5-氮杂-2’-脱氧胞苷对内皮祖细胞分化的影响及机制研究

目的探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷诱导内皮祖细胞分化为内皮细胞的作用及初步机制研究。方法收集脐带血,Ficoll-Paque淋巴细胞分离液和6%羟乙基淀粉沉降法分离获得单核细胞并培养,采用免疫组化及倒置相差显微镜鉴定细胞为内皮祖细胞(EPCs),EPCs培养7d后,分别加入1μmol/L(即d C1组),3μmol/L(即d C2组)5-Aza-d C的培养液,阴性组为采用0.0076%DMSO进行干预。流式细胞术检测5-Aza-d C处理后第0、3、7d后CD34+、CD31+的表达,RT-PCR分析VE-cadherin、Tie-2及v WF基因表达,western blotting检测v WF蛋白表达,MSP法检测BMP4基因Cp G岛甲基化表达情况。结果 1单核细胞经倒置相差显微镜及VE-cadherin、Tie-2、v WF、KDR、CD34及CD133等因子证实为EPCs;2流式细胞术结果显示,d C2组在经5-Aza-d C处理后的第3d、第7d CD34+(分别为30.2%、6.7%)降低,同阴性组(46.7%、40.8%)比较差异具有统计学意义(均P<0.05);d C2组在经5-Aza-d C处理后的第7d C CD31+(47.9%)升高,同阴性组(31.3%)比较差异具有统计学意义(P<0.05);3RT-PCR结果显示,d C2组在处理后第14d Tie-2、VE-cadherin基因均明显高于阴性组(均P<0.05);d C1、d C2组在处理后的第3d、第7d、第14d Tie-2、v WF、VE-cadherin基因均明显高于处理后的第0d(均P<0.05);4Western blotting检测显示,d C2组第0d、第3d、第7d v WF蛋白表达量均高于阴性组(均P<0.05);d C1、d C2组在第3d、第7d v WF蛋白表达量均高于所对应组别的第0d v WF蛋白表达量(均P<0.05);5甲基化处理后d C1组和d C2组BMP4呈低表达,而非甲基化时d C1组和d C2组BMP4呈强表达。结论 5-Aza-d C具有定向且快速诱导EPCs分化为内皮细胞的可能,这一作用机制可能与促进BMP4分化基因表达,进而刺激Tie-2、VE-cadherin及v WF的表达的作用有关。