搅拌棒吸附萃取-高效液相色谱-荧光法测定陈皮中黄曲霉毒素

采用自制多巴胺-氧化石墨烯复合物为涂层的搅拌棒萃取4种黄曲霉毒素,并结合高效液相色谱-荧光检测器,建立了中药材陈皮中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2(AF B1、AF B2、AF G1、AF G2)的测定方法。对搅拌速率、盐效应、萃取温度、萃取时间和解吸条件等因素进行了优化。结果表明,AF B1、AF G1在0.625~20.000 ng/mL、AF B2、AF G2在0.156~5.000 ng/mL范围内线性关系良好(R^2≥0.9984),检出限为0.020~0.078μg/kg,加标回收率在84.0%~95.4%之间,相对标准偏差(RSD,n=5)为1.4%~4.6%。该方法操作简便,灵敏度高,适用于中药材陈皮中AF B1、AF B2、AF G1、AF G2的分析检测。

白藜芦醇治疗阿尔茨海默病的作用机制:基于网络药理学方法

目的基于网络药理学方法探讨白藜芦醇(RES)治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法利用PubChem、BATMANTCM、Genecards、AD、TTD、String 11.0、AlzData、SwissTargetPrediction、Metascape等数据库,获得RES所有作用靶点和人类AD相关的靶点,使用Venny 2.1工具取交集,获得RES治疗AD的靶点。构建靶点蛋白质相互作用网络,基因本体论(GO)与KEGG通路富集分析,使用Cytoscape 3.7.1构建RES治疗AD的“靶点-信号通路”网络图。使用SwissDock(http://www.swissdock.ch/docking)服务器进行分子对接验证。通过蛋白免疫印迹检测RES处理AD细胞模型(293Tau细胞)的pS396、pS199、Tau5、CDK5、糖原合酶激酶3β(GSK3β)和p-GSK3β的蛋白水平。结果分析得到RES作用靶点182个,AD相关靶点525个,RES治疗AD的靶点36个,其中34.6%的靶点为蛋白质修饰酶、27.7%的靶点为代谢物相互转化酶、13.8%的靶点为基因特异性转录调节因子、10.3%的靶点为转运蛋白。RES治疗AD的核心关键靶点为INS、APP、ESR1、MMP9、IGF1R、CACNA1C、MAPT(即微管相关蛋白Tau)、MMP2、TGFB1与GSK3B。GO生物学过程富集分析显示,RES治疗AD主要涉及对β-淀粉样蛋白的反应、转移酶活性的正调节、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、行为、学习或记忆、老化、跨膜转运的调控等多个生物功能。KEGG通路富集分析表明富集最显著的信号通路为阿尔茨海默病通路、PI3K-AKT信号通路、cGMP-PKG信号通路、MAPK信号通路等。分子对接结果显示,RES与ESR1、GSK3B、MMP9、IGF1R、APP与INS结合较好。蛋白免疫印迹结果显示,50μmol/L RES处理12 h可以通过调控CDK5、核心靶点GSK3β活性显著降低293Tau细胞pS396和pS199水平(P<0.001)。结论RES可以通过Aβ、Tau病理过程治疗AD,可通过调控CDK5与GSK3β改善AD病理改变。