血浆VEGF水平的变化对观察病情和预后判定具有重要的临床价值。

血清Cystain C、尿NGAL及尿损份分子1联合检测对儿童过敏性紫癜早期肾损伤的诊断效能

目的观察血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿肾损伤分子-1(KIM-1)联合检测对儿童过敏性紫癜(HSP)早期肾损伤(HSPN)的诊断效能。方法选择36例HSPN患儿为HSPN组,36例无肾炎的HSP患儿为HSP组,22例健康儿童为对照组。采用胶乳增强免疫比浊法检测各组患儿血清Cystatin C,采用ELISA法检测各组患儿尿NGAL、KIM-1,采用化学发光法检测各组患儿尿肌酐(u Cr)。比较各组血清Cystatin C、尿NGAL/u Cr、KIM-1/u Cr。绘制血清Cystatin C、尿NGAL/u Cr、KIM-1/u Cr及三者联合检测诊断HSPN的受试者工作曲线(ROC曲线),计算曲线下面积、截断值及灵敏度、特异度。结果HSPN、HSP组患儿血清Cystatin C均高于对照组(P均<0.05),但是HSPN组患儿血清Cystatin C与HSP组相比P>0.05。HSPN组患儿尿NGAL/u Cr、KIM-1/u Cr均高于HSP组和对照组(P均<0.05),但是HSP组患儿尿NGAL/u Cr、KIM-1/u Cr与对照组相比P均>0.05。血清Cystatin C、尿NGAL/u Cr、尿KIM-1/u Cr诊断HSPN的ROC曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.679(95%CI:0.543~0.815,P=0.023)、0.716(95%CI:0.586~0.846,P=0.006)和0.681(95%CI:0.539~0.822,P=0.022)。选取的截断点分别为0.575 mg/L、2.695×10-2ng/mg和0.615×10-2ng/mg,相应的敏感度分别为58.3%、61.1%和66.7%,特异度分别为68.2%、77.3%和72.7%。三者联合检测诊断HSPN的AUC为0.814,敏感性、特异性分别为88.9%、63.6%。结论血清Cystatin C、尿NGAL、尿KIM-1联合检测诊断HSPN的效能优于单独检测。

生长激素激发试验诊断矮小儿童的临床价值

目的 探讨生长激素（GH）激发试验在矮小儿童诊断中的临床价值.方法 将72例疑诊生长激素缺乏症（GHD）患儿随机分为两组,两组均行左旋多巴试验,其中观察A组加行精氨酸试验,观察B组加行胰岛素诱发低血糖试验.结果 两组激发试验后垂体有应答43例,观察A组GH峰值出现在左旋多巴试验后30～90 min者占85.71%,精氨酸试验后占95.23%;观察B组GH峰值出现在左旋多巴试验后30～90 min者占81.81%,胰岛素诱发低血糖试验后30～60 min者占95.45%.两组比较无统计学差异（P＜0.05）.观察A组GH激发试验阳性34.10%,观察B组58.00%,两组比较有统计学差异（P＜0.05）.结论 三种激发试验后GH峰值出现时间以胰岛素诱发低血糖试验出现较早,且左旋多巴＋胰岛素诱发低血糖试验的阳性率高,其诊断GHD较敏感.

白细胞介素-6、红细胞沉降率和D-二聚体检测在肺炎支原体肺炎患儿中的临床意义

目的 探讨白细胞介素-6(IL-6)、红细胞沉降率(ESR)和D-二聚体检测在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿中的临床意义。方法 选取2017年6月至2018年6月在连云港市第一人民医院接受治疗的89例MPP患儿作为观察组,同期在该院体检的健康儿童50例为对照组。根据入院时临床肺部感染评分(CPIS)将观察组分为轻症组( n =62,CPIS评分≤6分)和重症组( n =27,CPIS评分>6分)。根据预后情况不同分为预后良好组( n =78)和预后不良组( n =11)。比较轻症组、重症组和对照组IL-6、ESR和D-二聚体水平及CPIS评分,分析IL-6、ESR和D-二聚体与CPIS评分的相关性;比较预后良好组及预后不良组的IL-6、ESR和D-二聚体水平;采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析IL-6、ESR和D-二聚体预测患儿预后的价值。结果 与对照组相比,观察组IL-6、ESR、D-二聚体水平及CPIS评分上升( P <0.05)。重症组IL-6、ESR、D-二聚体水平及CPIS评分均高于轻症组( P <0.05)。Pearson分析表明, IL-6、ESR、D-二聚体水平与CPIS评分均呈正相关( r 分别为 0.714 、0.732、0.623, P <0.05)。预后良好组IL-6、ESR、D-二聚体水平均低于预后不良组,差异有统计学意义( P < 0.05 )。IL-6评估预后的曲线下面积(AUC)和95% CI 分别为0.684和1.014~3.973,ESR和D-二聚体评估预后的AUC分别是0.757和0.713。以IL-6、ESR及D-二聚体的截断点分别为22.3 ng/L、36.7 mm/h及 1 457.8 ng/mL时,IL-6+ESR+D-二聚体检测在 MPP患儿中具有较好的预后评估价值。结论 MPP患儿血清IL-6、ESR和D-二聚体水平显著上升,与患儿病情严重程度和预后有关,对病情判断和预后评估具有一定参考价值。

常见吸入、食物性过敏原与儿童过敏性紫癜体液免疫的相关研究

目的:评价常见吸入性、食物性过敏原对过敏性紫癜(HSP)患儿免疫球蛋白种类、水平及肾脏损害的影响。方法:选取2010-01～2011-12在我科住院治疗的116例HSP患儿,ELISA法检测血清7种常见吸入性过敏原特异性IgE和7种常见食物性过敏原特异性IgG,免疫比浊法检测血清IgA、IgG、IgM、IgE、C3、C4水平,观察患儿肾脏损害情况。结果:吸入性过敏原阳性率为36.20%,食物性过敏原阳性率为73.27%;吸入性过敏原阳性组血清IgA、IgE水平较吸入性过敏原阴性组高(P<0.05);食物性过敏原阳性组血清IgG、IgM水平较食物性过敏原阴性组高(P<0.05);食物性过敏原阳性组肾脏损害发生率较阴性组低(P<0.05)。结论:吸入性过敏原IgE介导的I型超敏反应参与HSP的发病,其诱发更加明显的HSP患儿血清IgA增加;食物性过敏原介导的III型超敏反应参与HSP发病,食物性过敏原阳性HSP患儿肾脏损害发生率较阴性组低。

人 Orail基因真核表达载体的构建及在足细胞中的表达

目的构建重组人 Orail基因真核表达载体，观察其在小鼠肾小球足细胞株（MPC5）中的表达。方法根据GenBank数据库检索到的人 Orail基因序列，人工合成法合成Orail基因编码区（coding sequence，CDS）全长序列，克隆至质粒表达载体PG-CMV-IRES-EGFP，构建重组质粒载体PC-CMV-Orail，通过PCR、双酶切及基因测序等方法进行鉴定；以脂质体转染法将重组质粒转染至MPC5细胞，应用荧光显微镜观察绿色荧光检测转染效率，RT-PCR、Western blot法分别检测Orail基因的转录与翻译。结果PCR扩增的片段长度为906bp，双酶切出现两条带，其中约906bp处可见目的条带。核酸测序结果与GenBank中所报道的人 Orail基因的CDS序列完全一致。转染后48h置荧光显微镜下观察，85％以上的足细胞中可见绿色荧光。RT-PCR及Western blot实验结果分别显示转染后的MPC5细胞在mRNA与蛋白水平表达Orail均有所增强。结论成功构建了重组人 Orail基因真核表达载体PG-CMV-Orail，并建立了过表达Orail基因的肾小球足细胞模型，为深入研究钙库操纵的Ca2’通道与足细胞病之间的关系奠定了良好的实验基础。

呼吸道前驱感染对IgA血管炎患儿血清IL-23、MIP-3α水平的影响及意义

目的 探讨呼吸道前驱感染对IgA血管炎（IgAV）患儿血清白细胞介素-23（IL-23）和巨噬细胞炎性蛋白-3α（MIP-3α）水平的影响及意义.方法 收集急性期IgAV患儿共47例,根据有无呼吸道前驱感染,将其分为无呼吸道感染的IgAV组（IgAV1组）、有呼吸道感染的IgAV组（IgAV2组）,并收集同期呼吸道感染组23例、正常对照组20例,所有受试者共90例.第一步运用抗体芯片半定量检测各组中的部分受试者（总例数=16）血清细胞因子水平,采用倍数分析方法筛选出可能有意义的生物因子,再进一步用酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测各组中其余受试者（总例数=74）血清该细胞因子的水平.结果 ①运用抗体芯片半定量检测和分析,初步筛选出IL-23和MIP-3α可能为有意义的细胞因子.②运用ELISA定量检测血清IL-23、MIP-3α水平发现：IgAV患儿血清IL-23的水平〔（48.56±34.27）ng/L〕与正常对照组〔（5.85±3.69）ng/L〕相比明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01）.IgAV1组、IgAV2组、呼吸道感染组血清IL-23水平均明显高于正常对照组,IgAV2组血清IL-23水平高于其余各组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.IgAV1组、IgAV2组的血清MIP-3α水平与正常对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 MIP-3α与IgAV的发病无明显相关.异常升高的IL-23水平可能参与IgAV的免疫发病机制.呼吸道感染可能通过促使IgAV患儿血清IL-23水平升高,进而引起免疫紊乱,诱发IgAV.

肾小管间质纤维化发病机制的研究进展

肾小管间质纤维化(TIF)是各种原因引起的慢性肾脏疾病进行性进展的共同途径,也是这些患者预后的决定性因素。其主要病理特征是炎性细胞浸润、肾间质成纤维细胞大量增殖、细胞外基质在肾间质的过度沉积及肾单位的进行性丢失,TIF的本质是慢性进行性炎症过程。研究表明,肾小管上皮/内皮间充质细胞的转分化、物理因素以及多种化学因子的共同作用,在诱导、促进TIF过程中发挥重要作用。现就近年来关于TIF的发生、发展及主要的影响因素方面的进展作一概述。

三甲基化组蛋白H3赖氨酸4对调节性T淋巴细胞foxp3基因表达的影响

目的探讨天然调节性T淋巴细胞(nTreg)的三甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3K4me3)对foxp3基因的影响,寻找维持调节性T淋巴细胞(Treg)表型长期稳定的方法。方法使用免疫磁珠细胞(MACS)分选法从健康人外周血中分离出CD4+CD25+Treg。对CD4+CD25+Treg分别进行0 d、3 d、7 d培养,其中0 d为阴性对照组,3 d为阳性组1,7 d为阳性组2,采用流式细胞仪(FCM)对0 d、3 d、7 d nTreg膜表面标志CD25的变化进行检测,并分别对培养0 d、3 d、7 d的nTreg细胞通过染色质免疫共沉淀(ChIP-PCR)法检测foxp3基因启动子区H3K4me3及DNA水平变化。结果 1.使用细胞计数Kit-8(CCK-8)法确定植物血凝素(PHA)质量浓度在10 mg.L-1时为最佳的药物质量浓度,对Treg细胞的增殖作用最为显著。nTreg细胞培养0 d、3 d、7 d的表型变化呈递减趋势。随着培养时间(0 d、3 d、7 d)的延长,与foxp3基因启动子区结合的H3K4me3表达逐渐减少。2.采用ChIP-PCR法对培养0 d、3 d、7 d的nTreg细胞检测与H3K4me3结合的foxp3基因启动子区DNA水平变化。DNA凝胶电泳图显示,0 d、3 d在204 bp处可见条带(灰度值分别为2.31、0.91),7 d有模糊条带或无条带。三者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PHA不能维持Treg细胞的表型稳定,其机制与H3K4me3减少有关。