EMAP-Ⅱ通过LKB1/AMPK/mTOR信号通路增加BTB的通透性

目的研究内皮-单核细胞激活多肽(EMAP-Ⅱ)对体外血肿瘤屏障(BTB)通透性的影响及可能机制。方法建立体外BTB模型,EMAP-Ⅱ处理后,millipore电阻测量系统检测跨内皮细胞阻抗(TEER)值,采用Western blot方法检测p LKB1/LKB1、p AMPK/MAPK和p-m TORC1/m TORC1的蛋白表达水平;分别应用LKB1抑制剂radicicol、AMPK抑制剂compound C和m TORC1激活剂IGF1进行预处理后再给予EMAPⅡ,检测体外BTB模型的TEER值,Western blot方法检测紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的蛋白表达水平。结果与EMAP-Ⅱ0 h组相比,EMAP-Ⅱ可明显降低体外BTB模型的TEER值,增加p-LKB1/LKB1和p-AMPK/AMPK的表达水平,降低p-m TORC1/m TORC1的表达水平,以上指标在EMAP-Ⅱ作用1 h时效果最明显;radicicol、compound C和IGF1预处理能够部分阻断EMAP-Ⅱ的作用,使体外BTB模型的TEER值及紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的表达水平明显增加。结论 EMAP-Ⅱ能明显增加体外BTB模型通透性,其机制可能与激活LKB1/AMPK/m TOR信号通路相关。

敲减SNORA31抑制胶质瘤干细胞血管生成拟态的作用机制

目的探讨SNORA31在胶质瘤干细胞(GSCs)中的表达以及抑制GSCs血管生成拟态的作用机制。方法对中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中的患者预后数据与SNORA31表达量进行生存分析。采用qRT-PCR检测GSCs中SNORA31表达。敲减SNORA31后Western blotting检测促红细胞生成素肝细胞受体A2(EphA2)表达,细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和磷酸肌醇3激酶(PI3K)表达与磷酸化水平;CCK8和Transwell检测GSCs增殖、迁移和侵袭的变化;基质胶三维管形成实验检测血管生成拟态能力的变化。结果与亲本细胞比较,SNORA31在GSCs中的表达显著增高(P<0.05)。与相应的阴性对照组比较,敲减SNORA31显著降低EphA2的表达水平和p-ERK1/2/ERK1/2、p-PI3K/PI3K比值(均P<0.05),进而抑制GSCs的增殖、迁移、侵袭和血管生成拟态的形成。结论敲减SNORA31降低了EphA2表达水平、抑制了ERK1/2和PI3K磷酸化水平,进而抑制GSCs的增殖、迁移、侵袭和血管生成拟态的形成。

信号分子PKC调控内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性机制的研究

目的探索信号分子蛋白激酶C（PKC）参与内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ（EMAP-Ⅱ）增强血肿瘤屏障（BTB）通透性过程的相关机制。方法采集出生3～5d的Wistar胎鼠大脑皮质，应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后，接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞（BMEC）原代培养；将BMEC与C6脑胶质瘤细胞共培养，构建体外BTB模型；共培养后的BMEC随机分成3组：对照组、EMAP-Ⅱ组和H7＋EMAP-Ⅱ组，测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量，评估各组BTB通透性的变化，Westernblot法和免疫荧光法检测紧密连接相关蛋白claudin-5在各组BMEC上的表达水平变化；共培养后的BMEC被随机分成5组：EMAP-Ⅱ0，0．5，1，2，4h组，Westernblot法检测EMAP-Ⅱ作用不同时间点时BMEC膜上PKC各亚型的蛋白表达变化。结果与对照组比较，EMAP-Ⅱ组BTB的通透性显著增高（P=0．002），BMEC上claudin-5的表达水平显著降低（P=0．005），EMAP-Ⅱ的上述作用受到PKC抑制剂H7预处理的显著抑制（P=0．036）；EMAP-Ⅱ作用0．5h时，BMEC膜上PKC-α和PKC-β的蛋白表达水平显著增加，1h时达到峰值，其后表达水平逐渐下降，4h时恢复至未用药水平。BMEC膜上PKC-ζ的蛋白表达水平于O．5h时显著增加，其后表达水平逐渐下降，2h时恢复至未用药水平。结论信号分子PKC参与EMAP-Ⅱ增强BTB通透性的过程，其机制可能与BMEC膜上PKC-α、-β和-ζ的表达水平上调有关。

RhoA在缓激肽选择性开放血肿瘤屏障中的作用

目的探讨RhoA是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障。方法应用RhoA的特异性抑制剂C3胞外酶(C3 ex-oenzyme)预处理体外血肿瘤屏障模型的大鼠脑微血管内皮细胞后,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障通透性的改变;Western blot法检测紧密连接相关蛋白claudin-5可溶性片段向不溶性片段的转变;免疫荧光法和细胞荧光标记法观察体外血肿瘤屏障模型的大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白claudin-5和丝状肌动蛋白结构和分布的改变。结果 C3 exoenzyme抑制缓激肽诱导TEER值的降低,HRP流量升高;C3 ex-oenzyme抑制claudin-5可溶性片段向不溶性片段的转变;C3exoenzyme抑制claudin-5由细胞膜向细胞质重新分布,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,分布于细胞边缘的F-actin明显增加,应力纤维形成明显减少。结论 RhoA介导缓激肽开放血肿瘤屏障。

磷酸化caveolin在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ开放血肿瘤屏障中的表达水平变化

目的:检测质膜微囊结构蛋白caveolin-1和caveolin-2在低剂量内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(EMAP-Ⅱ)开放血肿瘤屏障(BTB)过程中的磷酸化水平变化。方法:荷瘤Wistar大鼠被随机分成4组(每组12只):EMAP-Ⅱ0h、1h、2h和4h组。采用伊文思蓝渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况;Western blot和免疫荧光法检测大鼠脑胶质瘤组织毛细血管上磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平变化。结果:EMAP-Ⅱ作用1h时,BTB的通透性显著增强,随后逐渐降低,4h时恢复正常;EMAP-Ⅱ作用1h时,脑胶质瘤组织毛细血管上磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平均显著增高,随后逐渐降低,4h时恢复正常。结论:EMAP-Ⅱ可能通过caveolae介导的跨细胞途径来增强BTB的通透性,其机制与磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平上调有关。

内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性的信号机制

目的探索内皮一单核细胞激活多肽-Ⅱ（endothelial monocyte activating polypeptide-II，EMAP-II）增强血肿瘤屏障（blood—tumor barrier，BTB）通透性的相关信号机制。方法采集出生3—5d的Wistar胎鼠的大脑皮质，应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后，接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells，BMECs）原代培养；将BMECs与C6脑胶质瘤细胞共培养，构建体外BTB模型；共培养后的BMEC被随机分成5组（每组6例）：对照组、EMAP-Ⅱ组、H7＋EMAP—11组、C3 exoenzyme＋EMAP-II组和C3exoenzyme＋H7＋EMAP—II组。测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量评估各组BTB通透性变化情况；Western blot法检测BMECs上紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达水平变化；免疫荧光法检测OC-cludin和ZO-1在BMECs上的分布与表达。Western blot法检测BMECs上肌球蛋白轻链（myosin light chain，MLC）和磷酸化肌球蛋白轻链（phosphomyosin light chain，pMLC）的表达水平变化。结果与对照组相比较，EMAP-II组BTB的通透性明显增高，BMECs上occludin和ZO-1的表达水平明显降低，pMLC的表达水平明显增高；EMAP—II的上述作用受到蛋白激酶c（protein kinaseC，PKC）抑制剂H7或（和）RhoA抑制剂C3exoenzyme预处理的明显抑制。结论信号分子PKC和RhoA在EMAP—II增强BTB通透性过程中发挥着重要的作用，信号通路PKC—pMLC和RhoA—pMLC参与调控该过程。

C3胞外酶抑制缓激肽诱导的血肿瘤屏障通透性的增加

目的研究Ras基因家族成员A(RhoA)的特异性抑制剂C3胞外酶(exoenzyme)对缓激肽诱导的血肿瘤屏障通透性的作用。方法应用C3 exoenzyme预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,测量跨内皮阻抗值(TEER)、辣根过氧化物酶(HRP)流量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变;应用Western blot检测紧密连接相关蛋白(ZO-1)的表达;应用免疫荧光法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白(F-actin)结构和分布的改变。结果 C3 exoenzyme显著抑制缓激肽诱导TEER值的降低、HRP流量的升高及ZO-1的表达,抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,分布于细胞边缘的F-actin明显增加,应力纤维形成明显减少。结论 RhoA能够介导缓激肽开放血肿瘤屏障。

非编码RNA的特点和在肿瘤中的作用

非编码RNA是不能编码蛋白质的RNA分子。人类基因组测序证明人类基因组中大部分为不编码蛋白质的基因(编码蛋白质的DNA仅占整个基因组的3%-5%),由此转录而来的RNA远远多于编码蛋白质的mRNA。非编码RNA广泛参与生命现象的各个环节,对编码RNA和蛋白进行复杂的生物学调节,非编码RNA在多种疾病的致病通路中发挥重要作用。本文详细介绍了非编码RNA的生物学特点和功能,并分析了其在肿瘤中的作用机制、研究进展及治疗前景。

siRNA-Tie1下调紧密连接相关蛋白claudin-5、occludin和ZO-1增加血肿瘤屏障通透性

目的研究Tie1 AS和Tie1表达变化对血肿瘤屏障通透性的影响和相关机制。方法建立体外血脑屏障和血肿瘤屏障模型,Real-time PCR检测h CMEC/D3细胞中Tie1 AS和Tie1的表达水平。转染p IRES2-EGFPTie1 AS表达载体上调体外血肿瘤屏障模型h CMEC/D3细胞中Tie1 AS的表达,Western blot检测Tie1的表达变化。将si RNA-Tie1转染人h CMEC/D3细胞并建立体外血肿瘤屏障模型,跨内皮电阻测量系统分析血肿瘤屏障通透性变化;Western blot和免疫荧光法检测h CMEC/D3细胞中紧密连接相关蛋白claudin-5、occludin和ZO-1的表达和分布变化。结果和正常脑微血管内皮细胞相比,体外血肿瘤屏障模型h CMEC/D3细胞中Tie1的表达显著增加,而Tie1 AS的表达显著降低。上调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Tie1 AS的表达水平,能够显著降低Tie1的表达。下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Tie1的表达后屏障通透性显著下降,伴有claudin-5、occludin和ZO-1的表达下调以及在细胞膜上呈不连续分布。结论体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中低表达的Tie1 AS能够负性调控Tie1的表达,进而通过调节紧密连接相关蛋白的表达和分布影响屏障的通透性。

PIWI/piRNA的生物学功能及在肿瘤中的作用

PIWI-interacting RNA(piRNA)是近年来新发现的一类小RNA分子,属于非编码RNA家族中的一员,通过结合argonaute蛋白的PIWI亚家族发挥作用。piRNA与生殖干细胞干性的维持、配子形成、胚胎发育等生殖事件和多种疾病的发生发展密切相关。PIWI/piRNA途径参与调控肿瘤的增殖、转移和侵袭,并与预后相关。本文着重介绍PIWI/piRNA的生物学功能以及在肿瘤中的研究进展。

WWC3蛋白在胶质瘤干细胞中的表达及作用

目的探讨WWC3在胶质瘤干细胞(GSCs)中的表达,以及通过调节Hippo通路调控GSCs增殖、迁移和侵袭的作用。方法 Western blot检测Hippo通路相关分子的表达。过表达WWC3后,检测MST1、LATS1和YAP的磷酸化与表达;免疫荧光检测YAP分布变化;CCK8和Transwell检测GSCs增殖、迁移和侵袭的变化。结果 WWC3、MST1和LATS1在GSCs中的表达均显著降低,而YAP的表达显著升高。过表达WWC3显著增加p-MST1/MST1、p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP的表达水平,抑制细胞核中YAP表达,抑制GSCs的增殖、迁移和侵袭。结论过表达WWC3通过降低Hippo通路活性抑制GSCs的增殖、迁移和侵袭。

脑肿瘤药物转运的研究进展

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤。血肿瘤屏障(blood-tumorbarrier,BTB)的存在极大地限制了抗肿瘤药物进入脑肿瘤组织,降低了脑肿瘤的治疗效果,因此有效开放BTB成为提高脑胶质瘤化疗疗效的重要策略。近年来,越来越多的研究证实了多种转运药物到达肿瘤组织的方法,如脑室内给药、对流增强转运法、干扰BTB法以及选择性调控BTB的通透性等。其中,通过选择性调控BTB通透性,转运药物进入脑肿瘤组织具有效果好、副作用小的优点,是恶性脑肿瘤化疗中极具前景的治疗方法。本文概述了转运药物进入脑肿瘤组织的研究进展。

地塞米松预处理对氧糖剥夺大鼠血脑屏障通透性的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)条件下大鼠血脑屏障通透性的影响。方法提取纯化大鼠脑微血管内皮细胞,建立血脑屏障OGD模型。在OGD不同时间点(0、30、60 min),以及DEX预处理OGD 60min时,应用辣根过氧化物酶渗漏实验分析血脑屏障的通透性;应用RT-PCR和western blot法分析大鼠脑微血管内皮细胞的紧密连接相关蛋白claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化;同时应用免疫荧光方法观察细胞膜上claudin-5的变化。结果与对照组相比,OGD 30、60min,辣根过氧化物酶流量均显著升高;与OGD 60min相比,DEX预处理显著降低了辣根过氧化物酶流量。与对照组相比,OGD30、60min,claudin-5的mRNA和蛋白表达水平均显著降低;与OGD 60min相比,DEX预处理显著增加了claudin-5的mRNA和蛋白表达。免疫荧光观察claudin-5在细胞膜上的表达,与对照组相比,OGD 60min时claudin-5的表达明显减少,DEX预处理后显著增加了claudin-5的表达。结论 DEX预处理降低了OGD条件下的血脑屏障通透性,其机制之一是DEX增加紧密连接相关蛋白claudin-5的表达。

MicroRNA和胶质瘤干细胞

MicroRNA作为近年来发现的调控细胞生长发育的分子,不仅参与生理状态的调控,也参与多种恶性肿瘤的发生发展过程。肿瘤干细胞因其自我更新、多向分化潜能、成瘤性等特点,在肿瘤的发生发展中起着十分重要的作用。本文主要从microRNA的发现与生物学特性、胶质瘤干细胞的发现与生物学标志物以及microRNA对胶质瘤干细胞的作用等方面进行阐述。随着microRNA和胶质瘤干细胞研究的不断进展,将逐渐深入揭示胶质瘤干细胞的生物学特征,为进一步从干细胞角度研究胶质瘤的发病机制及靶向治疗打下基础。

纳米技术在中枢神经系统中的作用

纳米技术是指在0.1-100nm量度范围内对物质结构和制造技术进行研究。纳米粒子能够进入细胞并与细胞及其组织发生作用,从而在分子水平上产生生物效应。由于纳米粒子可以和有机高分子多肽、无机盐等结合通过血脑屏障,已经在中枢神经系统药物转运、中枢神经系统疾病的诊断和治疗中发挥重要作用。本文从纳米粒子与血脑屏障的关系、纳米粒子在神经系统的保护、神经系统的再生中的作用等几方面阐述纳米技术在中枢神经系统应用中的现状与前景。

非编码RNA在人脑胶质瘤中的研究进展

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是近年发现的一类新型RNA,其共同特点是它们都能经基因组转录产生,但不产生蛋白产物,通过RNA水平调控执行多种生物学功能。哺乳动物基因组序列中绝大多数为ncRNA,其中,长链非编码RNA(long non-coding RNA,ln RNA)在人类脑部大量表达,参与胶质瘤染色质重构、介导修饰、转录调控、选择性剪切等生物过程。微小RNA(microRNA,miRNA)在脑部也被大量发现,在胶质瘤中部分miRNA表达异常升高,调控癌症相关基因的表达或参与调控肿瘤形成机制和调控通路。另外,环状RNA(circular RNA,circRNA)和与PIWI蛋白家族结合的RNA(Piwi-interacting RNA,piRNA)在胶质瘤发生发展中也可能发挥作用。

胶质瘤干细胞——胶质瘤治疗新靶点

胶质瘤是中枢神经系统发病率最高的恶性肿瘤。胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSC)的研究突破对其治疗有重要意义。GSC可能来源胶质细胞失分化或神经干细胞(neural stem cell,NSC)肿瘤性转化,有独特的生物学特性,GSC细胞内的信号通路异常与之形成有关。GSC内原癌功能miRNA高表达.抑癌功能miRNA低表达。GSC存在于血管性、缺氧性、免疫性三种微环境中并与其相互作用。未来,结合靶向GSC及其微环境可改善治疗效果,但提高选择性很关键。

医学本科毕业生基层就业意愿调查及学习和心理相关影响因素分析

目的了解医学本科毕业生的学习及心理状态与基层就业意愿的相关关系。方法 2017年通过横断面调查法对某医科大学毕业年级临床医学生821人进行基层就业意愿、学习及心理状态以及就业计划调查。学习及心理状态调查使用自设问卷。使用SPSS 21.0对数据进行分析,采用独立样本t检验、方差分析和多重线性回归分析检验医学生基层就业意愿的相关影响因素。结果本研究发放问卷810份,753份问卷纳入分析。医学生基层就业意愿为(4.61±2.24)分(最高分为10分)。实验班学生的基层就业意愿更低(高考入学成绩更高的学生分组)(P<0.05),学习压力更大的学生以及医患矛盾压力更大的学生更加不愿意前往基层就业(P<0.05)。就业计划方面,重视专业对口的毕业生更愿意前往基层医疗单位,而重视薪酬的毕业生较少愿意前往基层医疗单位(P<0.05)。结论提高前往基层医疗单位的激励政策、积极对医学生进行心理压力疏导和增加医患沟通培养,对提高医学生基层就业意愿有积极的影响。

卡那霉素对小鼠耳蜗内毛细胞带状突触数量的影响

目的通过研究卡那霉素对小鼠耳蜗内毛细胞带状突触数量的影响,探讨卡那霉素耳毒性的发病机制。方法实验组昆明小鼠分为6组,每组10只,每日丁胺卡那霉素(400mg/kg)进行肌肉注射,并于第0d、第3d、第7d、第10d、第14d、和第21d取耳蜗基底膜顶回作为标本。对照组(每组10只)采用等体积生理盐水肌肉注射。使用免疫荧光双标法对耳蜗内毛细胞带状突触前膜RIBEYE蛋白和突触后膜GluR2&3蛋白进行标记,激光共聚焦显微镜对耳蜗基底膜顶回进行光学连续切片,运用3dMax8.0软件对带状突触进行三维建模及重构,并观察带状突触形态变化和计算其数量改变。结果所有小鼠耳蜗内毛细胞轮廓完整,但内毛细胞带状突触数量存在差异。与生理盐水对照组相比,在卡那霉素注射初期带状突触数量未见明显变化,给药第7d时内毛细胞带状突触数量显著增加,第21d显著下降。结论卡那霉素连续作用21d,耳蜗内毛细胞带状突触数量呈先增高后降低的趋势。

儿童脑积水发病机制的研究进展

脑积水是一种脑脊液生理代谢过程紊乱所致的常见疾病,其损伤机制为脑室系统异常扩张并对周围脑组织造成损害.儿童脑积水随发病年龄和发病原因的不同可表现出个体化的临床症状,同时此类疾病容易造成儿童脑发育迟滞,因此了解疾病的发生机制及病因、早期诊断以提出针对性的治疗策略尤为重要.该文主要对儿童脑积水病理生理、病因及特征性临床表现的研究进行综述.