结核特异性转移因子研究概况

近20年来,由于流动人口增加,艾滋病迅速蔓延(艾滋病多伴发结核)、结核菌耐多药株的大量出现以及卡介苗对成人预防效果欠佳等原因,使全球乃至我国,结核病呈明显上升趋势.结核病已被列为全球危害最为严重的三大传染病(疟疾、结核、艾滋病)之一.我国已成为仅次于印度的结核大国.……

黄精多糖对哮喘患儿红细胞免疫功能影响的体外实验研究

目的 观察黄精多糖 (PSP)对哮喘患儿红细胞免疫功能的影响及其意义。方法 采用花环试验法对哮喘患儿 (包括PSP组和生理盐水组 )及健康儿童进行红细胞C3b受体花环率及免疫复合物 (IC)花环率检测。结果 ①哮喘组红细胞C3b受体花环率明显低于正常对照组 (t =6 .32 ,P <0 .0 1) ,IC花环率明显高于正常对照组 (t =5 .89,P <0 .0 1) ;②体外试验PSP组哮喘患儿红细胞C3b受体花环率较生理盐水组明显升高 (t =6 .33,P <0 .0 1) ,而IC花环率两组差异无显著性 (t =1.38,P >0 .0 5 ) ;③PSP在一定浓度范围内均可显著增加哮喘患儿红细胞C3b受体花环率且呈剂量依赖关系。结论 哮喘患儿红细胞免疫功能明显低下 ,PSP可增强哮喘患儿的红细胞免疫功能 。

当归多糖对放射损伤小鼠细胞免疫的调节作用

目的 :了解当归多糖 (AngelicaPolysaccharide ,AP)的药用价值。方法 :将小鼠随机分为正常对照组 ,照射对照组 ,当归多糖治疗组 ,检测 3组的红细胞C3b受体花环率 (C3bR % )、免疫复合物花环率 (ICR % )和胸腺ConA诱导的T淋巴细胞增殖反应。结果 :照射对照组红细胞C3bR %、ICR %和胸腺T淋巴细胞增殖反应明显低于正常对照组 ,而当归多糖治疗组的红细胞C3bR %、ICR %和胸腺T淋巴细胞增殖反应显著高于照射对照组 (P <0 .0 1) ,有统计学意义。结论 :当归多糖能显著促进放射损伤小鼠的细胞免疫功能。

球形与螺旋形幽门螺杆菌基因表达差异的研究

目的 :从基因转录水平了解球形幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)基因表达的变化。 方法 :幽门螺杆菌标准株NCTC 116 37和 2株临床分离株 ,经抗生素—灭滴灵诱导球变。提取等菌量螺旋形和球形Hp的RNA ,RT PCR扩增Hp 2 5种基因 ,这些基因包括毒力基因 (kat、aphA、rdxA、frxA、cysS、ureB、glmM、cagA、vacA、fldA、iceA1、hpaA、fliD、napA、oipA、alpAB、babB、hopZ) ;看家基因 (scoB、atpD、glnA、recA)和功能不明的外膜蛋白基因 (hopW、hopX)。扩增产物经分子定量成像系统进行扫描定量。 结果和结论 :等菌量的球形HpRNA量比螺旋形Hp减少。NCTC 116 37、F4 4和F4 9菌株的螺旋菌分别有 2 5、2 0、19个基因RT PCR阳性 ,对应的球形菌相应的基因RT PCR也为阳性。定量分析结果表明 :被检测的基因在球形菌中的表达均比螺旋菌降低。提示球形菌致病性的降低与基因的低表达有关。 3株球形菌不同基因表达的变化并不完全一致 ,表达量变化较小且各菌间较一致的是glmM、oipA、glnA ;表达量变化较大且菌间较一致的基因是 :napA、sodB、recA、fliD。

当归多糖增强放射损伤小鼠胸腺细胞增殖及红细胞C3b受体粘附功能的实验研究

目的 进一步探讨当归多糖 (Angelicapolysaccharide,AP)的药用价值。 方法 检测正常对照组、放射对照组及放射 +当归多糖治疗组 3组的刀豆蛋白A(ConA)诱导的胸腺细胞增殖反应和红细胞C3b受体花环率。结果 放射对照组胸腺细胞OD值和红细胞C3b受体花环率 [(0 .2 4± 0 .0 1) ,(16 .46± 0 .76 ) % ]明显低于正常对照组 [(0 .35± 0 .0 1) ,(2 2 .30± 1.2 6 ) % ],而放射 +当归多糖治疗组的胸腺细胞OD值和红细胞C3b受体花环率 [(0 .31± 0 .0 1) ,(2 1.0 7± 1.2 2 % ) ]显著高于放射对照组 [(0 .2 4± 0 .0 1) ,(16 .46± 0 .76 ) % ],P <0 .0 1,有统计学意义。结论 当归多糖能明显增强放射损伤小鼠的胸腺细胞增殖和红细胞C3b受体免疫粘附功能。

当归多糖对放射损伤小鼠红细胞免疫粘附功能和外周血象的影响

目的 :进一步了解当归多糖的药用价值。方法 :本实验将小鼠分为正常对照组、照射对照组、当归多糖治疗组 ,检测三组的红细胞 C3b受体花环率和外周血象。结果 :照射对照组红细胞 C3b受体花环率和外周血白细胞、血小板数明显低于正常对照组 ,而当归多糖治疗组的红细胞 C3b受体花环率和外周血白细胞、血小板数显著高于照射对照组 (P<0 .0 1) ,有统计学意义。结论

六月雪的抑菌作用

目的 :观察六月雪的抑菌作用及其急性毒性。方法 :用平板测定法检测六月雪的抑菌作用 ,并测定其最低抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度 (MBC)。急性毒性实验用小鼠以口服给药测定最大耐受量 (MTD)。结果 :六月雪对枯草杆菌、大肠杆菌均有较强的抑制作用 ,最低抑菌浓度均为 1.2 5 % ,最低杀菌浓度分别为 2 .5 % ,1.2 5 %。急性毒性实验表明该物质的最大耐受量大于 4 0g/kg。结论 :六月雪有明显的抑菌作用 。

IFN-γ与TNF联合治疗结核菌感染小鼠疗效及机理的研究

目的研究 IFN- γ和 TNF对结核分枝杆菌感染小鼠的疗效及作用机制。方法小鼠感染结核分枝杆菌后第 5d给予 IFN-γ和 /或 TNF治疗 ,观察治疗后半数死亡时间、一定时间内的死亡率、脾脏内活菌数 ,检测脾细胞分泌 IFN-γ和 IL -4水平 (EL ISA法 )及 MΦ 产生 NO水平 (用 Griess试剂 )。结果与单纯攻毒组比较 ,联用 IFN- γ和 TNF组感染小鼠半数死亡时间明显延长、35 d内的死亡率从 10 0 %降低到 2 0 %、脾脏内活菌数显著减少 ,脾细胞 IFN- γ分泌水平明显升高 ,IL- 4分泌水平显著降低 ,MΦ产生 NO水平明显增加。结论 IFN -γ和 TNF联合诱导 MΦ产生 NO,促进 TH1 细胞反应 ,抑制 TH2 细胞反应 ,改变了 TH1 / TH2 平衡 。

结核杆菌HSP65 DNA疫苗的初步研究

目的构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65 000 u基因为基础的核酸 疫苗。方法采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因中，扩增出HSP65的编码基因，经限制性核酸内切酶消化后， 插入真核表达载体pcDNA3.1(-) 的相应酶切位点，并将此重组质粒免疫动物。结果 重组质粒的插入基因经序列测定证实为结核分枝杆菌HSP65。DNA免疫小鼠体内产 生特异性抗体。结论以HSP65编码基因为基础的真核表达载体构建成功,并能引起特异性动物免疫反应，为进一步研究其在结核病防治中的作用 奠定了基础。

球形幽门螺杆菌致小鼠感染

目的 证明球形幽门螺杆菌体内致病性。方法 用抗生素和水诱导幽门螺杆菌 (Hp)球变 ,螺旋形和球形Hp分别经胃灌注接种BALB/c小鼠 ,实验组小鼠 (各 16只 )接种Hp菌液 0 .4ml/只 ( 10 9/ml) ,接种 4次 ,2w完成 ,对照组 ( 10只 )接种生理盐水。距最后一次接种后 3和 4w分别处死小鼠各半。取胃粘膜组织作细菌学检测 (包括胃粘膜快速尿素酶试验 ,细菌培养鉴定 ,电镜观察 )和组织学检测。结果 螺旋菌、抗生素诱变的球形菌、水中球形Hp这 3个实验组的胃粘膜组织快速尿素酶试验阳性率分别为 93 .8% ( 15 /16)、87.5 % ( 14 /16)、5 0 % ( 8/16) ,由此反映的细菌定居量评分为 1.75、1 13、0 .5 6,细菌培养阳性率分别为 87.5 % ( 14 /16)、75 .0 % ( 12 /16)、68.8% ( 11/16) ,对照组阴性。Hp感染 3w和 4w的实验结果无差异。电镜下可见 3个实验组均有弯曲形、杆状和球形Hp粘附于胃粘膜上。组织学检测发现感染的小鼠胃粘膜呈正常、轻度或重度糜烂、溃疡等不同的表现 ,有炎症细胞浸润。水中球形Hp感染引起的胃粘膜损伤较轻。 结论 球形Hp可致胃炎或溃疡。

ConA增强MΦ吞噬功能、杀瘤效应及产生效应分子的研究

目的了解 Con A在体内对小鼠腹腔 MΦ 吞噬功能、细胞毒作用及产生 NO、TNF- α、IL- 1的影响。方法分别测MΦ 吞噬鸡红细胞的能力 ,以 S180为靶细胞测 MΦ 依赖的细胞毒作用。以 griess试剂、L92 9细胞 MTT检测法、胸腺细胞增殖法测 MΦ 产生 NO、TNF- α、IL- 1的水平。结果 Con A活化的腹腔 MΦ 吞噬鸡红细胞的能力以及对 S180细胞的细胞毒作用显著强于 PBS对照组 (P<0 .0 1) ,并产生较高水平的 NO、TNF- α、IL- 1。结论 Con A能活化 MΦ 产生 NO等效应分子 ,发挥对

ConA对巨噬细胞活性的影响

目的 探讨ＣｏｎＡ对巨噬细胞（Ｍφ）活性的影响。方法以不同剂量的ＣｏｎＡ腹腔注射处理小鼠，４８ ｈ后收集腹腔Ｍφ做体外培养。分别以扫描及透射电镜观察Ｍφ的形态变化。分别以ＭＴＴ比色法和胸腺细胞增殖试验检测Ｍφ分泌ＴＮＦ－α和ＩＬ－１β的水平，并用免疫细胞化学染色法检测这两种蛋白的表达强度。结果ＣｏｎＡ作用后的Ｍφ，表现为体积增大、指状突起增加和胞浆内线粒体等细胞器增加。ＣｏｎＡ活化的腹腔Ｍφ分泌ＴＮＦ－α和ＩＬ－１β的水平增加，其在Ｍφ胞浆内的表达增强。结论ＣｏｎＡ具有激活Ｍφ增强其产生ＴＮＦ－α和ＩＬ－１β的作用。

TNBS诱发大鼠结肠炎P选择素的表达及其与TNF-α、IL-8的相关性研究

目的 :研究P 选择素在三硝基苯磺酸 (TNBS)诱发的大鼠结肠炎组织中的表达、循环血中血小板膜表面含量的变化及其与组织TNF α和血清IL 8表达的相关性 ,探讨其在结肠炎发生发展中的作用及血栓并发症形成的可能机制。方法 :用TNBS 乙醇灌肠制作大鼠结肠炎模型 ,分别在制模后 2 4小时、1周和 2周取心脏血 ,放射免疫法测定P 选择素的含量 ,ELISA夹心法检测IL 8的含量 ,免疫组化法分析P 选择素及TNFα在病变部位的表达。结果 :与正常对照组比较 ,P 选择素在结肠组织炎症的各个时间点均有表达 ,阳性表达率大于 5 0 %。血小板膜表面P 选择素在灌肠后 2 4小时未见升高 ,第 1、2周明显升高(P <0 0 1)。血清IL 8含量及TNFα表达曲线变化情况相似 ,在 2 4小时升高最为明显 ,随着病程延长而下降。P 选择素与IL 8在同期炎症中呈正相关 ,而与TNF α无线性相关。结论 :P 选择素在结肠炎症早期介导局部的炎症反应 ,晚期仍然是维持炎症、血栓形成的重要因素之一。P 选择素含量升高和表达增强与IL 8呈正相关 ,与TNF α无线性相关。

T_(H1)类细胞因子对结核病患者产生单核细胞趋化蛋白1的调节作用

目的 探讨TH1 类细胞因子干扰素γ(IFN γ)、白细胞介素 2 (IL 2 )对结核病患者外周血单个核细胞 (PBMC)分泌MCP 1的影响。方法 将 1 2例结核患者和 8例健康人PBMCs在LPS诱导前 ,用IL 2、IFN γ进行预刺激 1h ,采用ELISA法检测各组培养上清液中MCP 1的水平。结果 与单纯用LPS组相比 ,加入IL 2、IFN γ能明显上调结核患者及健康人PBMC的MCP 1分泌 ,且呈现浓度依赖性 ,两者联用具有协同效应。结论 TH1 类细胞因子IL 2、IFN γ通过上调MCP 1 ,使单核细胞、淋巴细胞向炎症部位趋化 ,参与组织炎症及肉芽肿形成 。

刀豆蛋白A活化小鼠巨噬细胞机理的初步探讨

探讨了刀豆蛋白A(ConA)活化巨噬细胞 (M)的机理。以ConA 5 0 0 μg腹腔注入预处理小鼠 4 8h ,并以PBS作对照 ,免疫组织化学染色法检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达 ;分别以原位杂交及流式细胞仪检测NF κBP6 5mRNA与NF κBRelA蛋白的表达 ;RT PCR了解TNF α、IL 1βmRNA的表达情况。ConA刺激后 ,iNOS在胞浆中表达增多 ;ConA处理组NF κBP6 5mRNA及NF κBRelA蛋白的表达均增加 ,RT PCR方法测到TNF α、IL 1βmRNA的表达水平也显著提高 (P <0 0 1)。ConA作用于M时 ,可能通过活化NF κB使iNOS、TNF α及IL 1β表达增强 。

结核分枝杆菌pcHSP65真核表达载体的构建及序列测定

目的 :构建以结核分枝杆菌热休克蛋白 6 5kU基因为基础的核酸疫苗。方法 :采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因中 ,扩增出HSP6 5的编码基因 ,经限制性核酸内切酶消化后 ,插入真核表达载体pcDNA3.1( )的相应酶切位点 ,并将此重组质粒进行序列测定。结果 :重组质粒的插入基因经序列测定证实为结核分枝杆菌HSP6 5。结论 :以HSP6 5编码基因为基础的真核表达载体构建成功 。

结核杆菌pcHSP65真核表达载体的构建及其DNA免疫实验

目的 :构建以结核分枝杆菌热休克蛋白 65kD基因为基础的核酸疫苗。方法 :采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因中 ,扩增出HSP65的编码基因 ,经限制性核酸内切酶消化后 ,插入真核表达载体pcDNA3 .1 (- )的相应酶切位点 ,并将此重组质粒免疫动物。结果 :重组质粒的插入基因经序列测定证实为结核分枝杆菌HSP65。DNA免疫小鼠体内产生特异性抗体 ,能抵抗结核杆菌的感染。结论 :以HSP65编码基因为基础的真核表达载体构建成功 ,并能引起特异性动物免疫反应 。

当归多糖促进瘤苗抗瘤作用初探

用当归多糖和／或瘤苗免疫治疗荷瘤小鼠，结果，二者联用时，肿瘤生长明显抑制，荷瘤鼠腹腔巨噬细胞数目、吞噬功能及脾细胞ＮＫ活性显著增加。