牛冠状病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立牛冠状病毒(BCV)检测方法,利用构建的pET30a-N重组质粒高效表达了BCV重组N蛋白,western blot检测该重组蛋白具有很好的免疫活性。以纯化的蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为1.75μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶200,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶8000,建立了检测BCV抗体的间接ELISA方法。用该法对黑龙江一些地区采集到的256份牛血清样品进行检测,结果阳性率为65.23%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率达95.31%。本研究建立的间接ELISA方法为BCV的检测和区域流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法。

牛冠状病毒N基因的原核表达及初步应用

目的获得牛冠状病毒N基因的全长序列,实现N基因在大肠杆菌中的高效表达,并进行初步应用。方法根据已发表的牛冠状病毒Mebus株的序列设计引物,对BCV-DQ株进行RT-PCR扩增、克隆和测序;将该基因插入到原核表达载体pET-30a(+)上进行原核表达,SDS-PAGE和Western blot检测;用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,对部分临床样本进行检测。结果BCV-DQ株N基因全长1347bp,与GenBank已发表的6株BCV的N基因相比较,核苷酸同源性98.3%以上。构建的重组质粒pET-N能表达出一条大小约为60ku的蛋白,且能与鼠抗BCV血清发生特异性反应。用建立的ELISA方法对黑龙江不同地区送检的共256份牛血清样品进行检测,结果阳性率65.23%,与病毒中和试验的符合率达95.31%。结论BCV N基因保守性很高,并在原核表达系统中获得了高效表达,其表达产物具有良好的免疫反应原性。临床检测结果表明N蛋白可作为诊断抗原用于牛冠状病毒病的流行病学调查。

高等代数课程素质教育教学改革的几点认识

大学《高等代数》教育中倡导的素质教育 ,是把传授知识、培养能力、提高素质相结合。教学中要把培养学生的计算能力、逻辑思维能力、创新能力作为素质教育的途径。通过教学改革 ,做好心理调整 ,培养学生解决疑难问题的兴趣。应用电化教学手段 ,精讲多练 ,删繁就简 ,加强对学生分析问题、解决问题及创造性思维能力的培养。

谈数论中的同余及其应用

同余概念是数论中的一个重要组成部分 ,利用同余的定义、定理及一些性质 ,可以检验整数的整除性及整数的加法 ,整数的乘积运算结果等 ;利用费马定理 ,进行素数。

解析几何创建史

解析几何是一门划时代的数学,它彻底改变了数学的研究方法,将初等数学嬗变为高等数学,为数学科学搭建了赖以繁衍生息的大厦的框架。笛卡儿的《几何学》建立了平面坐标系,将平面上点和实数对(x,y)建立了一一对应关系,是代数与几何第一次完美结合,开创了数学学科的崭新时代。笛卡儿被公认为解析几何的创始人。

牛冠状病毒和轮状病毒的双重RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速诊断牛病毒性腹泻疾病的方法,利用本研究室分离鉴定的牛冠状病毒(BCV)和牛轮状病毒(BRV)毒株,根据GenBank中登录的BCV、BRV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增BCV、BRV的引物,经过条件优化,建立了检测BCV、BRV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为244bp和382bp。该方法检测BCV和BRV的敏感度分别为1个和100个TCID50/100μL。应用这一方法能从病料中检测出这2种病毒。结果表明该双重RT-PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于这2种病毒性疾病的快速诊断。

貉源细小病毒的分离鉴定

从大庆某貉养殖场采集病貉的病理病料，处理后接种于犬肾细胞（MDCK），分离到8株病毒。对分离毒株进行了中和试验、血凝试验、理化性质的鉴定试验，应用PCR方法扩增分离毒株VP2部分基因并进行序列分析。结果显示，病料接种MDcK细胞72h后产生了明显的细胞病变（CPE）；分离毒株可以被犬细小病毒阳性血清中和，中和效价为1：10^6—1：10^7；分离毒株对氯仿、乙醚不敏感，耐酸耐热，可以凝集猪红细胞，其凝集作用可被犬细小病毒阳性血清抑制；用PCR检测病毒的细胞培养液，可扩增出长531bp的片段，该片段的核苷酸序列与吉林分离的犬细小病毒株（EU310373）的同源性为99.6％。表明，分离的这8株病毒均为貉源细小病毒。

貉源犬瘟热病毒的分离鉴定

采集大庆某貉养殖场病貉的病料,处理后接种于非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离。对分离毒株进行了中和试验、血凝试验、理化性质的鉴定,并用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测感染细胞中的病毒核酸。病料接种Vero细胞72h后产生明显的细胞病变(CPE);病毒分离株可以被犬瘟热病毒阳性血清中和,中和效价为1∶25;分离株对氯仿、乙醚敏感,对酸和热抵抗力弱,可以凝集鸡红细胞,其凝集作用可被犬瘟热病毒阳性血清所抑制;RT-PCR检测病毒细胞培养液,扩增出的片段长287bp,与预期设计的长度相同,经测序发现与MS01株的同源性为99%。结果表明,分离的病毒株为犬瘟热病毒,命名为CDV-DQ株。

新城疫特异性转移因子的免疫作用研究

将新城疫特异性转移因子（Newcastle disease-specific transfer factor，ND-STF）1mL单独或与La Sota弱毒疫苗一起，分别口服和注射试验鸡，然后用MTT法检测各组鸡外周血淋巴细胞转化率；用La Sota疫苗免疫鸡，同时口服或注射0．1、0．5、1mL 3种不同剂量的ND-STF，然后检测血清中新城疫病毒HI抗体效价。在使用ND-STF后第5天，试验组鸡的淋巴细胞转化率达到高峰，刺激指数（stimulation index，SI）可达1．68-1．71，对照组的SI值为1．24～1．34，试验组与对照组差异显著（P〈0．05），各试验组之间差异不显著（P〉0．05）；鸡的HI抗体效价（log2 X）在免疫后第28天达到高峰，口服或注射ND-STF 3种不同剂量组HI抗体效价分别为10、9．25、10和6．3、9、8．3，使用ND-STF各组与未使用组相比较差异显著（P〈0．05），且口服的效果更好。表明ND-STF能够增强鸡的细胞免疫和体液免疫能力。

牛腺病毒7型PCR检测方法的建立

根据GenBank中牛腺病毒7型(BAdV-7)的蛋白酶基因序列,设计一对特异性的引物,扩增该序列中775 bp的片段,建立了BAdV-7的PCR检测方法。以Fukuroi株BAdV-7 DNA为模板进行特异性和敏感性试验,结果显示,该方法检测BAdV-7 DNA最小检测量为1 ng;与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛冠状病毒(BCV)、牛轮状病毒(BRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和鸡产蛋下降综合征病毒(EDSV)无交叉反应。方法为BAdV-7感染的临床诊断和流行病学调查奠定了基础。

评价天然气成熟度及运移的新方法

为了提高综合评价天然气藏的成熟度、聚集效率及运移分馏结果 ,更全面反映气藏性质 ,有针对性提出气藏勘探方案。AlainPrinzhofer提出的应用天然气C1 - 4 组份及同位素比值等 1 1项天然气地化参数与天然气藏上述各属性间的相关性 ,并用盖斯塔图表达了它们之间的关系 ,对某多层油田天然气样品作盖斯塔图 ,进行气藏成熟度、聚集效率及运移分馏分析 。

HPAM/柠檬酸铝胶态分散凝胶性能的影响因素

由 HPAM(部分水解聚丙烯酰胺 )、柠檬酸铝、硫脲、KCl在 4 5℃和 p H值为 7 0的条件下研制了一种胶态分散凝胶 (CDG)。试验中以转变压力作为评价参数 ,考察了聚合物类型和性质、聚合物 Al3+ 用量比、聚合物浓度以及 KCl浓度等因素对 CDG性能的影响。结果表明 ,只有 HPAM类型和性质影响形成CDG的能力 ,聚合物 Al3+用量比有一个最佳值 ,CDG形成速度随聚合物和 KCl浓度的提高而增加。

速度频率──岩性量版的制作及应用

在只有少量钻井且地层速度变化较大的地区，钻孔处的声波测井数据不能反映研究区内的速度变化规律，为此提出了一种新的速度岩性量版——速度频率岩性量版，经与由测井数据制作的速度岩性量版对比分析，认为速度岩性量版只能代表钻孔处或邻近地区的地层速度随深度变化规律。速度频率岩性量版能更好地反映整个研究区内地层速度随深度的变化。

防洪工程建设质量管理的控制措施分析

在水利工程建设中，防洪工程作为抵御洪水的主要保障，明确的说明了质量在工程建设中的重要性，在工程建设中不仅需要改善工程施工质量，还需要依据一定的建设性标准抓好质量工作，这样对于工程的开展以及保证工程按期完成都有着决定性的作用。

Megafix B型活性染料卷染应用初探

应用新型Megafix型活性染料,改善了卷染机染色织物的色差、深边疵;提高产品质量,降低染色成本。

MegafixB新型活性染料应用初探

新型染色型ＭｅｇａｆｉｘＢ活性染料的应用改善卷染织物的色差，深边疵，提高产品质量，降低染色综合成本有明显效果。