咖啡炭疽病菌致病性测定及其拮抗菌筛选

炭疽病是咖啡的一种常见病害,对咖啡果实的产量和质量造成严重损失,开展引起咖啡炭疽病的病原菌致病性及其生物学特性研究,并筛选有效的拮抗菌,将为咖啡炭疽病的生物防治提供参考依据。对实验室分离并保存的4株咖啡炭疽病病原Wyq1(Colletotrichum siamense)、Yyq1(C. fructicola)、Xbd1(C. gloeosporioides)、Hb1(C.theobromicola)孢子悬浮液进行致病性测定,并选择致病力最强的菌株进行后续试验;通过平板培养法测定病原菌的生物学特性,采用平板对峙法对病原菌进行拮抗菌筛选。致病性测定结果显示,4株菌株均可侵染健康咖啡叶片,且在4株病原菌中菌株Xbd1的致病力最强;对菌株Xbd1的生物学特性测定结果表明,营养生长最适培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),最适氮源为胰蛋白胨,最适碳源为葡萄糖,最适温度为28℃,最适pH为7,不同光照对其营养生长的差异不显著。室内拮抗菌筛选中有5株拮抗效果较好,分别是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)MC4-2、特基拉芽孢杆菌(B. tequilensis)D5-8、贝莱斯芽孢杆菌(B. velezensis)MC2-1、弯曲芽孢杆菌(B. flexus)ZLSY3和解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliticus)GJ7,其中拮抗效果最好的是枯草芽孢杆菌MC4-2,抑制率达57.8%。通过咖啡炭疽病病原菌致病性测定及其拮抗菌筛选,明确了该病原菌的致病性,筛选得到的5株拮抗菌的拮抗效果均较好,为炭疽病的防治及其生防菌剂的开发奠定基础。

二氧化钛反蛋白石薄膜的制备及其在化学传感器中的应用

用提拉成膜法将单分散295nm聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)胶体微球自组装成蛋白石光子晶体膜.在PMMA蛋白石光子晶体膜的空隙里填充15nm二氧化钛纳米颗粒,经500℃的处理除去PMMA膜板,制备出大面积,结构均一的二氧化钛反蛋白石光子晶体膜.扫描电子显微镜(SEM)观察和X射线光电能谱(XPS)分析表明,这种二氧化钛反蛋白石光子晶体薄膜是六方紧密堆积.用这种二氧化钛反蛋白石光子晶体膜对溶液折射率的检测实验表明该传感膜分辨率可达0.01.

基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBVDNA

目的研究病毒性肝炎基因芯片的制备,用肝炎基因诊断芯片,免疫组织化学法和原位分子杂交法,检测99例乙型肝炎后肝硬化肝组织,比较各种方法的优缺点。方法将PCR扩增的HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上,并经过点样处理后制备成基因芯片;收集肝炎后肝硬化肝组织标本99份,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测HBVDNA和HBcAg。结果53例HBcAg、HBVDNA阳性组织中基因芯片检测阳性40例;22例HBcAg阳性组织中基因芯片检测阳性6例;32例HBcAg、HBVDNA阴性组织中基因芯片检测均阴性。结论肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中HBVDNA,准确率可达75%,假阳性率低。

细胞色素CYP450 2E1基因Ras Ⅰ/Pst Ⅰ位点多态性与肺癌易感性的系统评价

目的:利用Meta分析的方法系统评价细胞色素CYP450 2E1基因RasⅠ/PstⅠ位点多态性与肺癌易感性的关系。方法:检索1991～2006年Cochrane图书馆、Medline、Elsevier、Ovid、Highwire Press、西文生物医学期刊文献数据库、中国期刊网、中国生物医学文献数据库、维普科技期刊全文数据库等,语种不限,获取有关细胞色素CYP2E1基因RsaⅠ/PstⅠ位点多态性与肺癌易感性的关系的研究结果,以病例组与对照组CYP2E1基因型分布的比值比(OR)为效应指标,确定纳入标准,对文献进行评价筛选,异质性检验,然后利用RevMan4.2软件对各研究原始结果进行统计处理,并计算合并OR值及其95%可信区间。结果:按照纳入标准,最终入选文献共有9篇病例对照研究,累计病例1123例,对照1434例,Meta分析结果合OR值为1.55,95%可信区间为1.30～1.86,Z值为4.84,说明细胞色素CYP450 2E1基因型频率分布与肺癌的关联有统计学意义。单纯病例研究分析示吸烟与CYP450 2E1c1/c1基因型交互作用OR值为0.73,95%可信区间是0.45～1.15,Z值为1.37,说明吸烟与CYP450 2E1c1/c1基因型之间交互作用无统计学意义。结论:对目前相关研究结果的Meta分析显示CYP2E1基因多态性与肺癌易感性之间存在一定相关性,即携带RasⅠ/PstⅠ野生型CYP2E1基因纯合子的个体发生肺癌的危险性较高,但与吸烟的交互作用尚不确定。

慢乙肝患者血清及肝组织HBVDNA表达及基因芯片检测研究

用点样仪将 PCR扩增的 HBVDNA探针制成基因芯片 ,对 15例慢性乙型肝炎 (下称慢乙肝 )患者的血清及肝活检组织 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法、雅培试剂检测 HBVDNA、HBc Ag、HBs Ag、HBe Ag。结果 15例患者的血清 HBs Ag、HBe Ag及基因芯片检测均阳性。15例肝组织标本中 ,免疫组化法HBc Ag阳性 15例 ,HBVDNA原位分子杂交法阳性 14例 ,基因芯片检测阳性 14例。认为肝炎基因诊断可同时检测乙肝患者血清及肝组织中的 HBVDNA。

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后引起的HBV YMDD变异

目的 建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断方法。方法 设计特异性寡核苷酸探针数组 ,特别处理芯片载体 ,用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。选择 30例服用拉米夫定后 ,HBVDNA转阴 ( <5 0 0copies/ml) ,6 8周后又反跳≥ 5 0 0copies/ml的病人进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对病人血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBVDNA反跳病人中 ,基因芯片测得HBVYMDD变异 2 1例 ,其中YVDD变异11例 ,YIDD变异 10例。HBVDNAPCR直接序列测定结果为有核苷酸A741变为G ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为缬氨酸 (氨基酸基序由YMDD变为YVDD) ,6例核苷酸A669变为C ,氨基酸由亮氨酸5 2 8变为蛋氨酸 ;核苷酸G743 变为T ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为异亮氨酸。 (氨基酸基序由YMDD变为YIDD)。其中有 3例伴有核苷酸T781变为C ,使氨基酸由亮氨酸 5 6 5变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异 ,与PCR直接测序法比较 ,准确率达 10 0 %。

DNA芯片技术诊断乙、丙型病毒性肝炎的研究

目的 :研究病毒性肝炎基因芯片的制备 ,用肝炎基因诊断芯片、病毒抗原抗体及DNA/RNA(PCR)检测方法对照检测乙型和丙型肝炎血清 ,比较两种方法的优缺点。方法 :血清来自乙型肝炎患者 40例、丙型肝炎患者 2 0例和健康人 40例。乙型肝炎确诊用雅培设备试剂 ,荧光微离子法 ;抗HCV检测丙型肝炎及PCR法检测HCVRNA。确诊后同健康人血清一起进行双盲混合编组 ,用肝炎基因诊断芯片检测。结果 :40例乙型肝炎病毒标志阳性血清 ,基因诊断芯片检测阳性 3 0例、阴性 10例 ;12例HCVRNA阳性血清 ,基因诊断芯片检测阳性 8例 ;抗HCV阳性、HCVRNA阴性血清 8例 ,基因诊断芯片检测阳性 2例、阴性 6例 ;40例健康人血清 ,乙型和丙型肝炎基因诊断芯片检测均为阴性。结论 :肝炎基因诊断芯片可以同时检测乙型和丙型肝炎 ,诊断乙型肝炎的准确率可达 80 % ,假阳性率低 ;诊断丙型肝炎的阳性率低 。

基因芯片检测拉米夫定引起的乙型肝炎病毒基因YMDD变异的研究

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)变异基因诊断芯片,对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断。方法:设计特异性寡核苷酸探针。用点样法制备HBV变异基因诊断芯片。选择住院患者30例服用拉米夫定后,HBVDNA转阴[<500拷贝(opies/ml)]68周后又反跳≥5000copies/ml的患者进行基因芯片杂交检测。同时用PCR直接测序法对30例患者血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果:30例服药后HBVDNA反跳患者中基因芯片测得HBVYMDD变异21例,其中YVDD变异11例,YIDD变异10例。直接序列测定发现有核苷酸A741变为G,使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD)11例,有6例核苷酸A669变为C,使氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸;核苷酸G743变为T,使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YIDD)10例。其中有3例伴有核苷酸T781变为C,使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸。其结果与基因芯片完全一致。结论:HBV变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异,同PCR直接测序法比较,准确率达100%,无假阳性。

应用多重RT-PCR技术检测食管癌患者外周血多种肿瘤基因标志物的研究

目的:建立多重RT-PCR同步检测技术,联合检测黑色素瘤抗原MAGEA3基因、人类斯钙素hsTC1基因、上皮细胞角质蛋白CK20、CK19基因及癌胚抗原CEA基因mRNA在食管癌患者外周血中的表达。方法:在分析MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19、CEA和β-actin六种基因mRNA全长序列资料的基础上,自行设计并筛选出6对引物及6条寡核苷酸探针,利用多重RT-PCR技术并结合基因芯片对样本进行检测。结果:全部样品均可检出β-actin,55例食管癌患者外周静脉血中MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA的阳性表达率分别为25.45%、47.27%、49.09%、34.55%和52.73%;多重RT-PCR技术同时检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因,如果至少表达其中一种即可作为阳性表达者,其阳性表达率可达72.73%。而10例食管癌组织中均为阳性,28例正常健康捐献者的外周血中有2例CEA表达阳性,27例非肿瘤病人的外周血中有3例CK20阳性,3例CK19阳性,3例CEA阳性。测序结果证实RT-PCR产物确为MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因。结论:联合检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA可以增加外周血循环癌细胞检测的敏感性,本研究建立的多重RT-PCR技术可以做为一种快速、灵敏的检测手段。

Midkine mRNA在食管鳞癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的:探讨靶基因中期因子(MK)在食管鳞癌患者外周血中的表达及其与食管鳞癌生物学行为的关系。方法:采用巢式RT-PCR方法检测54例食管鳞癌患者外周血的MK mRNA。10例正常健康志愿者外周血为阴性对照,11例食管鳞癌肿瘤组织为阳性对照。结果:54例食管鳞癌患者外周血MK mRNA阳性率为61.11%(33/54),并与食管鳞癌患者淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),而健康成人外周血则无一例出现阳性。结论:应用巢式RT-PCR方法检测食管癌患者外周血中的MKmRNA具有较高的敏感性和特异性,它有望成为判断食管鳞癌恶性程度、转移、复发和监测疗效的客观指标。

肝炎基因诊断芯片同时检测慢性乙型肝炎患者血清及肝组织HBVDNA的临床研究

目的 用肝炎基因诊断芯片同时检测乙型肝炎患者血清及肝组织中HBVDNA ,并与雅培试剂、免疫组织化学和原位分子杂交法比较。方法 用点样仪将PCR扩增的HBCDNA探针点到特殊处理过的玻片上制成基因芯片 ,对 15例慢性乙型肝炎患者的血清及肝活检组织 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法、雅培试剂检测HBVDNA、HBcAg、HBsAg、HBeAg .结果 15例HBsAg、HBeAg阳性的乙型肝炎血清 ,基因芯片检测均阳性。 15例肝组织标本 ,免疫组化法阳性 15例 ,原位分子杂交阳性 14例 ,基因芯片检测阳性 14例。结论 肝炎基因诊断可同时检测乙型肝炎患者血清及肝组织中的HBVDNA。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV YMDD变异及基因芯片检测

建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测方法。设计特异性寡核苷酸探针数组 ,特殊处理芯片载体。用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。在本院住院治疗病人中选择 3 0例服用拉米夫定后 ,可能出现YMDD变异的病人进行基因芯片杂交检测分析 ;同时用PCR直接测序法对上述 3 0例病人血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。 3 0例服药后HBVDNA反跳病人中 ,基因芯片测得HBVYMDD变异 2 1例 ,其中YVDD变异 11例。YIDD变异 10例。HBVDNAPCR直接序列测定结果与基因芯片检测结果完全一致。乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异 ,同PCR直接测序法比较 ,准确率达 10 0 % 。

病毒性肝炎基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBV DNA的研究

目的:研究病毒性肝炎基因芯片的制备及其检测HBV DNA的准确性.方法:将PCR扩增的HBV DNA探针用点样仪点于玻片介质上,并经过点样处理后制备成基因芯片;收集肝炎后肝硬化肝组织标本99份,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测HBV DNA和HBcAg,比较各种方法的优缺点.结果: 53例HBcAg、HBV DNA阳性组织中基因芯片检测阳性40例; HBcAg阳性22例中基因芯片检测阳性6例; 32例HBcAg HBV DNA阴性组织中基因芯片检测均阴性.结论:肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中HBV DNA,准确率可达75%,假阳性率低.

光反射干涉生物传感器及其应用研究进展

综述了光反射干涉生物传感器的工作基本原理,仪器结构的组成及各部件,并给出了光反射干涉生物传感器检测免疫学反应的图例。介绍了光反射干涉生物传感器历史发展过程,在环境、食品安全检测及生物材料吸附性能等多方面的研究进展,分析了该传感器的优点及存在的问题,以后应用和发展前景。为引进先进的食品安全自动化检测技术方法提供了理论依据。

基因芯片技术检测慢性乙型肝炎肝硬化患者肝组织及血清HBVDNA研究

目的研究DNA芯片技术在检测乙型肝炎和肝硬化患者肝组织及血清中HBVDNA的应用,并与雅培试剂、免疫组织化学和原位分子杂交法比较。方法用点样仪将PCR扩增的HBVDNA探针制成基因芯片,对15例慢性乙型肝炎(下称慢乙肝)患者的血清及肝活检组织、99例乙型肝炎后肝硬化肝组织,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法、雅培试剂检测HBVDNA、HBcAg、HBsAg、HBeAg。结果15例慢乙肝HBsAg、HBeAg阳性患者的乙型肝炎血清基因芯片检测均阳性。15例肝组织标本中,免疫组化法HBcAg阳性15例,HBVDNA原位分子杂交阳性14例,基因芯片检测阳性14例。99例乙型肝炎后肝硬化肝组织标本中,HBcAg阳性67例、HBVDNA阳性53例,基因芯片检测阳性46例;32例HBcAg、HBVDNA阴性组织基因芯片检测均阴性。结论肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织及血清HBVDNA,其诊断准确率高,假阳性率低。

基因芯片法对丙型肝炎病毒RNA的基因型分析

目的:制备丙型肝炎病毒(HCV)基因的分型诊断芯片,检测其对丙型肝炎患者血清HCV RNA基因分型诊断的价值。方法:根据HCV 5’端非编码区末端(5’UTR)和C区设计引物和特异性探针,将设计的20条特异性寡核苷酸探针用核苷酸合成仪合成后,配制成50μmol/ml的点样液,用点样仪点到特殊处理的玻片介质上,制成HCV基因分型诊断芯片。收集HCV RNA阳性的丙型肝炎患者血清30份作为实验组,健康人血清30份作为对照组。用荧光定量PCR仪对两组血清进行HCV RNA定量检测,实验组血清HCV RNA含量均大于500 copies/ml,对照组血清HCV RNA均为阴性。两组血清进行HCV RNA分离纯化、逆转录反应、巢式PCR扩增后,分别用基因芯片与核酸序列测定法进行双盲HCV基因分型检测。结果:实验组血清基因诊断芯片检测均为阳性;基因分型1b型23例,3a型2例,3b型1例,2a型1例,2b型1例,混合型1b+2a 1例,1b+3b型1例;核酸序列测定分型1b型25例,3a型2例,3b型1例,2a型1例,2b型1例;两种方法检测的基因分型符合率为93.3％。对照组血清基因芯片检测均阴性。结论:制备的HVC基因诊断芯片可以用于检测血清HCV RNA,并进行基因诊断分型,准确率较高。

基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBVDNA

目的 :研究病毒性肝炎基因芯片的制备 ,用肝炎基因诊断芯片 ,免疫组织化学法和原位分子杂交法 ,检测 99例乙型肝炎后肝硬化肝组织中 HBV DNA,比较各种方法优缺点。方法 :将 PCR扩增的 HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上 ,并经过点样处理后制备成基因芯片 ;收集肝炎后肝硬化肝组织标本 99份 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测 HBVDNA和 HBc Ag。结果 :5 3例 HBc Ag、HBVDNA阳性组织中基因芯片检测阳性 40例 ;HBc Ag阳性 2 2例中基因芯片检测阳性 6例 ;32例 HBc Ag HBVDNA阴性组织中基因芯片检测均阴性。结论 :肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中 HBVDNA,准确率可达 75 % ,假阳性率低。

电化学方法在李斯特氏菌毒力基因检测中的应用

单核李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)是食源性李斯特氏病的病源菌,该病可引起败血病、脑膜炎、流产等。李斯特氏菌的毒力因子listeriolysin O(LLO)是引发李斯特氏病的主要原因。文章使用一种特殊的电化学方法从样品中检测编码LLO的hlyA基因。该方法以化合物Nhydroxy sulfosucc inimide(NHS)和N-(3-dimethylamion)propyl-N'-ethyl carbodiimidehydroc hloride(EDC)作为激活剂,使单链DNA探针结合到金电极表面组成工作电极,以[Co(phen)3](ClO4)3作为指示剂来检测循环伏安曲线(Cyclic voltammetry,CV),通过CV峰值的变化来估算hlyA基因的含量,从而确定LM的污染情况。这种新颖的电化学方法用于免标记的目标DNA的杂交检测,具有快速和方便的特点。

一种新型肿瘤细胞抑制蛋白的分离纯化

介绍了从健康牛骨髓中分离到一种具有抑制肿瘤活性的糖蛋白，并对该糖蛋白进行了纯化，获得了电泳纯和层析纯的纯品．测得该糖蛋白N末端为两氨酸残基．用SDS-PAGE法测得该溏蛋白的表现分子量为65kD．氨基酸组成分析显示其为一种富含丝氨酸的蛋白质．生物活性测定表明，该糖蛋白纯品对小白鼠白血病P388细胞和人慢粒白血病HL-60细胞株的增殖均有抑制作用．有关该糖蛋白的糖含量的定量测定及蛋白质一级结构分析正在进一步的研究中．

一例维汉混血儿的血红蛋白Handsworth及结构分析

本文报道了在江西省一名维吾尔族与汉族混血青年中发现了一例血红蛋白Ｈａｎｄｓｗｏｒｔｈ，并对其进行了结构分析，证明它是ＨｂＨａｎｄｓｗｏｒｔｈ（α１８（Ａ１６）Ｇｌｙ→Ａｒｇ）。