四逆汤活性成分在血液和心脏部位微透析方法的建立

目的建立四逆汤活性成分在血液和心脏部位的微透析采样方法。方法以四逆汤中苯甲酰新乌头原碱、6-姜酚和甘草苷的回收率为指标,采用浓度差法(增、减量法)考察灌流液流速对回收率的影响,并综合实际因素确定四逆汤体内微透析采样流速;采用增量法考察探针外液温度和浓度对回收率的影响;用减量法验证各指标成分在体内10 h的释放率稳定性。结果在不同流速下,各成分在血液和线性探针中的增量法回收率与减量法释放率基本一致,且随着流速的增大而减小,结合采样体积和实验时间,确定以1.0μL·min^-1为体内实验流速;温度对血液探针回收率无显著影响,但在线性探针中,回收率与温度呈现相同趋势;浓度对2种探针各成分的回收率有一定的影响;在2种探针中,各指标成分的体内回收率均能在10 h内维持稳定。结论所建立的微透析方法能够用于研究四逆汤在大鼠血液和心脏部位活性成分的动态变化情况。

不同提取工艺制备的虎金方提取物对自由脂肪酸诱导的HepG_(2)细胞脂肪变性的抑制作用

目的:探讨不同提取方法制备的虎金方提取物对HepG_(2)细胞脂肪变性的抑制作用及可能机制。方法:采用全方水提、部分水提部分醇提、全方醇提等三种提取方法分别制备不同浓度的虎金方提取物;采用自由脂肪酸(FFAs)干预HepG_(2)细胞制备NAFLD细胞模型;采用油红O染色法考察三种提取物对NAFLD细胞模型脂滴堆积及IOD值的影响;采用相关试剂盒测试并观察其对NAFLD细胞模型中ALT、AST、TG、TC水平及SIRT1、Srebp-1c、FAS三种脂质代谢相关蛋白含量的影响。结果:与模型组比较,虎金方全方水提组细胞脂滴蓄积显著减少,ALT、AST、TG、TC、FAS蛋白、Srebp-1c蛋白水平显著降低,SIRT1蛋白水平显著升高,其作用优于全方醇提物及水醇结合提取物。结论:三种不同提取工艺的虎金方提取物对NAFLD细胞模型脂肪变性均具有一定的抑制作用,其中以水提物在40μg/mL时抑制作用较优,其可能通过抑制脂质堆积、改善肝细胞损伤发挥作用,其作用机制可能与调节SIRT1相关信号通路及脂质合成相关基因SREBP-1c、FAS有关。