慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在慢性患者中存在状态． 以 ＨＢＶ基因序列为依据，设计特异性多聚酶链反应（ＰＣＲ）引物．自２例慢性患者体内扩增ＨＢＶ全Ｓ基因片段，克隆入Ｔ载体．限制片段长度多态性（ＲＦＬＰ）法确定ＨＢＶ的变异现象，ＤＮＡ测序确定病毒的变异程度。质粒ＥｃｏＲＩ酶切ＲＦＬＰ结果提示自２例患者血清中克隆出的２９和２８个阳性克隆中各有５种不同的长度带型，ＰＣＲ产物ＸｈｏＩ酶切ＲＦＬＰ结果则表现为高度保守，测序结果发现ＨＢＶ体内毒株碱基序高度一致，同一患者两株全Ｓ区序列测序结果表明ＤＮＡ序列的同源性大于９７％。本结果提示ＨＢＶ慢性患者体内有ＨＢＶ准种共存，且呈现出一定的优势克隆现象。

大鼠肝再生增强因子基因组DNA的克隆化与序列分析

根据大鼠肝再生增强因子 (Augmenterofliverregeneration ,ALR)cDNA序列设计特异性引物 ,采用多聚酶链反应 (PCR)法自Wistar大鼠基因组DNA中扩增出大鼠ALR基因组DNA ,全长为 15 0 8nbp ,结构为 3个外显子和 2个内含子 ,外显子长度分别为 18bp、197bp和 16 3bp ,各编码 6个、6 4个和 5 5个氨基酸残基 ,长度与小鼠、人类ALR的外显子一致。

乙型肝炎病毒表面抗原人源单链可变区抗体基因的克隆与鉴定

目的 筛选、鉴定抗乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的编码基因 ,为细胞内表达小分子单链抗体的研究及抗HBV的基因治疗研究奠定基础。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,以氯化铯超速离心法纯化的HBsAg蛋白为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区抗体半合成库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”淘洗过程 ,获得抗原结合活性较强的HBsAg人源单链可变区抗体阳性克隆 ,并对其进行免疫检测及序列测定。 结果 筛选得到的ScFv片段编码基因为 789nt,编码的产物由 2 62个氨基酸残基组成 ,具有典型的轻链和重链可变区结构特点以及与HBsAg结合的特异性。结论 利用噬菌体抗体库技术 ,成功地获得了HBsAg人源单链可变区抗体的编码基因 。

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究(英文)

目的 探讨乙型肝炎病毒 (HBV )准种在慢性乙型肝炎患者中的存在状态。方法 以已知中国株HBV基因序列为依据 ,设计特异性聚合酶链反应 (PCR)引物 ,自 3例慢性乙型肝炎患者体内扩增HBV全S基因片段 ,克隆入 pGEMTeasy质粒 ,用限制性片段长度多态性(RFLP)法确定HBV的变异现象 ,DNA测序确定病毒的变异程度。结果 分别自 3例患者血清中克隆出 2 9、2 8和 8个阳性克隆 ,以EcoRI酶切患者 1和 2的RFLP结果提示各有 5种不同的长度带型 ,PCR产物XhoI酶切RFLP结果表现为高度保守 ,测序结果发现HBV体内毒株DNA序列高度一致 ,同一患者两株全S区序列测序结果表明DNA序列的同源性大于 97%。结论 慢性乙型肝炎患者体内有HBV准种共存 ,且呈现出一定的优势克隆现象 ,可能与患者预后有关。

大鼠肝再生增强因子假基因的克隆化与序列分析

目的 研究大鼠肝再生增强因子（ａｕｇｍｅｎｔｅｒ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＡＬＲ）在大鼠基因组中的存在方式。方法 以大鼠基因组ＤＮＡ为模板，根据ＡＬＲ ｃＤＮＡ序列设计引物，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物，连入 ｐＧＥＭ Ｔｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ后测序。结果 ＰＣＲ法扩增出两条产物，其一经测序发现为ＡＬＲ的假基因，预测氨基酸序列与ＡＬＲ的同源性为８８．８％。结论 作为肝细胞再生过程中重要的生长刺激因子，大鼠ＡＬＲ存在假基因，提示可能存在ＡＬＲ多基因家族。为研究ＡＬＲ分子的进化规律提供了依据。