包被siRNA的叶酸改性聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯纳米材料的制备及其表征

目的构建可以稳定负载并有效释放siRNA的叶酸改性聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(FA-TPGS)纳米材料并观测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞毒性和剪切型X-框结合蛋白1(XBP1s)表达水平的影响。方法将FA-TPGS与罗丹明B(RhB)标记的XBP1 siRNA按照5∶1比例混合均匀得到包被XBP1 siRNA的纳米复合物(FT@XBP1)。通过透射电镜、动态光散射、紫外可见光谱和荧光光谱分析对FT@XBP1表征,同时计算XBP1 siRNA从FT@XBP1纳米载体中释放的药量。应用扫描电镜(SEM)、CCK-8以及流式细胞术检测FT@XBP1的细胞毒性,并应用Western blot法检测FT@XBP1对小鼠巨噬细胞RAW264.7中XBP1s的抑制作用。结果FA-TPGS与siRNA具有良好的结合作用,其中FT@XBP1的平均粒径为(200±20)nm。相对释放结果提示,酸性环境(pH 5.0)有利于siRNA从FT@XBP1中释放。CCK-8和凋亡实验均显示,FT@XBP1对RAW264.7细胞的增殖和凋亡影响较小,且FT@XBP1处理可显著抑制RAW264.7中XBP1s蛋白的表达(P<0.001)。结论叶酸修饰的TPGS纳米载体可有效包载XBP1 siRNA,抑制巨噬细胞XBP1s表达且细胞相容性良好。

伏立康唑血药浓度监测及临床应用分析

目的分析伏立康唑血药浓度监测结果,为临床安全、有效使用伏立康唑提供依据。方法回顾性分析安徽医科大学第一附属医院2016年10月至2017年8月60例真菌感染患者131次伏立康唑血药浓度测定结果,探讨血药浓度分布情况及联合免疫抑制剂对患者血药浓度的影响,并分析血药浓度与患者治疗效果和不良反应发生率间的关系。结果伏立康唑血药浓度差异较大,有51.15%(67/131)的血药浓度在1.0~5.0μg/m L,而41.98%和6.87%的监测结果分别低于和高于有效治疗浓度范围。联合使用免疫抑制剂者占53.33%(32/60),其伏立康唑血药浓度为(1.35±1.55)μg/m L,低于未使用免疫抑制剂者的(3.37±2.39)μg/m L,差异有统计学意义(P<0.05)。伏立康唑治疗的总有效率为95.00%(57/60),治愈组的血药浓度为(4.78±2.28)μg/m L,高于好转组和无效组的血药浓度(P<0.05),并且伏立康唑血药浓度高的患者,其不良反应发生率也明显上升(P<0.05)。结论伏立康唑血药浓度易受多种因素影响,个体差异较大,开展治疗药物监测有利于保证患者安全、有效用药。

紫杉醇用于非小细胞肺癌的药代动力学与疗效、毒性反应关系研究

目的寻找紫杉醇用于非小细胞肺癌的药代动力学参数与疗效和毒性反应之间的关系。方法 10例非小细胞肺癌患者采用紫杉醇135～175 mg·m-2第1天,静滴3 h,联合顺铂20 mg·d-1第1～5天方案化疗,动态采集血样本,利用HPLC方法测定血药浓度,计算药代动力学参数。记录用药过程中不良反应和疗效评价结果。采用SPSS 19.0统计学方法和DAS 3.0药物动力学软件进行数据分析。结果肝功能损害组Cmax高于无肝功能损害组,且有统计学意义(P=0.012);疾病控制组的每平方米体表面积药量(Dose)高于疾病进展组,差异有统计学意义(P=0.02)。白细胞减少组Dose、AUC、Cmax、t(>0.1)和t(>0.05)等均高于无白细胞减少组,但差异无统计学意义(P>0.05);白细胞减少组t1/2a低于无白细胞减少组,差异有统计学意义(P=0.034)。结论疾病控制组、白细胞减少组和肝损害组AUC分别高于疾病进展组,无白细胞减少组和无肝损害组;且白细胞减少组和肝损害组Cmax分别高于无白细胞减少组和无肝功能损害组,因此可以将紫杉醇AUC和Cmax作为观察疗效和毒副反应的指标,为临床个体化治疗提供一定的理论支持。

我院抗肿瘤及辅助治疗药物不良反应164例分析

目的对我院肿瘤内科不良反应(ADR)的发生情况及特点进行分析,为临床合理用药提供参考。方法采用回顾性分类统计,对164例报告涉及的患者年龄、性别、给药途径药物类别以及临床表现进行分析。结果 164例ADR中男性76例,女性88例;40岁以上154例;细胞毒类药物的发生率居首,占77.9%;ADR的临床表现以消化系统反应为主,其次为骨髓抑制。结论开展ADR监测工作是医务人员,特别是临床药师的重要任务,加强ADR监测,保障患者用药安全。

全自动二维液相色谱法测定甲氨蝶呤血药浓度及其临床应用

目的采用全自动二维液相色谱(2D-LC-UV)法快速测定甲氨蝶呤的血药浓度。方法采用10%三氟乙酸去蛋白剂对样本进行前处理后取上清液直接进样,待测物在一维柱Aston SC2(C18,4.6 mm×25 mm,5μm)上初步分离,通过中间柱Aston SN(苯基柱,4.6 mm×10 mm,5μm)截取保留,最后转移到二维色谱柱Aston SX1(氰基柱,4.6 mm×75 mm,5μm)上进一步分离、测定。一维流动相为甲醇-乙腈-10 mmol·L^(-1)磷酸铵水溶液=1∶1∶10(V/V/V),流速0.6 mL·min-1;二维流动相为水(含1.0 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵水溶液,磷酸调pH至7.40)-水(含1.0 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵水溶液,磷酸调pH至3.00)-甲醇-乙腈(16∶60∶10∶14)的混合体系,流速1.0 mL·min^(-1),柱温40℃;紫外检测波长304 nm。使用本方法监测2019年10月—2020年12月期间使用甲氨蝶呤治疗的48份样本的甲氨蝶呤血药浓度。结果甲氨蝶呤可在10 min内完整出峰且无杂质干扰,在0.05~12.8μmol·L^(-1)与峰面积线性关系良好(r=0.9997),方法学考察均符合要求。检测的48份甲氨蝶呤血药浓度样本中72.9%(35/48)的样本在标准曲线范围内,10.4%(5/48)的样本因使用剂量低未检出,另有16.7%(8/48)的样本使用大剂量甲氨蝶呤后血药浓度超出正常值上限。结论本方法操作简单,灵敏度、专属性高,稳定性好,能够满足甲氨蝶呤用药后药物浓度监测及解救的需要。

从典型病例谈肿瘤专业临床药师培养

结合典型临床病例从诊断、鉴别诊断、治疗方案制订、辅助药物应用等方面对临床药师进行临床和药学培养,并在日常工作中培养临床药师与患者和医护人员的沟通能力以及提供药品信息的能力,使临床药师学员能够通过1年培训后独立开展临床药师工作,促进我国临床药学事业发展。

“五常法”在门诊药房规范化管理中的应用

目的探讨门诊药房应用"五常法"对提高药品管理质量,提升药学服务的作用。方法运用"五常法"对工作环境,药品摆放、储存及使用等工作流程进行管理,并定期进行检查、评估与更新。结果药房工作环境及病人取药环境得到明显改善,药品调配差错率明显下降,药品管理质量及患者取药满意度、服药依从性均得到提高,同时也提升了药学人员的工作效率及药学服务能力。结论 "五常法"是药房质量精细化、科学化管理的有效方法,易实施,见效快,值得推广。

甲磺酸阿帕替尼三线或三线以上治疗晚期胃腺癌的临床观察

目的 探讨甲磺酸阿帕替尼三线或三线以上治疗晚期胃腺癌的临床疗效和安全性。方法 回顾性分析2014年12月至2016年1月接受过二线及二线以上化疗方案治疗失败的20例晚期胃腺癌患者，给阿帕替尼500 mg／天口服，持续用药至肿瘤进展或出现不可耐受的不良反应。结果 20例胃腺癌患者的有效率（RR）和疾病控制率（DCR）分别为10.0％和40.0％，中位无进展生存时间（PFS）和中位总生存时间（OS）分别为2.7个月和4.3个月。患者耐受性良好，常见的毒副反应为1～3级高血压、手足综合征和蛋白尿。结论 对于接受过二线及二线以上化疗方案治疗失败的晚期胃腺癌患者，阿帕替尼具有良好的疗效和安全性。

临床药学实习模式的探索

临床药学已成为当代药学的发展趋势,其发展对促进临床合理用药、提高医疗水平具有重要的意义。现结合国内外临床药学教育的先进经验,在实习中引入以病例为引导、以问题为中心的教学方法,建立了较为完善的临床药学实习培训模式,可全面提高学生的实际工作能力,为其以后独立从事临床药学工作打下坚实的基础。

自噬抑制剂在内质网应激状态下对肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02作用的差异

目的研究自噬在内质网应激(ERS)状态下对肝癌Hep G2细胞和正常肝细胞L-02作用的差异。方法体外常规培养的人肝癌Hep G2细胞和正常肝细胞L-02,分别给予衣霉素(TM)单药和TM联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(TM+3-MA)或氯喹(TM+CQ)作用12、24、48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测自噬蛋白LC3的变化。结果 TM可引起Hep G2细胞和L-02细胞死亡并呈时间依赖关系,3-MA或CQ均可增加TM对Hep G2细胞的生长抑制作用,24 h细胞存活率分别为TM+3-MA组(60%)、TM+CQ组(72%)、TM组(86%),差异有统计学意义(P<0.01);但对于L-02细胞,其存活率分别为83%、84%、83%,活力没有明显差异;流式细胞术显示TM+3-MA、TM+CQ和TM组对Hep G2细胞的凋亡率分别为15%、11%、7%,差异有统计学意义(P<0.01),但对L-02细胞,凋亡率分别为16%、17%、16%,未见明显差异;Western blot法结果显示TM作用引起两种细胞自噬增加,自噬抑制剂3-MA与CQ可引起两种细胞自噬作用减弱。结论自噬抑制剂(3-MA或CQ)均可显著增加TM对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,但对正常肝细胞L-02的生长抑制作用差异无统计学意义。自噬在ERS状态下可对肝癌细胞的生存提供保护,但对正常肝细胞无保护作用。

PKM2在肝癌组织中的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨M2型丙酮酸激酶同工酶(PKM2)在人肝癌组织与癌旁组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组化方法对手术确诊的144例肝癌及癌旁组织标本进行PKM2检测,并分析其表达与临床病理、生化之间的关系。结果肝癌组织中PKM2阳性表达为53.5%,癌旁组织中PKM2阳性表达为27.1%;PKM2的表达与γ-谷氨酰转移酶、碱性磷酸酶、肿瘤大小和分化程度呈显著相关(P<0.05),与性别、年龄、肝炎病史、肝硬化病史、甲胎蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶以及临床分期无显著相关(P>0.05)。结论 PKM2在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且其表达与肝癌的肿瘤大小和分化程度密切相关,有望成为肝癌诊断的新指标及潜在的治疗靶点。

我院急诊药房退药情况分析

目的分析该院急诊药房退药情况,探讨减少退药的措施,提高临床合理用药和医院药品管理水平。方法收集该院急诊药房2012年1—12月的退药处方,运用Excel结合上海金仕达卫宁THIS4.0系统对相关数据进行统计、分析。结果退药处方患者年龄最小为2个月,最大为80岁,1～12岁年龄段退药处方最多,占41.6%;急诊儿科发生退药情况最频繁(401张,50.2%),其次是急诊内科(245张,30.7%);退药原因排名前三位的是药物不良反应(219张,27.4%)、皮试阳性(154张,19.3%)、住院治疗(145张,18.2%);退回药品最多的为头孢菌素类药物(487张,61.0%)。结论该院急诊药房退药现象普遍且存在一些不合理的现象,应提高医师的职业道德、诊治水平、责任意识,加强医—药—患之间的沟通和临床药学服务,完善相关管理制度和信息管理系统,以减少退药。

高效液相色谱法测定肾移植病人泼尼松龙、伏立康唑及其氮氧化物浓度

目的 建立快速、灵敏的高效液相色谱法测定病人血浆泼尼松龙、伏立康唑及其代谢物伏立康唑氮氧化物的浓度。方法色谱柱为安捷伦ZORBAX Eclipse XDB C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈∶水(27∶73~60∶40)梯度洗脱;流速为1.0mL/min;波长为244 nm;柱温为30℃。收集2019年9月至2020年3月在安徽医科大学第一附属医院接受伏立康唑治疗的肾移植病人24例,检测24例肾移植病人血药浓度,男14例、女10例。结果 泼尼松龙、伏立康唑及其氮氧化物色谱峰分离良好。泼尼松龙在3.13~100.00μg/L范围内线性关系良好,r=0.993 1;伏立康唑在0.16~20.00 mg/L范围内线性关系良好,r=0.999 8;伏立康唑氮氧化物在0.16~10.00 mg/L范围内线性关系良好,r=0.997 3。三种化合物日内及日间RSD在1.93%~6.74%,绝对回收率在65.48%~86.68%。24例病人泼尼松龙浓度在7.75~72.75μg/L,伏立康唑浓度在0.17~5.44 mg/L,伏立康唑氮氧化物浓度在0.66~3.06 mg/L,个体差异较大。结论 该方法专属性强、灵敏度高,适合泼尼松龙、伏立康唑、伏立康唑氮氧化物血浆浓度的测定。

内质网应激肝癌细胞通过外泌体-Toll样受体4信号途径促进巨噬细胞M2极化

目的探讨肝癌细胞内质网应激相关外泌体能否通过Toll样受体4(TLR4)调控巨噬细胞M2极化及潜在机制。方法采用Western blot实验分析肝癌组织和衣霉素刺激后肝癌细胞内质网应激相关标志蛋白GRP78的表达及肝癌细胞分泌的外泌体鉴定;免疫组化检测肝癌组织GRP78的表达水平;免疫荧光验证巨噬细胞有效摄取外泌体;流式细胞术、Western blot实验和CBA试剂盒检测巨噬细胞M2型表型转化相关标志分子及巨噬细胞Toll样受体4表达水平;通过Affymetrix基因芯片和生物信息学分析筛选内质网应激相关外泌体作用后巨噬细胞mRNA的差异表达及TLR4的表达。结果临床样本中,肝癌组织GRP78表达高于癌旁组织。在细胞实验中,与对照组相比,2.5μmol·L^(-1)的衣霉素刺激肝癌细胞24 h可明显升高内质网应激标志蛋白GRP78表达。衣霉素刺激和未刺激的肝癌细胞分泌的外泌体均特异性表达CD63、TSG101、HSP70外泌体标志性蛋白,但不表达外泌体阴性蛋白Calnexin。处理组肝癌细胞分泌的外泌体中HSP70表达高于对照组。激光共聚焦显微镜提示巨噬细胞可有效摄取外泌体,流式细胞术和Western blot进一步提示肝癌细胞ERS相关外泌体可显著上调巨噬细胞CD206、转化生长因子β1(TGF-β1)和精氨酸酶1(Arg-1)的表达。此外,这些外泌体可以促进巨噬细胞分泌IL-6和IL-10,并上调巨噬细胞TLR4表达。结论内质网应激的HCC细胞可能通过释放富含HSP70的外泌体,激活TLR4信号,促进巨噬细胞M2极化。

miR-98对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的研究miR-98对肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC瞬时转入肝癌Hep G2细胞内,应用噻唑盐(MTT)法、流式细胞仪、Transwell小室实验检测miR-98对肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用Western blot法检测各组Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT实验表明miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin VFITC/PI凋亡实验证实上调miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell小室实验表明上调miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当miR-98被抑制后,肝癌Hep G2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。Western blot实验检测发现miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调Bcl-2的表达,促进肝癌Hep G2细胞凋亡。

抑制肝癌细胞内质网应激可增强槐耳清膏的抗肿瘤作用

目的探讨4-苯基丁酸(4-PBA)抑制肝癌细胞内质网应激(ERS)对槐耳清膏抗肿瘤作用影响。方法首先将肝癌细胞分为对照组与实验组,对照组(0mg/ml)不作处理,实验组细胞用不同浓度的槐耳清膏(2、4、6、8mg/ml)进行处理,24h后用MTT法检测肝癌细胞活力,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率,Westernblot法测定肝癌细胞内凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达情况以及ERS相关蛋白GRP78、PERK和IRE1的水平;再将肝癌细胞分为4组,分别为con组、4-PBA组、Huaier组和联合用药(4-PBA+Huaier)组,24 h后检测肝癌细胞ERS相关蛋白PERK和IRE1的表达水平、肝癌细胞活力、凋亡率以及细胞内Bcl-2和Bax的表达情况。结果与Huaier组相比,4-PBA+Huaier组中肝癌细胞活力下降;4-PBA+Huaier组肝癌细胞株HepG2和Hep3B凋亡率为(1.12±16.98)%和(2.32±15.68)%,而Huaier组细胞凋亡率为(1.15±12.89)%和(2.58±10.67)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论槐耳清膏与4-PBA联合使用可抑制肝癌细胞发生ERS,抑制肝癌细胞活力并使肝癌细胞凋亡增加,增强槐耳清膏的抗肿瘤作用。

192例肿瘤患者消化道不良反应危险因素分析

目的对肿瘤患者消化道不良反应(ADR)的发生情况及特点进行分析,为临床合理用药提供参考。方法采用回顾性分类统计,对192例报告涉及的患者年龄、性别、肿瘤类型、生活质量评分、给药方式以及ADR临床表现进行分析。结果 192例ADR中男性102例,女性90例;40岁以上171例,占89.06%;消化道肿瘤患者93例,居第一位;细胞毒药物ADR发生率居首;ADR的临床表现以恶心、呕吐主,其次为腹泻。结论开展ADR监测,是医务人员,特别是临床药师的重要工作。

基于低糖低血清营养胁迫构建内质网应激和自噬模型及其评价

目的通过营养胁迫构建内质网应激和自噬模型并评价其对肿瘤增殖和凋亡的影响。方法以含1%血清的低糖DMEM培养基分别处理HepG2细胞、Huh7细胞不同时间,Western blot检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子-6(ATF6)、必需肌醇1α(IRE1α)、蛋白激酶RNA样内质网激蛋白(PERK)和自噬蛋白轻链3(LC3)、核孔蛋白62(P62)、自噬相关蛋白1(Beclin-1)的表达。免疫荧光双染观察自噬蛋白LC3和GRP78的共表达情况。分别采用流式细胞术和CCK-8检测营养胁迫对细胞凋亡和增殖的影响。结果Western blot结果显示营养胁迫可时间依赖性的增加肝癌细胞内质网应激和自噬相关蛋白的表达,且在36 h达到高峰。激光共聚焦检测结果进一步证明营养胁迫36 h后肝癌细胞GRP78和LC3荧光强度显著增加。流式细胞术结果显示,低糖低血清营养胁迫模型不会增加肝癌细胞凋亡,但CCK-8实验提示营养胁迫可抑制肝癌细胞的增殖。结论1%血清低糖DMEM不仅可以诱导内质网应激和自噬且不增加肿瘤细胞凋亡,更符合微环境肿瘤细胞生存状态,为研究内质网应激和自噬提供一种新方法。

载PTH-Fc/PLCL/SF静电纺丝屏障膜的构建与性能研究

目的:利用静电纺丝技术制备携载PTH-Fc的PLCL/SF三维纤维纳米屏障膜,并研究其生物相容性、生物降解能力、机械强度和调节细胞活动的能力。方法:制备PTH-Fc/PLCL/SF屏障膜,并与PLCL/SF屏障膜对照,扫描电镜研究其降解前后微观形貌,拉伸实验研究其机械强度,MTT测试与细胞粘附性实验研究屏障膜的生物相容性,茜素红染色研究携载PTH-Fc缓释是否可以影响细胞成骨分化。结果:PTH-Fc/PLCL/SF屏障膜纳米纤维丝均一光滑。PTH-Fc/PLCL/SF与PLCL/SF屏障膜断裂强度为(5.56±0.18)MPa、(5.42±0.03)MPa,两者无统计学意义。PTH-Fc/PLCL/SF生物降解能力优异,PTH-Fc/PLCL/SF与PLCL/SF屏障膜均可以促进细胞增殖(P<0.05),两者之间无统计学意义,但PTH-Fc/PLCL/SF能促进细胞分化。结论:PTH-Fc/PLCL/SF屏障膜有良好的机械强度、适宜的降解能力,能促进BMMSCs细胞增殖与分化。

PTH-FC对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化的影响

目的:评价甲状旁腺激素融合蛋白PTH-FC(parathyroid hormone-Fc)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用,筛选出PTH-FC诱导BMSCs最佳的作用时间。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs并进行鉴定,以1.0×10^(-9) mol/L PTH-FC成骨诱导液诱导BMSCs作用6h(间歇性给药组)和48h(持续性给药组)通过噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、茜素红染色观察PTH-FC对BMSCs增殖和骨向分化的作用。结果:含1.0×10^(-9) mol/L PTH-FC的成骨培养液作用6h间歇性给药组与其他组比较,ALP和茜素红染色结果显著高于其他组;MTT结果显示各实验组间比较差异无统计学意义。结论:1.0×10^(-9) mol/L PTH-FC作用BMSCs 6h的间歇性给药组具有最佳的骨向诱导能力,这提示PTH-FC作为骨诱导生长因子联合BMSCs对骨组织缺损的修复是可行的。