绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞培养及鉴定

目的体外分离、培养和鉴定增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法取EGFP转基因大鼠胫、股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养、纯化BMSCs;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪分析细胞表型;CCK-8法绘制细胞生长曲线并与野生型BMSCs增殖情况相比较;分别向成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定;将细胞经鼠尾静脉移植入大鼠体内,观察其在体内定植情况。结果获得稳定表达EGFP的BMSCs,以长梭形为主,融合后呈漩涡状排列;生长曲线示EGFP-BMSCs增殖能力旺盛,与野生型BMSCs相比差异无统计学意义(t=-0.023,P=0.982);细胞CD29、CD90、CD34、CD49d、CD45表达率分别为99.4%、96.4%、0.171%、0.049%、0.038%;成脂、成骨、成软骨诱导后,分别给予油红O、茜素红、甲苯胺蓝染色,结果均呈阳性;在肺组织内可检测到稳定的绿色荧光。结论成功获得高纯度、稳定表达EGFP的BMSCs,干细胞特性不受EGFP影响。细胞定植后,示踪效果良好,可用于后续实验研究。

问题串教学模式浅探

授之于鱼,不如授之予渔。教会学生学习是现代教学理论中强调的核心部分。近几年来,笔者一直尝试在教学中用问题串的方式引导学生,使学生跟随问题串一步步获得知识,变教会学生知识为教会学生学习。在经过多年的尝试后,初步形成和确立了"概念学习——规律探究学习——习题处理"为基本程序的问题串教学模式。一、问题串在概念学习中的应用物理教学过程中,概念的教学一直是一个难点,因为其内容比较抽象,教师直白地讲解。

DTD & CSS编辑器的设计与实现

首先对DTD和CSS的语法规则进行了简单介绍，然后给出了一个对DTD和CSS进行语法分析和编辑的设计思路，最后给出了编辑器的实现效果以及对下一步工作的展望。

大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养与鉴定

目的:建立简单、经济、高效、快捷的扩增骨髓间充质干细胞的方法。方法:利用全骨髓贴壁分离法分离、纯化大鼠的间充质干细胞,观察细胞的形态,绘制生长曲线,并采用流式细胞术检测细胞表面CD29、CD90、CD45、CD34的表达情况。采用茜素红染色法检测间充质干细胞诱导分化为成骨细胞的情况;采用油红O染色法检测间充质干细胞诱导分化为成脂肪细胞的情况。结果:间充质干细胞培养到第3代时形成漩涡状、纺锤形的形态相对均一的贴壁细胞。流式细胞术检测结果显示其表面抗原CD29、CD90阳性,CD45、CD34阴性。间充质干细胞经不同诱导剂诱导后,茜素红染色呈红色,油红O染色呈暗红色。结论:全骨髓贴壁分离法可以有效获得数量充足、生长状态良好并具有分化潜能的间充质干细胞。

腹腔镜下Nissen和Toupet手术治疗小儿食管裂孔疝的近期疗效

目的探讨腹腔镜手术治疗小儿食管裂孔疝的手术安全性和疗效。方法2012年7月至2015年8月在腹腔镜下手术66例食管裂孔疝患儿，男41例，女25例；手术年龄1～39个月，平均（26±10）个月；体重3．2～16kg，平均（9．5±6．1）kg。所有病例术前均经消化道造影明确诊断；Ⅰ型疝（滑疝）25例，Ⅱ型疝（旁疝）37例，Ⅲ型疝（混合疝）2例，复发疝1例；手术采用腹腔镜3孔或4孔法，3-0prolene线缝合修补食管裂孔，固定食管于膈肌处，保留腹段食管3～4cm，胃底折叠270。（Toupet）32例或360。（Nissen）34例。结果所有病例均在腹腔镜下顺利完成手术，手术时间40～230min，平均（70±25）min；术中出血2～10mL，术后24~72h进食，术后住院7～15d，平均（11±2．6）d。术后随访1～37个月，出院1个月均行食管钡餐复查，未见明显疝孔形成，无呕吐症状，体重增加明显。结论采用腹腔镜手术治疗儿童食管裂孔疝疗效好，恢复快，微创美观，安全可靠。随着手术经验的增加，开孔的数目由4孔减少为3孔，手术时间也与常规的开腹时间无明显差别。

胸腔镜小儿肺叶切除术50例

目的探讨胸腔镜下小儿肺叶切除手术的可行性和安全性。方法回顾分析2015年4月到2016年8月，连续50例计划实行胸腔镜下肺叶切除术患儿资料，排除叶外型隔离肺、肺大疱和肺活检病例。男35例，女15例；年龄2个月～13岁，平均（5．94±3．94）；体质量3．25—59．00b，平均（22．15±12．54）kg。其中12例产前胎儿超声确认肺部病变。反复肺炎史21例。有咯血史3例，均为叶内型隔离肺。结果46例顺利经胸腔镜下行手术。4例中转开胸，占8％（4／50），其中2例13岁和15岁左肺上叶切除患儿，术前反复肺炎，胸膜粘连；1例右肺下叶切除患儿，术中损伤右下肺动脉基底段，大出血；1例左肺下叶患儿，上下叶裂发育不良。胸腔镜手术时间40-300min，平均120min。无手术死亡，术后出血二次开胸1例，为中转开胸的病例。病变位于右肺上叶5例，右肺中叶1例，右肺下叶19例，左肺上叶7例，左肺下叶18例。术后病理提示支气管源性肺囊肿4例，细支气管肺炎伴肺气肿1例，叶内型隔离肺15例，肺囊性腺瘤样畸形30例（Ⅰ型17例，Ⅱ型13例）。术后留置胸腔引管2-3天，术后住院5～10天，平均7天。术后随访1～12个月，无复发及胸廓塌陷，剩余肺代偿良好。结论胸腔镜肺叶切除术创伤小，术后患儿恢复快。但小儿由于胸腔小，单肺困难，胸腔镜下操作需要较长的学习曲线。患儿术前的反复感染、胸膜粘连和叶裂发育不良会增加中转开胸率。

基于三维重建肺结节定位法在胸腔镜肺楔形切除术应用的回顾性队列研究

目的探讨基于三维重建肺结节定位法行胸腔镜肺楔形切除术的安全性及临床效果。方法回顾性分析2019年1月至2020年8月在我院行胸腔镜肺楔形切除术96例患者的临床资料,其中男30例、女66例,.平均年龄(57.62±12.13)岁。三维重建肺结节定位组45例,CT引导Hook-wire肺结节定位组51例。比较两组患者的围术期资料。结果两组手术均顺利完成。两组患者肺结节定位失败率(4.44%vs.5.88%,P=0.633).手术时间[15(12,19)min vs.15(13,17)min,P=0.956].术中出血量[16(10,20)mL vs.15(10,19)mL,P=0.348].胸腔引流管放置时间[2(2.2)d vs.2(2.2)d,P=0.841].切缘距离[2(2,2)cm vs.2(2.2)cm,P=0.272].TNM分期.(P=0.158)差异均无统计学意义。CT引导Hookwire肺结节定位组出现2例气胸,2例血胸,4例脱钩;三维重建肺结节定位组无穿刺定位相关并发症。结论基于三维重建定位肺结节准确。并发症发生率较低,具有很好的临床应用价值。