淮稻5号的真菌多样性及其储藏过程中可培养的优势真菌

【目的】从传统形态学和分子生物学两方面对2013年的淮稻5号中分离的真菌进行鉴定,并研究淮稻5号在不同储藏条件下优势菌株的演变规律,为该品种稻谷储藏过程中的真菌种属研究及霉变防控提供参考。【方法】淮稻5号中的可培养真菌通过采用孟加拉红和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)两种培养基,按照国标GB4789.15—2010的操作获得。将采自4个不同地区的淮稻5号混匀,分别调节其水分含量为14.5%和18.5%后放入25℃人工气候箱内模拟储藏,逐月取出模拟储藏的稻谷样品进行传统培养以确定可培养的优势真菌。真菌的种属分别通过菌落、菌丝及孢子的形态学观察,对照《中国真菌志》等参考文献确定;同时通过PCR分别扩增相应真菌的内转录间隔区(ITS)和28S rDNA的部分序列,连接T载体后测序,通过构建系统发育树进而确定真菌的种属。【结果】从4个地区的2013年淮稻5号稻谷中共分离得到33株真菌,主要为青霉(Penicillium)、曲霉(Aspergillus)和镰刀菌(Fusarium)等菌属,其中青霉属与曲霉属最多,分别为16株和15株,分别占分离所得菌株的48.5%和45.5%,表明青霉和曲霉是2013年淮稻5号稻谷中可培养真菌的优势菌属。而镰刀菌属的真菌仅2株,仅占分离所得菌株的6%。模拟储藏的结果表明,水分含量为14.5%的淮稻5号在25℃条件下储藏6个月时出现优势菌株,为橘灰青霉(Penicillium aurantiogriseum),并且该优势菌在模拟储藏的第7、8个月持续存在。水分含量为18.5%的淮稻5号在25℃条件下储藏7个月时出现优势菌株,为酵母菌,且该优势菌在模拟储藏8个月时依然存在。【结论】2013年淮稻5号中分离获得33株真菌,主要包括16株青霉、15株曲霉以及2株镰刀菌,表明青霉和曲霉是2013年淮稻5号稻谷中的优势菌属。不同水分含量的稻谷在储藏过程中可能出现不同的优势菌株。

傅里叶变换衰减全反射红外光谱技术对稻谷中常见有害霉菌的快速鉴别

本研究利用傅里叶变换衰减全反射红外光谱技术(ATR-FTIR)结合化学计量学方法,对稻谷中7种常见有害霉菌(尖孢镰刀菌Pr、尖孢镰刀菌Po、尖孢镰刀菌M23、黄灰青霉Pe、扩展青霉3.7898、灰绿曲霉3.3975和亮白曲霉)进行了快速鉴定。结果显示,运用主成分分析法(PCA)能够有效区分七种不同类别的菌株样品。建立的线性判别分析(LDA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型,对7种不同类别菌株的留一交互验证整体正确率分别达到87.1%和87.3%。说明运用ATR-FTIR技术对稻谷侵染霉菌的种类实现快速鉴别具有一定可行性。

储藏稻谷中一株优势腐败霉菌的分离与鉴定

稻谷在储藏过程中的安全问题一直以来都是人们关注的重点,许多真菌可以引起稻谷霉烂、变质,并且一些真菌产生的毒素可以对人、畜的生命安全造成威胁。从储藏稻谷中分离纯化出一株可培养真菌的优势菌,通过传统的菌落培养及菌丝、孢子观察,初步判断该菌隶属青霉菌属。结合分子生物学的方法对其18SrDNA及ITS序列进行分析,通过PCR扩增,得到序列长度为1 719bp的18SrDNA和序列长度为517bp的ITS序列,通过对其序列进行比对分析,构建了其系统发育树,最终鉴定该菌株为扩展青霉。

2013年粳稻4t实仓储藏一年后优势菌种的分离与鉴定

稻谷极易受到微生物的侵染,粮食微生物的活动不仅会影响到粮食的安全储藏,导致粮食腐坏变质,还会严重影响食用者的身体健康。采用GB 4789.15-2010对稻谷进行传统培养,并从中分离得到两株优势菌株。对分离出的优势菌株进行形态学观察,观察菌株在不同生长时期的形态及菌丝、孢子形态,初步判定两菌株均为曲霉。同时运用聚合酶链式反应对两菌株的ITS及28S片段进行扩增,扩增得517bp的ITS片度及560bp的28S片段,将基因序列在Genbank中进行相似性比对,最终确定两菌株为溜曲霉(Aspergillus tamarii)和亮白曲霉(Aspergillus candidus)。

基于GC-MS的6种常见霉菌纯培养期间挥发性物质的检测

利用气相色谱质谱联用技术对六种稻谷中常见有害霉菌的挥发性物质进行检测分析,研究发现:实验选取的灰绿曲霉3.3975、亮白曲霉、橘灰青霉Pp、产黄青霉M31、尖孢镰刀菌Pr、有毒镰刀菌6种霉菌生长期间产生的挥发性物质主要是烷类、烯类、醇类、酮类、醛类、酸酯类、杂环类及其他等七大类,其中,灰绿曲霉:1,3-二氯苯、1,4-二氯苯;亮白曲霉:十一烷、桉油精;橘灰青霉Pp:1-乙基环戊烯、2-甲氧基-3-(2-甲基丙基)-吡嗪;产黄青霉M31:邻二甲苯、对二甲苯、1,3-辛二烯;尖孢镰刀菌Pr:柠檬烯、贝壳杉烯;有毒镰刀菌:3-氯-4-甲氧基苯甲醛、3,4-二甲氧基苯甲醛。这一结果初步表明通过检测某种霉菌产生的特征性物质进而对霉菌的生长进行精准检测的可行性,并为储粮霉菌的检测控制研究提供了参考。