自动QuEChERS结合UPLC-MS/MS测定莲雾中苯并咪唑类农药残留

为了建立自动QuEChERS结合高效液相色谱-串联质谱法测定莲雾中多菌灵、噻菌灵、苯菌灵及甲基硫菌灵4种苯并咪唑类农药残留量的检测方法。将莲雾样品采用混合试剂(5.5 g硫酸镁+1.5 g氯化钠+1.0 g柠檬酸钠+0.5 g柠檬酸二钠)进行净化,经QuEChERS自动样品制备系统进行制备后,应用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法进行分析。结果表明,4种农药在1.00~10.00 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,决定系数(R2)均大于0.99;0.1、1.0、5.0 mg/kg 3个添加水平下,在莲雾基质中添加回收率为84%~105%,相对标准偏差为0.8%~9.5%(n=3),方法检出限和定量限分别为0.1~0.5μg/kg和0.5~10.0μg/kg。综上,该方法简便省时,净化效果好,灵敏度及准确度高,可用于同时测定莲雾中多菌灵、噻菌灵、苯菌灵及甲基硫菌灵4种苯并咪唑类农药的残留量。

拟穴青蟹PDI保守区域的克隆与序列分析

蛋白二硫键异构酶（PDI）是真核生物重要的多功能蛋白，其基因结构在虾蟹类尚未报道．从拟穴青蟹Scyllapa。ramamosain（Estampador，1949）脑组织中分离纯化总RNA，经逆转录得到cDNA第一条链，并以之为模板利用RACE（rapid—amplificationofcDNAends）技术，扩增出一条950bp的cDNA．将所得cDNA克隆到质粒载体pTZS7R／T，转化大肠杆菌DH5a细胞并对筛选的阳性克隆测序．通过与目前数据库中序列的比较，在此cDNA编码蛋白中发现其中i01个氨基酸与其他物种已知蛋白二硫键异构酶（PDI）中的PDI_a_PDI_a＇_C保守区域相似率在64％～79％之间．确定此cDNA编码拟穴青蟹PDI_a_PDI_a＇_C保守区域．

眩晕飞针——跨越五千年的计算(续)

公元前1600年左右，古埃及《莱因德纸草书》将圆周率约记为3．16（资料：维基百科“Rhind Mathematical Papyrus”词条）。古埃及大金字塔底边周长与塔高的比例的一半，恰好是3．14（资料：谷歌图书“The shape of The Great Pyramid”）。

拟穴青蟹HSP70基因的克隆与组织表达

热休克蛋白70(HSP70)是一种重要的功能蛋白.利用RACE和基因克隆等分子生物学技术,获得拟穴青蟹(Scylla paramamosain)HSP70全长cDNA序列,全长共2 189 bp,包括110 bp的5′UTR(untranslated regions)、126 bp的3′UTR和一个1 953 bp的开放阅读框(ORF).ORF可编码650个氨基酸残基,总分子质量约为71.2 ku,pI为5.38.同源蛋白的比较结果显示,拟穴青蟹HSP70序列与其他一些物种具有很高相似性,推测HSP70基因具有很高的遗传保守性,而基于HSP70氨基酸序列比对而绘制的系统树基本能够反映出各物种间的进化关系.以RT-PCR法检测雌性拟穴青蟹一些组织中的HSP70表达,结果显示各待测组织中均能扩增得到HSP70,说明HSP70在拟穴青蟹为组成型表达.其中,HSP70在卵巢中表达量最高,其次为脑神经节,推测这与HSP70作为分子伴侣的功能相关.

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)蛋白二硫键异构酶基因的分子克隆与表达分析

蛋白二硫键异构酶(PDI)是内质网中的关键酶,参与蛋白合成过程中二硫键的形成、还原和异构。本文首次从拟穴青蟹(Scylla paramamosain)克隆获得了PDI基因cDNA全长,该序列长度为2015bp,开放阅读框为1452bp,编码483个氨基酸。荧光定量PCR检测发现PDI存在于拟穴青蟹的多个组织中;在拟穴青蟹卵巢发育过程中,PDI基因的表达量在前4个时期逐渐上升,到了第5期(成熟期)表达量则下降,表明PDI参与了卵巢发育的蛋白合成过程。免疫组化表明,拟穴青蟹卵母细胞存在PDI阳性反应,进一步为该分子参与卵巢发育提供了形态学证据。

拟穴青蟹GnRH-R的免疫识别

促性腺激素释放激素（GnRH）及其受体（GnRH-R）对生殖具有重要的调控作用．迄今无脊椎动物GnRH及GnRH-R的研究尚少．本研究采用兔抗人GnRH-R、兔抗果蝇GnRH-R和兔抗海鞘GnRH-R的抗体，应用免疫印迹和免疫共沉淀技术对拟穴青蟹（Scylla paramamosain）GnRH-R进行了免疫识别，所得结果如下：1）经免疫印迹检测，拟穴青蟹脑、胸神经团、视神经节和精巢中共有的免疫阳性条带分子质量为45-55ku．脑和胸神经团中另有一条36ku条带；在精巢中，兔抗人GnRH-R和兔抗果蝇GnRH-R抗体只有一条28ku条带，而兔抗海鞘GnRH-R抗体显示有28，36和30ku的条带．2）利用免疫共沉淀技术，分离出与GnRH-R抗体相结合的两种物质，分子质量分别为38．1和54．0ku，分别与哺乳动物和非哺乳动物GnRH-R的分子质量接近．该发现提示拟穴青蟹体内存在GnRH-R，为深入了解甲壳动物生殖调控机理提供了理论依据．