长链非编码RNA应激诱导长链非编码转录本5对肺癌细胞厄洛替尼敏感性的影响及其机制

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)应激诱导长链非编码转录本5(long stressinduced noncoding transcript 5,LSINCT5)与肺癌细胞厄洛替尼抵抗的关系及潜在机制。方法:收集并培养人肺癌细胞系A549,H520,H358,H1299,SPCA1和PC9。将表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变型肺癌细胞系PC9分为对照组、抵抗组、干扰Ⅰ组和Ⅱ组。对照组采用二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)处理10周后,再用慢病毒转染无意义对照靶向序列表达载体;抵抗组采用梯度浓度的厄洛替尼(浓度分别为0.1,0.2,0.4,0.8和1.6μmol/L)分别处理2周后,再用慢病毒转染无意义对照靶向序列表达载体;干扰I组和II组采用梯度浓度的厄洛替尼(浓度分别为0.1,0.2,0.4,0.8和1.6μmol/L)分别处理2周后,再用慢病毒转染shRNA靶向LSINCT5表达载体1号和2号。细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞厄洛替尼半抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50);real-time PCR检测细胞中LSINCT5,磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt) mRNA表达;蛋白质印迹法检测细胞PI3K,Akt和磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白表达;RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RNA-IP)实验检测LSINCT5与Akt和IgG结合作用的差异。结果:PC9细胞中LSINCT5表达显著高于其他人肺癌细胞系(均P<0.05);与对照组相比,抵抗组厄洛替尼IC50,LSINCT5,PI3K和Akt mRNA和蛋白表达均显著升高(均P<0.05),干扰Ⅰ组和Ⅱ组厄洛替尼IC50,LSINCT5,Akt和p-Akt蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。与IgG结合相比,LSINCT5和Akt的结合显著增多(P<0.05)。结论:LSINCT5在厄洛替尼抵抗细胞中呈高表达,干扰其表达可抑制Akt的表达及活性,并能促进细胞对厄洛替尼的敏感性。

肺腺癌恶性胸水中肿瘤浸润T淋巴细胞成分及其对自体肿瘤细胞的杀伤活性

目的:分析恶性胸水中的肿瘤浸润T淋巴细胞(tumor infiltrating T lymphocyte,TIL)的细胞成分,探究其对自体肿瘤细胞的杀伤活性。方法:收集17例肺腺癌患者的胸水,采用Ficoll密度梯度离心法分离恶性胸水中的单个核细胞,流式细胞检测仪分析TIL细胞成分,贴壁培养法分离肿瘤细胞和TIL,裸鼠成瘤实验明确贴壁细胞为肿瘤细胞,MTT法检测培养的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性。结果:恶性胸水TIL中T细胞占60.6%~79.3%,辅助性T细胞占比显著高于细胞毒性T细胞(36.63%±1.90%vs 24.64%±2.32%,P<0.001),同时还含有少量自然杀伤(natural killer,NK)细胞和NK T细胞;采用贴壁培养法成功分离培养肿瘤细胞,体外培养增殖的TIL对自体肿瘤细胞杀伤活性为39.14%±12.04%,且体外高增殖组的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性高于低增殖组(50.51%±3.80%vs 29.04%±5.77%,P<0.001)。结论:肺腺癌恶性胸水中TIL主要以T细胞为主,辅助性T细胞多于细胞毒性T细胞,体外增殖能力强的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性高于增殖能力弱者,恶性胸水可能为肿瘤细胞免疫治疗提供细胞来源。

科学有效的案件质量评查工作机制的构建

在司法责任制改革、内设机构改革、“捕诉一体”办案模式改革等多重改革叠加的时代背景下,检察机关做好案件质量评查已成为落实司法责任制的保障。一、构建合理的评查组织模式评查组织模式的合理设置有利于评查工作的顺利进行,也能够让评查工作发挥出最大的权威性和公平性。案管部门是案件质量评查工作中的主导部门,壮大案管部门队伍,提高案管部门内部人员的整体专业素质,对案管部门进行定期的案件质量评查管理工作培训确有必要。