神经酸对H_(2)O_(2)诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用

以PC12细胞作为研究对象、H_(2)O_(2)为诱导剂,用200μmol/L H_(2)O_(2)处理PC12细胞24 h,建立细胞氧化损伤模型。通过检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平确定氧化应激程度,并对细胞凋亡和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平进行评估。采用蛋白免疫印迹和实时聚合酶链式反应检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白质(Bcl-2-associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、kelch样ECH关联蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)及其基因的表达水平。结果表明,使用200μmol/L H_(2)O_(2)处理PC12细胞24 h后,其存活率为60.12%;细胞毒性实验表明,神经酸能够显著降低H_(2)O_(2)诱导损伤细胞中LDH和MDA的含量,抑制ROS的过度产生,并增强SOD和GSH-Px活性,显著上调Bcl-2、Nrf2和HO-1的表达水平,下调Caspase-3、Bax和Keap1的表达水平。综上所述,神经酸对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞氧化损伤具有保护作用,且与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

丹参提取物对去卵巢模型大鼠骨质疏松的影响

采用去卵巢大鼠模型,分别用丹参提取物低剂量、中剂量、高剂量和雌激素对模型鼠进行干预,探讨丹参提取物对雌激素缺乏引起的大鼠骨质疏松的影响。将SD大鼠分为假手术组、模型组、丹参提取物低、中、高剂量组和雌激素组,分别连续给药12周,测定子宫系数、股骨湿重、干重、灰重,并观察股骨、胫骨形态学的变化情况。结果显示:与假手术组比较,模型组动物体质量显著增加(P<0.01),子宫系数、股骨湿重、干重、灰重显著降低(P<0.05),股骨、胫骨骨小梁稀疏、断裂、排序紊乱;与模型组比较,丹参提物物各剂量组和雌激素组的体质量均显著降低(P<0.05),子宫系数、股骨湿重、干重及灰重均显著增加(P<0.05),股骨、胫骨的骨小梁结构得到不同程度的改善。综上,丹参提取物可提高去卵巢大鼠骨质量,改善骨微结构,且对子宫的影响小于雌激素,对去卵巢大鼠所致骨质疏松具有明显的改善作用。

枸杞子对光损伤小鼠视网膜的保护作用

以光损伤小鼠为模型,探讨不同剂量的枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)粗提物(280、370、460 mg/kg)对光损伤小鼠视网膜形态、功能和抗氧化能力的影响。对小鼠连续干预8周后造模,进行视网膜电图(electroretinogram,ERG)和光学相干断层成像(optical coherence tomography,OCT)相关视网膜生理指标检测。ERG结果显示,通过比较0.01 b波和3.0 b波振幅,药物干预组小鼠视网膜对光的敏感程度要高于模型组。OCT检测结果表明,枸杞多糖粗提物各剂量组均较模型组视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)层细胞平滑,说明枸杞多糖粗提物对小鼠光损伤视网膜的形态损伤具有保护作用。视网膜抗氧化指标测定结果显示,枸杞多糖粗提物高剂量组的抗氧化效果好于低剂量组,呈剂量依赖性。研究结果显示,枸杞多糖粗提物对光损伤小鼠视网膜具有较好的保护作用。

熟地黄粗提物对光损伤小鼠视网膜的保护作用

以光损伤小鼠为模型,探讨不同剂量熟地黄粗提物(360、450 mg/kg)对光损伤小鼠视网膜形态、功能及抗氧化能力的影响。对小鼠连续干预8周后造模,进行视网膜电图(electroretinogram,ERG)和光学相干断层成像(optical coherence tomography,OCT)等相关视网膜生理指标检测。ERG检测结果显示,熟地黄干预组小鼠视网膜对光的敏感程度均显著高于模型组(P<0.01)。OCT检测结果表明,熟地黄提取物各剂量组小鼠视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)厚度均高于模型组,并且具有统计学差异(P<0.05)。视网膜抗氧化结果显示,熟地黄提取物高剂量组的抗氧化效果好于低剂量组。视网膜中促炎基因表达结果显示,低、高剂量熟地黄粗提物均对单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)具有抑制作用。研究结果显示,熟地黄粗提物对光诱导的视网膜损伤具有保护作用。

菊花对光氧化应激的缓解作用

以光损伤小鼠为模型,分别用230、300、380 mg/kg bw剂量的菊花粗提物对小鼠进行8周干预,探讨菊花粗提物对光损伤小鼠晶状体及肝脏抗氧化能力的影响。结果显示,通过比较晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)发现,菊花粗提物干预组GSH-Px活力与T-AOC明显高于模型组,菊花粗提物剂量组与模型组比较均具有显著差异(P<0.05),其抗氧化效能随着粗提物剂量的增大而升高。肝脏抗氧化评价结果显示,菊花粗提物高剂量组的抗氧化效果优于低剂量组,呈剂量依赖性;与模型组相比,菊花粗提物各剂量组抗氧化指标均具有显著差异(P<0.05)。结果表明,菊花粗提物可以增强小鼠晶状体和肝组织的抗氧化能力,可能对氧化应激诱导的视疲劳具有缓解作用。

复配药材对眼部光氧化应激的预防作用

目的探讨各复配组方对眼睛的保护作用。方法以光损伤小鼠为模型,分别用熟地黄+枸杞子、熟地黄+菊花、熟地黄+铁皮石斛和熟地黄+枸杞子+菊花4种复配粗提物对小鼠进行干预,连续8周后强光造模,进行视网膜电图(electroretinogram,ERG)检测并采集视网膜进行抗氧化检测。结果ERG结果显示,与模型组比较,药物干预组b波振幅均升高(P<0.05)。与两两复配组比较,熟地黄+枸杞子+菊花组b波振幅高于两两复配组。视网膜抗氧化结果显示,与模型组比较,复配药物干预均可降低小鼠视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量(P<0.05),升高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力(P<0.05),且熟地黄+枸杞子+菊花组的抗氧化效果优于两两复配组。结论与模型组比较,各复配物均能够提高ERG的b波振幅和视网膜抗氧化能力,复配粗提物可能对氧化应激诱导的视疲劳等眼部疾病的发生具有缓解作用。

虾青素保护视网膜色素上皮细胞免受蓝光发光二极管诱导的氧化应激损伤

目的:探究虾青素对蓝光发光二极管(light-emitting diodes,LED)诱导ARPE-19细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法:采用不同浓度的虾青素预处理细胞1 h后,蓝光LED下光氧化损伤诱导24 h。噻唑蓝法测定细胞活力,乳酸脱氢酶检测法分析细胞毒性,2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平,JC-1荧光探针法测定细胞内线粒体膜电位的变化,利用酶学相关试剂盒测定细胞内源性抗氧化酶活力,实时荧光定量聚合酶链式反应法测定细胞内Ⅱ相解毒基因的转录表达水平,Western blot法测定细胞内核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)的核蛋白表达水平。结果:虾青素(5、10μmol/L和20μmol/L)预处理以浓度依赖的方式抑制蓝光LED诱导的ARPE-19细胞活力降低,缓解细胞毒性;虾青素预处理能够减少细胞内ROS的产生,稳定线粒体膜电位,提高内源性抗氧化酶活力。此外,虾青素诱导了Nrf2的核转位,增加了抗氧化酶和Ⅱ相解毒基因的表达,从而保护ARPE-19细胞免受蓝光LED诱导的氧化应激损伤。结论:虾青素通过诱导Nrf2的核转位,促进抗氧化酶和Ⅱ相解毒基因的表达水平升高从而保护ARPE-19细胞免受蓝光LED诱导的氧化应激损伤。

复配粗提物对氧化应激型视力损伤的保护

目的探讨4种复配粗提物对眼睛的保护作用。方法对小鼠连续干预8周后强光造模,进行小鼠视网膜电图(electroretinogram,ERG)和视网膜光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)检测,并采集视网膜进行基因表达测定。结果ERG结果显示,与模型组比较,粗提物干预组a波振幅和明场b波振幅均升高(P<0.05)。OCT结果显示,与模型组比较,小鼠视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)萎缩现象均得到了不同程度的改善。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)基因的表达结果显示,复配粗提物均可抑制视网膜TNF-α和IL-1β基因的表达。结论复配粗提物可能对炎症相关的视疲劳具有缓解作用。

鼠尾草酸通过激活AMPK降低游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪积累

目的:探究鼠尾草酸对游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)诱导的Hep G2细胞脂肪积累的作用机制。方法:采用FFAs(油酸-棕榈酸浓度比2∶1)诱导建立HepG2细胞高脂模型,使用不同浓度的鼠尾草酸(15、20μmol/L)、FFAs(1mmol/L)、AMP依赖的蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate activated protein kinase,AMPK)抑制剂(2μmol/L)处理细胞24h后,通过测定细胞内脂肪含量、细胞活力、总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)含量,脂肪代谢相关基因的转录表达水平以及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶的表达水平,研究鼠尾草酸的降脂作用机制。结果:15、20μmol/L的鼠尾草酸,1mmol/L的FFAs单独或共同处理细胞24h对细胞的活力没有显著性影响;与正常组相比FFAs处理细胞24h,油红O染色结果显示,FFAs能显著增加细胞内的脂肪含量;FFAs能增加细胞内TC、TG含量,增加脂肪合成相关基因的表达水平,降低脂肪分解相关基因的表达水平(P<0.05)。油红O染色结果显示,与FFAs处理组相比,鼠尾草酸可以降低细胞内的脂肪含量;鼠尾草酸能显著降低TC、TG含量,显著下调脂肪合成相关基因的表达,且使脂肪氧化相关基因的表达水平呈上升趋势,并显著上调磷酸化AMPK的表达量(P<0.05)。使用AMPK抑制剂共同处理细胞24h,对细胞的活力没有影响,但可明显逆转鼠尾草酸的降脂作用(P<0.05)。结论:鼠尾草酸能通过调控脂肪相关基因的转录水平和AMPK磷酸化激酶的表达来改善FFAs诱导的HepG2细胞的脂肪积累。

熟地黄对视网膜损伤小鼠的影响

采用光损伤小鼠模型,分别用熟地黄水提醇沉提取物和熟地黄水提取物对模型小鼠进行干预,探讨熟地黄对视疲劳的缓解作用。将小鼠分为正常对照组、模型组、熟地黄水提醇沉提取物低剂量组(360 mg/kg)、高剂量组(450 mg/kg)、熟地黄水提取物组(690 mg/kg),共5组,每组6只,对小鼠连续干预8周,再给予光强为(9000±500)Lux进行照射(7 d),光照结束后用采集晶状体及肝脏进行晶状体抗氧化能力、肝脏抗氧化能力检测。结果表明,通过比较晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)指标发现,模型组GSH-Px与T-AOC活力均显著低于正常对照组;熟地黄水提醇沉提取物和熟地黄水提取物组GSH-Px与T-AOC活力均明显高于模型组,具有统计学差异(P<0.05),且熟地黄水提醇沉提取物的抗氧化效果随着剂量的升高而升高。从肝脏抗氧化指标结果上看,与模型组比较,熟地黄水提醇沉提取物和熟地黄水提取物均能显著降低丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,提高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、GSH-Px活性,差异有统计学意义(P<0.05)。研究结果表明熟地黄提取物对光损伤小鼠晶状体具有较好的保护作用,可对视疲劳起到缓解作用。

传统明目中药材复配对视网膜损伤小鼠抗氧化的影响

目的探讨各复配组方对视网膜损伤小鼠的影响。方法将小鼠分为正常对照组、模型组、熟地黄+枸杞子组、熟地黄+菊花组、熟地黄+铁皮石斛组、熟地黄+枸杞子+菊花组共6组,分别对小鼠连续干预8周后进行强光造模,光照结束后用采集晶状体及肝脏组织进行抗氧化的指标检测。观察晶状体中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC),肝组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、及GSH-Px的活力。结果模型组晶状体GSH-Px与T-AOC值均显著低于正常对照组(P<0.05);各复配组GSH-Px和T-AOC值与模型组比较均显著升高(P<0.05)。在肝脏抗氧化指标中,模型组与正常组比较,MDA含量升高,SOD活力、CAT活力和GSH-Px活力下降;与模型组比较,各复配组均可降低MDA含量,升高SOD活力、CAT活力和GSH-Px活力,且均具有显著性差异(P<0.05)。结论各复配组均对光损伤造成的氧化损伤具有缓解作用。