小鼠胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞的定向分化

目的：血管重建手术在多数情况下以自体血管作为替代品,但来源有限。胚胎干细胞具有发育全能性,目前其定向诱导机制尚不明确。通过选择适当的诱导剂,探讨胚胎干细胞体外向血管平滑肌细胞分化的趋势。方法：实验于2006-08/2007-02在南昌大学第二附属医院血液病研究所完成。①动物及细胞系：清洁级孕12.5d昆明小白鼠1只,由南昌大学医学院动物中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ编号为SCRC-1018,由American Type Culture Collection提供。②实验方法：取孕12.5d鼠胚胎,去除头部、内脏及四肢,将组织块剪碎,胰酶消化,分离培养胚胎成纤维细胞,传至3～5代时更换为含体积分数为0.15胎牛血清的DMEM高糖培养基,24h后收集培养液,加入2.0mmol/LL-谷氨酰胺,1×非必需氨基酸,0.1mmol/Lβ-巯基乙醇,1000U/mL白血病抑制因子,此即为条件培养基。常规复苏小鼠胚胎干细胞系129X/SvJ,以1×10^6密度接种,传代时用差速贴壁法分离去除已分化的胚胎干细胞,加入条件培养基5mL,经过悬滴-悬浮培养,构建拟胚体分化模型。设立3组,各组均置于明胶包被的T25培养瓶中,每瓶加入50个拟胚体,使其均匀分布于培养瓶底。诱导组7～10d加入10^-9mol/L全反式维甲酸和3μg/L转化生长因子β1,10～21d加入20μg/L血小板源性生长因子。血清对照组仅加入去生长因子胎牛血清,全反式维甲酸组仅加入全反式维甲酸。诱导21d的拟胚体,用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ联合消化为单个细胞,再加入20μg/L血小板源性生长因子继续诱导7d。③实验评估：应用RT-PCR法检测诱导细胞血管平滑肌肌动蛋白、血管平滑肌肌球蛋白重链基因的表达。通过免疫细胞化学技术检测血管平滑肌肌动蛋白的表达来鉴定细胞性质。结果：①胚胎干细胞生长及拟胚体诱导分化：胚胎干细胞在体外能自发形成拟胚体,经过不同生长因子的分阶段联合诱导,拟胚体贴壁后球体略摊开,周围出现大量的梭形细胞。②RT-PCR检测：拟胚体血管平滑肌肌动蛋白和血管平滑肌肌球蛋白重链基因均呈强阳性表达。③免疫细胞化学检测：荧光显微镜下,罗丹明染色细胞浆呈红色荧光,并可见肌丝结构;DAPI染色细胞核呈蓝色荧光。诱导组血管平滑肌肌动蛋白阳性率明显高于血清对照组、全反式维甲酸组（P〈0.05）。结论：胚胎干细胞经维甲酸、转化生长因子β1以及血小板源性生长因子分阶段联合诱导后,可分化为血管平滑肌细胞且纯度较高。随着细胞纯度和活性等问题的进一步解决,胚胎干细胞将有可能成为血管组织工程的种子细胞。

锯齿型微通道流动与传热特性数值模拟

设计了一种锯齿型微通道强化对流传热,利用COMSOL软件对该微通道的流动与传热特性进行了数值模拟,研究了正反流动方向上锯齿型结构对通道内流动和传热的影响,其中雷诺数为50~700。数值结果表明,锯齿型微通道极大地强化了流体在空间上的混合以及对热边界层产生了明显扰动,显著提升了微通道内的对流传热。相对常规矩形微通道,努塞尔数(Nu)提高了102.7%。另外,研究了不同流动方向下锯齿型微通道的流动与传热特性。在雷诺数Re=700时,反向流动的Nu相比正向流动增加了20%,但压降同时增加了110%。

体外定向诱导小鼠胚胎干细胞向内皮细胞分化的研究

目的探讨体外定向诱导胚胎干细胞（embryonic stemcell，ESC）向内皮细胞分化的条件，为组织工程血管提供种子细胞。方法取怀孕12．5d的昆明小白鼠1只，断颈处死，取其胚胎，培养制备小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblast，MEF）。常规复苏ESC后进行体外培养，采用悬滴-悬浮法制备拟胚体（embryoid body，EB）。将EB分两组：实验组加入含有3ng／ml转化生长因子β1、50ng／ml血管内皮细胞生长因子及1μmol／L激活素受体样激酶选择性抑制剂的EB培养基；对照组只加入EB培养基。倒置显微镜下观察细胞生长情况。采用RT—PCR及免疫组织化学染色检测诱导细胞vWF和CD34的表达，验证细胞性质。结果原代MEF生长迅速，第3天细胞融合达90％左右，细胞呈长梭形，有少量侧支，细胞核饱满，有2～3个核仁，细胞排列紧密。传至3～5代，细胞呈多角形，胞浆饱满，有3～4个核仁，细胞表面分泌较多细胞颗粒。ESC在饲养层上保持未分化状态，细胞团形态呈鸟巢样，边缘平整，单个细胞体积小，折光性强，核质比高，增长速度快。悬滴培养3d的EB肉眼可见，再经悬浮培养3d后，形成较大的透亮EB；EB贴壁后第2天，球体略摊开。实验组第4～7天，EB周围有许多圆形细胞产生，第10b14天，可见由大量圆形细胞组成的血管样结构自EB周围生长；对照组EB周围未见血管样结构生长。免疫组织化学染色见EB周围大量vWF染色阳性细胞，RT—PCR检测到vWF和CD34的表达。结论ESC在特定的条件下可以分化为内皮细胞，有可能为组织工程血管提供大量的种子细胞。

明代发簪在现代首饰设计中的应用:以草虫啄针为例

明代草虫啄针是明代发簪的重要类别,将明代草虫啄针的纹饰造型与文化内涵应用于现代首饰设计中,使现代首饰设计融入丰富的传统文化底蕴。以明代草虫啄针为研究对象,运用案例研究法、实践研究法,对明代草虫啄针元素进行再设计,使明代草虫啄针与现代首饰相结合。明代草虫啄针纹样造型丰富并蕴含吉祥寓意,将其元素提取、变形与整合,并结合现代首饰设计的审美文化与工艺,设计出既有现代感,又有文化内涵的首饰。

转化生长因子β_1联合血管内皮细胞生长因子体外诱导胚胎干细胞向血管内皮细胞分化

目的:观察胚胎干细胞在转化生长因子β1和血管内皮细胞生长因子体外诱导分化血管内皮细胞的能力,探讨提高诱导效率的方法。方法:实验于2004/2006在南昌大学医学院第二附属医院血液病研究所进行。实验材料:成年昆明小鼠由南昌大学医学院动物科学部提供(机构许可证号:96021),经自然交配怀孕。小鼠胚胎干细胞129×1/SvJ细胞系,购于ATCC公司。实验方法:取孕12.5～14.5d的胎鼠,制作小鼠胚胎成纤维细胞饲养层。在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养扩增胚胎干细胞。将饲养层上扩增后生长状态好的胚胎干细胞以0.25%胰酶消化,小心吹打成单个细胞悬液,以差速贴壁法将饲养层细胞去掉,按1×104L-1胚胎干细胞悬液悬滴在细胞培养皿的盖上,每滴10～20μL,不换液,3d后形成拟胚体,培养液为不含白血病抑制因子的胚胎干细胞培养液。挑选状态好的拟胚体分3组:转化生长因子β1诱导组、血管内皮细胞生长因子诱导组、转化生长因子β1+血管内皮细胞生长因子诱导组。采用RT-PCR和免疫组织化学方法证实诱导的细胞是否为内皮细胞。结果:①胚胎干细胞体外诱导生长观察:3组中拟胚体贴壁后第2天,胚体均略摊开,周围有上皮样细胞出现,第3,4天有许多卵石样细胞产生,至第6天开始出现由卵石样细胞构成的管状结构,自胚体向周围呈辐射状生长,渐呈网状,诱导时间约2周。转化生长因子β1+血管内皮细胞生长因子诱导组中产生的管样结构的拟胚体数较转化生长因子β1诱导组、血管内皮细胞生长因子诱导组多(44.67±3.88,28.17±6.08,33.00±2.68,P<0.05)。②RT-PCR法检测基因mRNA水平:3组基因表达的扩增片断分别为1086,733,265bp,与DNAmark相比较,条带位置相符。③扩增细胞的免疫组织化学染色:Ⅷ因子抗体反应显示阳性。结论:转化生长因子β1与血管内皮细胞生长因子均能诱导胚胎干细胞为内皮细胞,两者合用有可能提高诱导效率。

小鼠胚胎干细胞饲养层的制备及两种不同饲养层的比较

目的探讨建立有效的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层，用于胚胎干细胞的培养。方法取孕10．5～18．5d的昆明小鼠胚胎，用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞，在体外培养体系中，观察细胞在增殖，传代，冻存及复苏等方面的条件；取购买的小鼠胚胎成纤维细胞系制成饲养层，比较两种细胞用于制备饲养层在胚胎干细胞培养方面的优缺点。结果（1）12．5～14．5d的胎鼠最适合于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞，所分离的细胞含杂细胞最少，细胞较多，繁也快；（2）在37℃，0．25％胰酶-0．02％EDTA的混合消化液消化时间最好为3～5min，此时消化下的细胞最多，活力最好；（3）原代细胞平均培养4d即可传代，丝裂霉素-C抑制成纤维细胞增殖的合适浓度为10～20μg／mL（4）原代小鼠胚胎成纤维细胞较小鼠胚胎成纤维细胞系更适合于制备饲养层。结论原代小鼠胚胎成纤维细胞及小鼠胚胎成纤维细胞系均可用于制备饲养层。

介入治疗布-加综合征883例体会

目的总结介入治疗布-加综合征(BCS)的临床经验及存在的问题。方法对883例BCS患者行下腔静脉(IVC)造影,确定病变部位、类型,再用硬导丝或Rups100穿刺针穿通阻塞部位、球囊扩张,对短段狭窄或闭塞、扩张后球囊有切迹的隔膜型和长段狭窄型常规放置腔静脉支架。结果本组883例,扩张成功803例,其中IVC747例,肝静脉(HV)56例,放置IVC支架504例,HV支架16例。本组46例需行附加降低门脉高压手术。术后发生急性肾衰8例,肝昏迷2例,急性心衰43例。并发IVC急性血栓形成5例,死亡2例。673例获随访7～124个月,复发31例。结论介入治疗BCS具有安全、有效、恢复快等优点,逐渐成为临床首选。

介入治疗下肢动脉缺血性疾病

目的评价介入治疗下肢动脉缺血疾病的近、远期疗效。方法回顾性分析行血管腔内成形术或内支架成形术治疗360例下肢动脉缺血疾病患者的临床资料。结果本组腔内治疗成功率为93%(335/360),术后静息痛消失、溃疡愈合,术前、后踝肱指数(ABI)分别为0.37±0.16和0.89±0.21,二者比较有显著性差异(P<0.05);25例术后症状无明显改善,其中5例术后1周截肢。312例(86.7%)获得随访,随访时间6个月至8年,术后5年一期通畅率为70%,二期通畅率为82%,糖尿病患者5年一期通畅率为59%,二期通畅率为76%。结论介入治疗下肢动脉缺血疾病是一种安全有效的治疗方法。

重组质粒pEGFP-c1-FLT3L的构建及鉴定

目的:构建重组质粒pEGFP-c1-FLT3L并鉴定,为下一步利用纳米载体介导FL基因移植作用于结肠癌细胞的体内实验奠定基础。方法:应用基因合成和克隆技术构建重组质粒pEGFP-c1-FLT3L,并进行酶切鉴定及序列测定,以检测其核苷酸序列与设计的是否完全一致。结果:重组质粒pEGFP-c1-FLT3L经酶切鉴定分析,琼脂糖凝胶电泳鉴定可见清晰地切出与FLT3L基因大小相符的片段并与DNAmarker相符,同时进行序列测定,证实其核苷酸序列与设计完全一致。结论:成功构建重组质粒pEGFP-c1-FLT3L并得到正确鉴定,为下一步结肠癌的基因治疗打下实验基础。

重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL的构建及鉴定

目的:构建重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL并鉴定,为下一步利用纳米载体介导FL基因移植作用于结肠癌细胞的体内实验奠定基础。方法:应用基因合成和克隆技术构建重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL,并进行酶切鉴定及序列测定,以检测其核苷酸序列与设计是否完全一致。结果:重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL经酶切鉴定分析,琼脂糖凝胶电泳鉴定可见清晰地切出与TRAIL基因大小相符的片段并与DNA marker相符,同时进行序列测定,证实其核苷酸序列与设计完全一致。结论:成功构建重组质粒pDsRed1-C1-TRAIL并得到正确鉴定,为下一步结肠癌的基因治疗打下实验基础。

方正化保定殉难考

明末宦官方正化,在崇祯十七年三月甲申之变时,殁于保定之役。目前包括《明人传记资料索引》在内的关于明代史料研究方面,对于方正化的资料只知有《明史》,而事实上关于方正化的史料并非仅此一种。通过对错综复杂的相关文献进行疏理和考证,有助于明末甲申之变历史的相关研究。

喷雾冷却换热强化研究进展及影响因素

喷雾冷却是一种高效的散热手段,广泛应用于高热通量电子元器件的热管理。近年来,喷雾冷却引起了极大的关注,其换热能力得到了显著的提升。特别地,新型微纳米表面的开发极大地促进了喷雾冷却传热的发展,丰富了喷雾传热强化的机理研究。因此,本文全面系统地总结了喷雾冷却的最新研究成果,讨论了喷雾换热的强化机理,从传热表面特性,工作介质以及喷嘴参数等多个方面讨论了喷雾冷却换热的关键影响因素。最后,进一步探讨了喷雾冷却抑制Leidenfrost现象的机制,并对喷雾冷却未来研究方向进行了展望。

“三省吾身”之“三”的虚实探析

古代汉语中，“三”“九”等数词存在“具体数值”与“泛指”，一虚一实两种意义，在理解这类数词时应当结合具体语境分析其词义。杨伯峻先生在对“三省吾身”的解说中，以“巧合”解释古代汉语中“数词＋动词”与上下文指代相吻合的现象，有失稳妥。

药物机械偶联治疗急性和亚急性下肢深静脉血栓形成疗效分析

目的评价AngioJet机械偶联药物清除急性和亚急性期下肢深静脉血栓形成(DVT)的临床疗效。方法回顾性分析2016年8月至2017年11月济南市中心医院血管外科应用AngioJet机械药物偶联清除的28例急性和亚急性期DVT患者资料,评价术后血栓的清除率、患肢的消肿率、术后1年静脉管腔的通畅性及血栓形成后综合征(PTS)的Villalta评分。结果手术成功率为89.29%,临床成功率为100%。血栓清除率为(81.7±18.29)%;大腿的消肿率为(72.75±19.95)%;小腿的消肿率为(51.96±16.64)%,和术前相比差异有统计学意义(P<0.05)。术中有3例患者出现窦性心动过缓,有4例患者出现胸闷及憋喘,怀疑一过性肺栓塞。无颅脑及腹膜后大出血病例;无肾功能损伤患者;无患者死亡及其他手术相关并发症。术后1年随访,Villalta评分为(2.75±2.29)分,其中3例患者有轻度PTS,1例有中度PTS,PTS的发生率为14.29%。管腔通畅患者有24例,通畅率为85.71%。结论 AngioJet机械偶联药物清除急性期、亚急性期下肢DVT的近期及中期疗效令人满意。

明代大学者董传策记录的广西民俗

董传策谪桂十年,除了通过游山玩水寻找精神寄托外,还经常深入民间探访,对当地的民风民俗了解甚多。董传策的诗文中有很多关于广西民俗的记载。这些诗文是研究古邕州人民的生活状况,展现广西人民的生活特色的重要史料,具有重要的历史文化价值。

人Arresten基因真核表达质粒的构建

目的构建人Arresten基因的真核表达质粒。方法设计人Arresten基因引物序列,取100 mg新鲜的胎盘组织提取总RNA,采用RT-PCR法扩增Arresten基因。将获取的Arresten基因片段和p IRES2-EGFP质粒分别用Bam HⅠ和EcoRⅠ作双酶切,将酶切产物与质粒连接,转化感受态大肠杆菌DH-5α进行真核表达。采用酶切、菌液PCR及测序的方法检测Arresten基因真核表达质粒构建的正确性。结果经双酶切鉴定,得到1条约700 bp的片段和1条与p IRES2-EGFP空载体(5.3 kb)相近的片段,符合Arresten基因重组质粒大小。经重组质粒的菌液PCR鉴定,7组菌液均扩增出700 bp大小的扩增片段,均为阳性克隆。测序结果示,Arresten基因mRNA与GenBank中人Arresten序列完全一致。结论成功构建了人Arresten基因的真核表达质粒。

明代广西青秀山诗文漫谈

广西青秀山历史悠久,人文荟萃。明代时许多骚人墨客在青秀山放歌长啸,赋诗联句,流传至今大约有70余首名篇。这些诗篇是青秀山开发建设的重要史料,对挖掘青秀山的历史人文价值以及打造青秀山国家5A级风景区有一定的作用。

董传策青秀山诗文漫述

董传策寓居南宁十年,号"青山之主",留下了38首与青秀山有关的诗文,对青秀山景色进行了抒情、描绘。对这些诗文进行了整理,从中可见青秀山悠久浓郁的历史人文光彩,可为青秀山开发建设增添光彩。

股浅静脉瓣膜环缩术治疗轻中度股浅静脉返流的前瞻性研究

目的分析股浅静脉瓣膜环缩术在治疗轻中度股浅静脉瓣膜返流中的疗效。方法 32例患者术前彩超均提示股浅静脉返流,下肢静脉逆行造影示Kistner分级为2-3级,随机分为A组和B组各16例,A组行股浅静脉瓣膜环缩＋浅静脉手术,B组行浅静脉手术,术后3个月、3年B超检测股浅静脉返流时间,观察患肢症状改善,有无复发及深静脉血栓形成。结果术前A、B两组的返流时间差异无统计学意义（P〉0.05）,术后3个月及3年A、B两组的返流时间差异均有统计学意义（P〈0.05）,A组的3年复发率及症状改善明显优于B组。结论股浅静脉瓣膜环缩术在治疗轻中度股浅静脉瓣膜返流中疗效确切,有效地降低了手术复发率,明显地改善了下肢症状。

明代广西青秀山诗文分类研究

广西青秀山历史悠久，人文荟萃。明代时许多骚人墨客在青秀山放歌长啸，赋诗联句，流传至今大约有70余首名篇。这些诗篇是青秀山开发建设的重要史料。对挖掘青秀山的历史人文价值以及打造青秀山国家5A级风景区有一定的作用。