禽星状病毒检测技术研究进展

禽星状病毒(avian astroviruses,AAstV)是一种严重危害禽类健康的病原,可引起火鸡肠炎、鸡肾炎、鸭肝炎、雏鹅内脏痛风等病症,导致禽类生长缓慢、孵化率降低、死亡率增加。由于目前尚无有效疫苗及药物对AAstV感染进行防治,因此病原检测在AAstV感染的监测和鉴别诊断中起着重要作用。本文主要综述了电镜法以及病毒分离鉴定、免疫荧光、ELISA及PCR等AAstV检测技术的优缺点,以期为相关人员根据不同场合及需求选择合适的检测方法提供参考。

L-苯丙氨酸对小鼠妊娠早期胚胎发育及子宫局部肥大细胞的影响

为了研究交感神经对小鼠胚胎着床和发育的作用机制,本文筛选出合适的L-苯丙氨酸浓度(320mg/kg体重),处理孕鼠,观察胚胎着床和发育,通过甲苯胺蓝染色检测子宫局部肥大细胞的变化。研究结果显示,320mg/kg体重L-苯丙氨酸能显著降低胚胎着床数目,分别下降了45%(E7)和58%(E9),并且显著延缓胚胎的发育;与对照组相比,着床后子宫局部肥大细胞数目显著降低,分别在E5～E9降低了36.62%、64.59%和23.30%,差异显著。由本研究结果可以推断一定浓度的L-苯丙氨酸可以激活交感神经,影响妊娠早期子宫局部肥大细胞数量,从而改变子宫局部微环境,影响胚胎着床和发育。

生物传感器概述及其在动物疫病检测中的应用

生物传感器是由生物学、电化学、光学与信息科学等多学科交叉融合发展形成的一种传感新技术,具有成本低、操作简单、准确度高、专一性强等优点,被广泛应用于生物医学、食品工业、环境监测等领域,并为动物疫病检测提供了一种快速有效的新途径。目前生物传感器主要分为酶生物传感器、免疫生物传感器、微生物传感器、细胞生物传感器以及DNA生物传感器,每种生物传感器各有其优缺点及适应场合。近年来,生物传感器在动物疫病检测方面的应用逐渐成为研究热点,研究多聚集于禽流感、猪繁殖与呼吸障碍综合征、非洲猪瘟等病毒性疾病,沙门氏菌病、猪链球菌病等细菌性疾病,以及血吸虫病、弓形虫病等寄生虫病。未来生物传感器与新兴学科领域或新型材料的结合将进一步提高其检测效率、实用性和适用性。

布鲁菌赤藓醇代谢研究概况

布鲁菌感染动物后可以逃避宿主免疫系统清除而长期存在,并严重侵害动物生殖系统。赤藓醇是布鲁菌的一种优势碳源,对布鲁菌的生长具有明显促进作用。在布鲁菌基因组中已经鉴定出6个与赤藓醇代谢相关的基因,布鲁菌的赤藓醇代谢途径也基本研究清楚。缺失布鲁菌赤藓醇代谢相关基因会造成布鲁菌在多种感染模型中的生存能力不同程度的改变。论文从布鲁菌对赤藓醇的亲嗜性、赤藓醇代谢通路及转运、赤藓醇代谢的基因调控、赤藓醇对布鲁菌毒力影响等方面进行了综述。

牛支原体脂蛋白LppB的多克隆抗体制备及对天然蛋白识别分析

旨在克隆牛支原体脂蛋白LppB基因,并进行原核表达与纯化,制备其多克隆抗体,研究其对天然蛋白的识别能力。以牛支原体PG45、ZYJ5及GT01株基因组DNA作为模板,PCR扩增LppB基因,测序并比对分析;将合成的pET-30a-LppB质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达产物用Ni-NTA纯化,Western blot方法验证纯化重组蛋白,测定其反应原性;将纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其ELISA效价,Western blot测定多克隆抗体对牛支原体LppB的识别。结果显示:PCR扩增的LppB基因全长约1860 bp,与预期大小相符;LppB主要为可溶性表达,大小约为74 kDa,经Ni柱纯化后获得纯化蛋白,LppB蛋白具有良好的反应原性;制备出小鼠抗LppB多克隆抗体,ELISA效价为1∶25600,能够识别天然LppB蛋白。本研究成功制备出牛支原体重组LppB蛋白及其多克隆抗体,为LppB功能研究奠定基础。

鸭星状病毒3型探针法荧光定量PCR检测方法的建立及应用

鸭星状病毒3型(duck astrovirus 3,DAstV-3)是近年来导致我国鸭群感染率和发病率均较高的一类星状病毒,对我国养鸭业的发展造成了一定影响。为实现DAstV-3的快速检测,根据GenBank中DAstV-3参考序列(KJ020899),针对ORF1b基因保守序列设计并合成特异性引物和探针,建立了检测DAstV-3的荧光定量PCR方法。结果显示:该方法的标准曲线循环域值(Ct)与标准品模板浓度为1.0×10^(7)~1.0×10^(2) copies/μL时线性关系良好;特异性较好,仅能检测到DAstV-3,与鹅星状病毒1型、鹅星状病毒2型、鸭星状病毒4型、禽流感病毒、新城疫病毒、禽呼肠孤病毒等常见病毒均无交叉反应,最低检出限为10^(1) copies/μL;批内和批间重复试验变异系数(CV)均小于1.5%,稳定性和可重复性良好。利用建立的方法对128份临床样品进行检测,对鉴定为阳性的样品进行DAstV-3核酸扩增并送测序,并分析遗传进化关系及同源性,结果检出10份DAstV-3阳性样品,且阳性样品与参考株CPH在同一分支,核苷酸及推导氨基酸的同源性分别为94.7%~95.3%和94.5%~95.1%。结果表明,本研究成功建立了DAstV-3荧光定量PCR检测方法,可实现对DAstV-3的快速定量检测,为我国开展DAstV-3的分子流行病学调查和临床诊断提供了技术支撑。

《兽医公共卫生学》课程思政教学案例探索与实践

《兽医公共卫生学》涵盖知识点多,涉及范围广,学科跨度大,如何提高学生对课程的兴趣是授课教师面临的巨大挑战。社会热点问题比如3.15晚会中的动物源食品安全问题、新冠疫情中的防控措施等与兽医公共卫生学课程内容联系紧密,利用看视频、讲故事、沉浸式案例教学法更能加深学生对知识的理解。在此基础上,将绿色健康养殖、兽医职业道德、生态保护等“课程思政”的人文因素贯穿其中,在兽医公共卫生学的理论知识骨架之上生发出兽医信念、仁爱之心、职业认同等血肉,使《兽医公共卫生学》成为一门有灵魂和温度的课程。

不同分子生物学方法在H5亚型禽流感病毒检测中的应用比较

H5亚型高致病性禽流感(H5-HPAI)是严重危害家禽养殖业和公共卫生健康的一类动物疫病,也是我国高度重视、严格防控的人兽共患病。目前常用检测H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)的分子生物学技术包括反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、反转录重组酶辅助扩增(RT-RAA)、RT-RAA结合侧流层析试纸条(RT-RAA-LFD)、RT-RAA-簇状规则间隔短回文重复序列及其相关蛋白结合侧流层析试纸条(RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD)等。为比较不同检测方法对H5-AIV检测的灵敏度差异,将制备的cRNA标准品进行倍比稀释,分别用RT-PCR、RT-qPCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD、RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD进行检测。结果显示:RT-PCR、RT-qPCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD与RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD方法的检测灵敏度分别为10^(2)、10^(-1)、10^(0)、10^(0)、10^(-1)copies/μL。与RT-qPCR相比,RT-PCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD、RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD在临床样本检测上具有较高的符合率,分别为85.00%、93.75%、88.75%、91.25%。结果表明,5种方法均对H5-AIV具有良好的检出率,但RT-qPCR与RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD灵敏度更高,分别适合在实验室与基层养殖场进行临床检测。本研究评估了不同方法在H5-AIV检测中的应用效果,为在不同场景下选择准确可靠的检测方法提供了参考,也为H5-AIV感染的防控提供了技术支撑。

不同光周期对肉鸡免疫器官褪黑激素受体表达的影响

为研究不同光周期对肉鸡胸腺和脾脏褪黑激素受体(Mel1a、Mel1b、Mel1c)表达的影响,阐明光周期影响肉鸡免疫功能的可能途径,本试验选用0日龄雄性817肉鸡45只,按照光照∶黑暗为8 h∶16 h、12 h∶12 h、16 h∶8 h三种不同的光周期随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。饲养2周后取肉鸡胸腺和脾脏组织,测定其器官指数,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测其褪黑激素受体Mel1a、Mel1b和Mel1c基因的相对表达水平。结果显示,与Ⅱ组和Ⅲ组相比,Ⅰ组胸腺指数分别提高了16.13%(P<0.05)和22.03%(P<0.05),脾脏指数分别提高了19.40%(P>0.05)和21.21%(P<0.05),胸腺Mel1a基因相对表达水平分别升高了27.25%(P<0.05)和88.56%(P<0.05),脾脏Mel1a基因相对表达水平分别升高了11.53%(P<0.05)和19.08%(P<0.05),胸腺Mel1b基因相对表达水平分别升高了15.59%(P>0.05)和30.65%(P<0.05),脾脏Mel1b基因相对表达水平分别升高了18.07%(P>0.05)和40.11%(P<0.05),胸腺Mel1c基因相对表达水平分别升高了17.79%(P<0.05)和70.14%(P<0.05),脾脏Mel1c基因相对表达水平分别升高了34.05%(P<0.05)和63.77%(P<0.05)。结果表明,短光照可提高肉鸡免疫器官指数和褪黑激素受体基因的相对表达水平。

玉米赤霉烯酮对猪生产性能的影响及其脱毒方法研究进展

玉米赤霉烯酮(ZEA)是谷物中最常见的真菌毒素之一,可造成20%~30%的饲料浪费。ZEA可以对动物的肝脏、肠道、肾脏造成严重的氧化损伤。ZEA作为雌激素类似物,能够干扰内分泌平衡,影响动物的繁殖性能。文章总结了ZEA对猪生长性能的影响及其作用机制,列举了消除ZEA的物理、化学和微生物法并分析其局限性,重点阐述利用天然植物提取物,如葡萄籽提取物、番茄红素缓解(消除)ZEA毒性的研究进展,为解决饲料霉菌污染问题提供参考。

禽腺病毒4型检测方法研究进展

禽腺病毒4型(FAdV-4)是禽群中常见的免疫抑制性病毒,也是危害家禽养殖业健康发展的重要病原之一。FAdV-4主要引起肝炎-心包积液综合征(HHS),其临床表现以心包积液和肝炎为主,死亡率高达80%,严重危害家禽养殖业的健康发展。快速准确的检测方法能够为有效监测FAdV-4流行情况提供技术支撑,为疾病诊断和防控以及深入研究打下基础。本文针对目前国内外建立的FAdV-4检测技术,包括血清学检测技术,如中和试验、琼脂凝胶免疫扩散试验、酶联免疫吸附试验、间接免疫荧光技术,分子生物学诊断技术,如聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR、环介导等温扩增等进行综述,以期为FAdV-4的快速检测技术研究提供参考。

中成药注射液治疗犬细小病毒继发肺炎的可行性分析

犬细小病毒病是由细小病毒所引起的一种烈性的传染病,是一种较常见的犬类传染病,以幼犬多发为主要特征。一出现呕吐、腹泻、咳嗽等症状的比熊幼犬,通过犬猫传染病荧光定量分析仪、血常规、血气电解质等进行诊断,确诊为细小病毒感染并发肺炎;采用中药注射液、中药饮片与西药结合治疗,患犬最终康复出院。文章记录该病例的诊断、治疗过程,以期为犬细小病毒病并发白细胞减少症和肺炎提供治疗思路。

冀南地区滑液支原体分离鉴定及耐药性分析

【目的】了解中国冀南地区滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的流行和耐药情况,为该地区防控MS感染提供科学依据。【方法】于2019—2022年采集冀南地区疑似MS感染的7个规模化鸡场样品(发病鸡的气囊、腭裂或爪垫渗出液)进行病原分离培养及PCR鉴定,对分离株进行vlhA基因分型序列分析,采用微量肉汤稀释法测定分离株最小抑菌浓度(MIC)。【结果】所采集样品中分离出9株疑似MS菌株,均可使液体培养基颜色变为橘黄,在固体培养基中菌落形态为典型的“煎荷包蛋”样;PCR鉴定及测序结果显示,9株分离株与MS HN01株相似性为100%,表明分离株均为MS;vlhA基因分型序列结果显示,9株MS富含脯氨酸重复序列(PRR)区均为35个氨基酸,属于L型,核苷酸序列相似性为99.7%~100%,与中国其他地区L型菌株亲缘关系较近,与泰国L型菌株亲缘关系较远;MIC测定结果显示,9株MS对泰乐菌素、替米考星、螺旋霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、多西环素、土霉素、氟苯尼考、恩诺沙星的MIC 50/90值分别为0.25/0.25、0.5/0.5、0.5/0.5、1/1、≤0.016/≤0.016、0.062/0.125、1/1、2/2、4/4和32/32μg/mL。【结论】本研究于冀南地区成功分离到9株L型MS,与国内其他地区MS差异较小、遗传进化相对稳定,治疗当地MS感染可选用泰妙菌素、沃尼妙林、泰乐菌素、替米考星、螺旋霉素,其次为林可霉素、多西环素、土霉素。本研究结果可为当地防控MS感染提供科学依据。

植物提取物消除玉米赤霉烯酮的研究进展

玉米赤霉烯酮(ZEA)是一种由镰刀菌属真菌产生的具有脂溶性的致病性真菌毒素,广泛存在于小麦、玉米、花生和水稻等谷物中。因ZEA与雌激素结构相似,在动物体中表现出明显的生殖系统毒性,同时会诱发细胞中线粒体的氧化应激,降低机体免疫力。利用植物提取物的强抗氧化作用可以缓解ZEA对机体诱导的氧化应激和组织损伤。文章介绍了ZEA对动物体生殖系统的不利影响及其作用机制,详细阐述了番茄红素、原花青素等6种植物提取物对致病性真菌毒素的消除作用机制以及在实践中的应用现状,为后续植物提取物消除ZEA的研究提供参考。

番茄红素对限制应激着床期孕鼠子宫内膜发育和胚胎着床的影响

试验旨在探究番茄红素(LYC)对限制应激孕鼠着床期子宫内膜发育和胚胎着床数目的影响。选择8周龄昆明系孕鼠80只,在妊娠第1 d随机分为4组,每组3个重复,每个重复10只,分别为对照组、限制应激组(RS组)、玉米油+应激组(CRS组)、LYC+应激组(LRS组)。将LYC按10 mg/kg (体重)剂量给孕鼠灌胃(0.5 mL/只),灌胃2 h后进行限制应激处理(4 h/d),连续处理5 d,即胚胎着床期第5 d时,取血清和子宫组织。结果显示,与RS组相比,LRS组孕鼠血清中去甲肾上腺素含量降低10.00%,胚胎着床数增加47.92%,子宫指数增加83.36%(P<0.05),子宫内膜结构趋向对照组,表现为子宫内膜疏松,在靠近子宫腔附近细胞出现明显蜕膜化,子宫腺数量增多。进一步经荧光定量PCR和分光光度法检测发现,LYC预处理能够显著增加应激孕鼠子宫核因子红细胞相关因子2 (Nrf2) mRNA表达,改变Nrf2下游信号抗氧化酶水平。与RS组相比,LRS组着床期子宫中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性分别增加21.10%、82.60%,总抗氧化能力(T-AOC)显著增加64.50%,而丙二醛(MDA)含量显著降低65.60%(P<0.05)。研究表明,LYC可增加限制应激孕鼠着床期子宫中Nrf2表达,降低子宫局部氧化应激水平,提高子宫局部免疫水平,进而缓解应激对子宫内膜蜕膜发育的不利影响,增加胚胎着床数目。

应激对妊娠期母体免疫影响的研究进展

随着集约化养殖的发展,环境应激对动物生长发育和繁殖的影响愈来愈严重,尤其是妊娠期母体应激,将诱发母体情绪紧张,影响胎儿发育,甚至导致流产。其作用机制可能是通过激活神经-内分泌-免疫网络,导致母体全身免疫和子宫局部淋巴细胞、NK细胞数量和活性失调,引起妊娠期母体免疫微环境紊乱,引发胚胎免疫排斥,影响胎儿发育、异常,甚至死亡。作者就应激对妊娠的影响及其作用通路,尤其是应激对妊娠期母体免疫的研究进展进行了综述。

滑液支原体分子分型及免疫原性蛋白研究进展

滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是感染鸡和火鸡的主要病原体之一,对全球养禽业造成了巨大经济损失。为了选择分子分型方法进行分子生物学鉴定分析,以便研制出安全有效的亚单位疫苗,从病原特征、分子分型和免疫原性蛋白等方面对MS进行了综述。病原特征主要包括MS生长条件、传播方式和敏感性。MS分型方法众多,目前较为常用的是可变脂蛋白血凝素(vlhA)基因序列分析,其识别力较高,但具有多变性,有时难以确定分离株亲缘关系的相关性;多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)具有分子分型能力强的特点,更适合流行病学调查。目前,亚单位疫苗是支原体疫苗研发的重要方向,而筛选出合适的抗原是制备亚单位疫苗的前提,现已报道多种免疫原性蛋白,如NADH氧化酶、PDHA、MSPB、P35等。未来还需对MS毒力基因、致病机制和传播机制等深入研究,采用统一的分型方法对全球MS菌株进行分子生物学鉴定分析,积极研究免疫原性良好的抗原蛋白。本文为MS分子生物学鉴定及亚单位疫苗研制提供了参考。

生物被膜对鸡源肠外致病性大肠埃希氏菌耐药表型的影响

探讨鸡源肠外致病性大肠埃希氏菌(ExPEC)生物被膜(BF)形成能力及BF与耐药性之间的相关性,采用96孔微量板法和正交试验测定10株鸡源ExPEC的BF形成能力和BF强阳性菌株的最佳成膜条件,使用二倍倍比稀释法测定β-内酰胺类抗生素对生物被膜态与浮游态鸡源ExPEC的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示,10株鸡源ExPEC的BF阳性率为90%,E-26、E-28、E-43为弱阳性菌株(+);E-27、E-30、E-42为中等阳性菌株(++),E-39、E-40、E-41为强阳性菌株(+++),E-20为阴性菌株;3株强阳性菌株BF最佳成膜条件不相同;3株BF强阳性鸡源ExPEC的BF形成后,对β-内酰胺类抗生素耐药性有不同程度增加,同种抗生素对不同菌株的MIC变化可能不同,不同抗生素对同一菌株变化也不同。因此,鸡源ExPEC的BF阳性率较高,但各菌株形成BF的能力存在差异,不同菌株形成BF所需的条件不完全相同,BF形成会使鸡源ExPEC对抗生素的耐药水平增强,但同为BF阳性鸡源ExPEC,形成BF后β-内酰胺类抗生素耐药水平变化存在差异。

加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响

试验旨在研究加味理中汤方对脾虚泄泻模型小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响。试验中复方由干姜、党参、白术、甘草、茯苓、山药、木香、桂枝、砂仁组成。选择无特定病原体级ICR小鼠72只,随机分为6组,每组12只小鼠,雌、雄各半。除空白对照组(C组)小鼠灌胃同体积的生理盐水外,其余各组小鼠灌胃番泻叶提取物9 d建立脾虚泄泻模型。试验第10 d停用番泻叶,恩诺沙星治疗组(A组)小鼠灌胃恩诺沙星水溶液,各中药组分别给予低剂量(6.5 g/kg)、中剂量(13.0 g/kg)、高剂量(26.0 g/kg)灌胃治疗,C组和泄泻模型组(M组)用同体积的生理盐水灌胃,连续治疗3 d。结果显示,与C组相比,M组小鼠空腹血糖含量、淋巴细胞百分比、肝脏指数均极显著降低(P<0.01),血小板数目显著降低(P<0.05),中性粒细胞百分比及白细胞数目显著增加(P<0.01)。与M组比,各治疗组小鼠中性粒细胞百分比极显著降低(P<0.01),淋巴细胞百分及空腹血糖含量极显著升高(P<0.01);中药高剂量组(ZH组)小鼠血小板数目显著提高(P<0.05),肝脏指数极显著提高(P<0.01)。与A组比,ZH组小鼠血糖含量、肝脏指数均极显著升高(P<0.01),血小板数目、肾脏指数均显著升高(P<0.05)。研究表明,加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠的血常规、血糖及肝肾脏器指数等指标异常具有一定的改善作用,高剂量中药效果最佳且优于恩诺沙星。

宿主蛋白CHI3L1应对流感病毒预防及治疗的新思路

1流感病毒病原学及流行病学1918年,首次西班牙流感大流行暴发。直到2005年对大流行受害者的肺部样本进行测序,才明确了引起大流行的H1N1病毒。据估计,这种病毒造成5000万至1亿人死亡。H1N1病毒一直传播到1957年,当时H1N1在亚洲大流行期间被H2N2大流行病毒取代。