CD137/CD137L信号通路在体外T细胞增殖反应和体内SGVHD诱导中的作用

目的:探讨抗CD137L单克隆抗体在体外、体内阻断CD137/CD137L信号通路对T细胞体外增殖的影响以及对小鼠同基因型移植物抗宿主病(syngeneic graft versus host disease,SGVHD)的作用。方法:体外混合淋巴细胞反应中加入不同浓度的抗CD137L单克隆抗体,观察抗体对T细胞增殖的影响。同基因骨髓细胞移植给致死剂量X射线照射的受体小鼠后,腹腔注射环孢素A(cyclosporine A,CsA)诱导SGVHD,并于诱导治疗的第10天起给治疗组小鼠腹腔注射抗CD137L单克隆抗体进行干预治疗。观察各组小鼠的临床症状(体重下降,腹泻),组织病理学和细胞因子改变。结果:体外用抗CD137L单抗阻断CD137/CD137L通路后,可抑制淋巴细胞的增殖和IL-2的产生。体内注射抗CD137L单抗,小鼠SGVHD的发生率为25%,显著低于诱导组小鼠SGVHD 67%的发生率,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。SGVHD小鼠肝脏和结肠组织病理学呈严重炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12I、FN-γ、TNF-αmRNA水平升高。而抗体治疗组小鼠组织病理学呈轻度炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12I、FN-γ、TNF-αmRNA水平较低或检测不到,而IL-4mRNA水平升高。结论:单独用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路在体外可明显抑制混合淋巴细胞反应,在体内可明显抑制小鼠SGVHD的发生。

乙肝患者血浆HBVDNA水平与乙肝五项指标关系分析

目的探讨乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）水平与乙型肝炎免疫标志物五项指标之间的关系。方法回顾性分析来我院就诊的267例乙型肝炎患者的HBV-DNA含量与乙型肝炎免疫标记物（乙肝五项）的表达关系。患者血浆标本中HBV-DNA含量的检测采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）,根据含量高低分为四个等级（小于103/ml、103-105/ml、105-107/ml、大于107/ml）;乙肝五项指标（HBsAg、抗HBsAb、HBeAg、抗HBeAb、抗HBcIgM）的检测采用酶联免疫法,按照阳性、阴性统计。结果乙肝患者血浆中HBV-DNA检出率为61.8%,HB-sAg、抗-HBsAb、HBeAg、抗-HBeAb、抗-HBcIgM的检出率分别为98.50%、1.12%、42.70%、40.45%、96.25%。在HBV-DNA含量不同的患者中,乙肝五项的检出率也不相同,随着HBV-DNA含量的升高,HBsAg、抗-HBcIgM的检出率变化不大,而HBeAg的检出率逐渐升高,抗-HBeAb检出率逐渐降低。结论血浆中HBVDNA含量与乙型肝炎免疫标志物之间存在密切的关系,随着HBV-DNA水平的升高,乙型肝炎免疫标志物出现不同的表达,这对临床医生更准确地判断患者病情及指导抗病毒药物的应用具有重要价值。

重组人白细胞介素18对小鼠骨髓细胞移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的:探讨重组人白细胞介素18(rhIL-18)对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响,为rhIL-18用于临床移植免疫提供理论基础。方法:受体鼠(BALB/c)接受9.0Gy剂量的X-射线照射之后,通过其尾静脉注射供体鼠(C57BL/6)的骨髓细胞和脾细胞,并于移植的-2^+2d腹腔注射rhIL-18。移植后观察受体鼠的临床症状和存活状况,同时检测其肝脏、结肠和耳朵的病理变化。结果:移植后aGVHD期内,用rhIL-18治疗的受体鼠GVHD症状积分较未接受rhIL-18治疗的受体鼠低(P<0.05),肝脏和结肠的病理变化轻(P<0.05),短期存活时间延长(P<0.05),但对长期生存率无明显影响。结论:受体鼠早期接受rhIL-18治疗,可在移植后aGVHD期内降低aGVHD的病变程度,为rhIL-18在临床上预防和治疗aGVHD提供了实验依据。

应用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路抑制小鼠SGVHD的发生

目的:探讨抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路在小鼠同基因型移植物抗宿主病(SGVHD)诱导中的作用,以阐明SGVHD的发生机制。方法:用致死剂量的X射线照射受体小鼠后,移植同基因骨髓细胞,从移植的当天开始连续21天腹腔注射环孢素A(CsA)诱导SGVHD。于诱导的第10天起给治疗组小鼠腹腔注射抗CD137L单克隆抗体进行干预治疗。观察各组小鼠的临床症状(体重下降,腹泻)、组织病理学和细胞因子改变。结果:抗CD137L单克隆抗体治疗组小鼠SGVHD的发生率明显低于诱导组小鼠SGVHD的发生率(25%vs 67%),两者差异具有统计学意义(P<0.01)。SGVHD小鼠肝脏和结肠组织病理学呈严重炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-αmRNA水平升高。而抗体治疗组小鼠织病理学呈轻度炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFNγ-、TNF-αmRNA水平较低或检测不到。结论:单独用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路可明显抑制小鼠SGVHD的发生,提示CD137/CD137L信号通路在小鼠SGVHD免疫反应中是较为重要的通路之一。

小鼠同基因型移植物抗宿主病发生机制及其意义

目的：初步探讨小鼠同基因型移植物抗宿主病(SGVHD)的发生机制,为研究移植物抗白血病效应奠定基础。方法：用同基因骨髓细胞重建致死剂量X线照射的小鼠,用环孢素A(CsA)腹腔注射诱导治疗21d。停药后每日观察小鼠临床症状,在小鼠出现GYHD样症状时,取肝脏、结肠、耳朵、皮肤和胸腺进行组织学检查,并检测肝脏、结肠组织细胞因子和协同刺激分子的表达。结果：67％(19／28)的模型组小鼠产生GVHD样症状,组织病理检查发现GVHD样小鼠结肠和肝脏有组织坏死和大量炎细胞浸润,而移植对照组均未出现GVHD样症状,组织学未见明显异常。R7-PCR检测发现GVHD样小鼠结肠和肝脏组织中共刺激分子CD137mRNA水平和细胞因子IL-12、IFN-Υ和TNF-α mRNA水平较移植对照组小鼠的水平升高。结论：CsA可诱导同基因型骨髓移植小鼠产生GVHD样症状,Th1类细胞因子参与了SGVHD的发生,为进一步研究$GVHD的抗肿瘤机制建立了技术平台。

小鼠同基因型移植物抗宿主病模型建立及其免疫机制初步探讨

目的：建立小鼠同基因型移植物抗宿主病模型，初步探讨小鼠同基因型移植物抗宿主病的免疫发生机制。方法：小鼠接受致死剂量的X线照射后，通过尾静脉注射同基因骨髓细胞进行骨髓移植和免疫重建，并于当天腹腔注射CsA进行诱导，连续21d。对照组小鼠腹腔注射相同体积和相同时间的橄榄油。停用CsA和橄榄油后观察小鼠是否出现同基因型移植物抗宿主病（SGVHD），若连续3次体重下降即可认为SGVHD阳性。取各组小鼠的肝脏、结肠、耳朵、皮肤和胸腺进行组织学检查；同时取小鼠的肝脏和结肠进行CD137mRNA和细胞因子IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA的检测。结果：CsA可诱导同基因型骨髓移植小鼠产生GVHD样症状，诱导组小鼠有67％出现SGVHD，而移植对照组未出现SGVHD。SGVHD阳性小鼠结肠和肝脏中CD137mRNA水平和IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA水平较移植对照组小鼠和诱导组中未出现SGVHD小鼠的水平升高，组织病理检查发现结肠和肝脏有大量炎细胞浸润。SGVHD阳性小鼠的胸腺大小与SGVHD呈负相关。结论：CsA可诱导X射线照射的同基因型骨髓移植小鼠产生SGVHD症状，CD137、细胞因子IL-12、IFN-7和TNF-α以及胸腺再生状态参与了SGVHD的病理机制。

CpG-ODN调节小鼠免疫细胞对HBsAg体液免疫应答性的初步研究

目的 初步探寻能够刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳CpG ODN序列。方法 应用正交设计法设计含有不同序列的 10种CpG ODN免疫小鼠 ,以研究影响CpG ODN免疫活性的 6个因素 :免疫时间、CpG基序侧翼核苷酸、5’ poly(A)、硫代修饰、回文结构和CpG 基序数量 ,筛选出最优组合的CpG ODN。结果 10种CpG ODN与HBsAg一起免疫小鼠均可不同程度地诱导小鼠抗HBsAg抗体水平的变化 ,显示出CpG ODN较强的佐剂效应。结论 CpG ODN与HBsAg一起免疫小鼠可诱导小鼠产生强烈的抗体应答 ,以六个因素均存在时CpG ODN的免疫刺激活性较强 ,即 10号序列 5’ AAAAAACGTTAACGTT 3’为本实验中刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳序列。

751株医院感染病原茵分析

自我院1996年～1997年检验本院各病房送检标本中共分离出病原菌751株,为了解引起医院感染的流行菌株,特对我科分离出的751株病原菌的分布进行分析.1 资料与方法1.1 标本来源 所有检验标本均为我院各病房送检的痰、尿液、脓液、分泌物(伤口、耳等)、咽试、血液及其它(胸水、腹水、脑脊液、前列腺液等)标本2107份。

尿红细胞容积变化鉴别血尿的临床意义

血尿是泌尿系统疾病最常见的表现之一，其病因复杂，诊断困难。我们对血尿患者进行尿红细胞容积测定，以鉴别其病因，效果较好。现报告如下。１资料与方法本组７６例中，男４３列，女３３例；年龄１５～６７岁。临床诊断为肾小球性血尿３８例（急性肾炎１０例、慢性肾炎７...

噬菌体展示CD28、CD137及生物活性测定

目的:以噬菌体展示具有天然结构的人 CD28、CD137分子胞外区,检测其抗原性和生物活性,为 CD28、CD137拮抗性类肽药物的筛选奠定基础。方法:构建 CD28、CD137噬菌粒表达载体 pComb3H-CD28、pComb3H-CD137,以噬菌体展示系统展示 CD28、CD137分子胞外区。以 ELISA、流式细胞仪检测噬菌体展示 CD28的抗原性和与 CD80的结合力,ELISA 检测噬菌体展示 CD137的抗原性,MTT 法检测噬菌体展示 CD28、CD137的生物活性。结果:成功构建重组噬菌粒载体 pComb3H-CD28、pComK3H-CD137,并以噬菌体展示系统展示 CD28、CD137分子。ELISA 结果显示,噬菌体展示 CD28可与抗 CD28抗体特异性结合,也可与 CD80特异性结合;FCM 结果显示,噬菌体展示 CD28可与 Jurkat 细胞表面 CD28竞争结合抗 CD28抗体,也可与 Raji 细胞表面 CD80结合。ELISA 结果显示,噬菌体展示 CD137可与抗 CD137抗体特异性结合。体外生物活性实验显示,噬菌体展示 CD28、CD137可抑制抗 CD28抗体、抗 CD137抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应。结论:利用噬菌体展示系统成功展示 CD28、CD137分子,噬菌体展示 CD28、CD137具有抗原性及生物活性,为以 CD28、CD137为靶点体外高通量筛选CD28、CD137拮抗性类肽奠定基础。

泰安地区遗传咨询者外周血淋巴细胞异常染色体核型与相关疾病的关系研究

目的探讨泰安地区遗传咨询者外周血染色体核型与相关疾病的关系。方法采用外周血淋巴细胞培养、染色体G显带方法进行核型分析,并回顾分析了1996年1月～2010年10月期间来我院进行遗传咨询人员的外周血染色体核型分布情况。结果 2211例遗传咨询者中检出异常染色体核型220例,异常检出率是9.95%,显著高于过去的8.7%(P<0.05)。220例染色体异常患者中,常染色体异常占60.45%,性染色体异常37.73%,性别不符占1.82%。染色体异常患者中,智低畸形儿所占比例最高,其次是无精症患者、自然流产者以及第二性征发育不良者,分别是41.37%,19.55%、12.73%和9.55%。结论染色体异常是导致发育异常、生育异常等疾病的重要原因之一。

急性白血病43例误诊方析

急性白血病４３例误诊方析孙兆刚，宋杭丽，刘兴田，李秀兰，黎爱华２７１０００山东省泰安市中心医院急性白血病（ＡＬ）常以发热、出血、贫血及脏器浸润为典型临床表现，辅以血象及骨髓检查，诊断不难。当患者以少见首发症状就诊．加之接诊者对其认识不足或其它原因时，...

低剂量NCPP对Con A诱导肝损伤的保护作用及机理研究

目的:研究低剂量无细胞短棒状杆菌纳米级制剂(NCPP)对刀豆蛋白 A(Con A)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及机理。方法:BALB/c 小鼠腹腔注射 NCPP(0.01 mg·只)后第7 d 以 Con A(25μg·g^(-1))尾静脉注射诱导小鼠急性肝损伤模型。测定血清转氨酶(ALT/AST)及肝脏内的病理变化。同时设置 PBS 预处理对照组和 Con A 模型对照组,每组8只小鼠。用流式细胞仪检测肝脏内自然杀伤细胞(NK 细胞)的数量变化和 CD4~4T 淋巴细胞的活化情况。结果:与 Con A 模型组相比,NCPP 预处理组小鼠血清转氨酶明显降低[ALT 水平从(328±14)U·L^(-1)下降到(104±41)U·L^(-1),AST 水平从(141±9)U·L^(-1)下降到(98±17)U·L^(-1)],肝脏组织 HE 染色显示肝脏病理损伤明显减轻,同时流式细胞术的分析结果显示:与 Con A 模型组相比,小鼠肝脏 NK 细胞数量降低,且 CD4^+T 淋巴细胞的活化受到了明显抑制。结论:NCPP 对 Con A 诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用。其机理可能与抑制 CD4^+T 淋巴细胞活化和拮抗肝脏内 NK 细胞的回流有关。

人MEF2C基因shRNA慢病毒载体构建及其对Daoy细胞MEF2C mRNA表达的影响

目的构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)基因短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,观察其对髓母细胞瘤Daoy细胞MEF2C mRNA表达的影响。方法设计MEF2C基因特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pGLV3/H1/GFP/Puro载体,筛选有效shRNA慢病毒载体,继而在293T细胞中包装成病毒颗粒,将其感染髓母细胞瘤Daoy细胞,Real-time PCR检测MEF2C mRNA。结果构建的MEF2C基因shRNA慢病毒载体测序正确,包装获得的shR-NA慢病毒颗粒感染Daoy细胞后其MEF2C mRNA表达量较阴性对照组下降了81.1%。结论成功构建了MEF2C基因shRNA慢病毒表达载体并包装成慢病毒颗粒,其能够有效抑制MEF2C mRNA的表达。

人CD137胞外区噬菌体展示系统的构建及鉴定

目的:以噬菌体展示具有天然结构的人CD137分子胞外区,检测其抗原性和生物活性,为以CD137为靶点体外筛选CD137拮抗性类肽药物奠定基础。方法:PCR方法从CIS质粒扩增人CD137胞外区,将其克隆入噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体电转入受体菌XL1Blue,并加辅助噬菌体VCSM13共感染,使CD137胞外区展示在噬菌体表面。采用ELISA法检测噬菌体展示CD137的抗原性,MTT法检测CD137噬菌体对抗CD137抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖作用的影响检测其生物活性。结果:成功构建表达人CD137分子胞外区的重组噬菌粒载体pComb3HCD137,并以噬菌体展示系统展示CD137分子胞外区。ELISA结果显示噬菌体展示CD137可与抗人CD137抗体特异性结合,证实CD137分子成功展示于噬菌体表面,且具有抗原性。体外生物活性实验显示,展示在噬菌体表面的CD137可抑制抗CD137抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应,证实噬菌体展示的CD137有与其配体结合的生物活性结构域。结论:利用噬菌体展示系统成功展示CD137胞外区,噬菌体展示CD137具有抗原性及生物活性。

无症状性脑梗塞患者平均血小板体积测定的临床意义

无症状性脑梗塞（简称ＳＩ）是由神经影像学或尸检发现而患者没有提供任何中风病史的脑梗塞。本文对３０例ＳＩ患者外周血的平均血小板体积（ＭＰＶ）和血小板数（ＰＬＴ）进行测定，并与１０例ＳＩ再梗塞者和３０便正常对照者的ＭＰＶ和ＰＬＴ比较，以探讨ＳＩ患者ＭＰＶ...

脐血LAK细胞分泌成分抑制大肠杆菌生长的初步实验

目的 探讨人脐血LAK细胞分泌成分对埃希氏大肠杆菌的抑制作用。方法 将脐血LAK细胞培养上清液和稀释的埃希氏大肠杆菌悬液混合 ,在培养皿内培养不同时间 ,计数各个培养皿内细菌菌落数。结果 加入脐血LAK细胞培养上清液的培养皿内无或仅有少量细菌菌落生长 ,而未加入脐血LAK细胞培养上清液的对照培养皿内有大量细菌菌落生长。结论 脐血LAK细胞分泌成分具有抑制大肠杆菌生长的能力 ,为进一步研究和临床应用奠定了基础。

急性早幼粒细胞白血病合并脑梗塞1例

急性早幼粒细胞白血病合并脑梗塞１例山东省泰安市中心医院，泰山医学院第一教学医院孙兆刚，李秀兰，黎爱华，刘兴田１病例介绍患者，女，５１岁，半年前开始出现头晕、乏力，半月前症状加重。因外周血＂全血细胞减少＂于１９９２年７月２１日住我院。既往健康。查体：Ｂ...