突变型人白细胞介素-2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达

为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列 .编码 18位亮氨酸的序列突变为蛋氨酸序列 ;编码 19位亮氨酸的序列突变为丝氨酸序列 .突变型人白细胞介素 2 (MvIL 2 )基因与表达载体pPIC9K重组 ,酶切线性化后用Invitrogen转化毕赤酵母试剂盒导入酵母细胞进行整合 ,经筛选得到一高表达白介素 2的克隆 .SDS PAGE显示 ,表达量约占总量的4 5 7% .经Western印迹验证 ,重组人白介素 2有免疫活性 ;与野生型IL 2相比 ,所获得的突变型IL 2纯品的比活性为 4 0× 10 7IU mg蛋白 ,比天然型IL 2高 4～

巴斯德毕赤酵母表达的突变型人白细胞介素-2的发酵条件与纯化研究

在以前的研究中,通过蛋白质工程技术获得了三突变体白细胞介素_2基因(编码12 5位半胱氨酸→丙氨酸;18位亮氨酸→蛋氨酸;19位亮氨酸→丝氨酸) ,并在毕赤酵母中加以表达。进一步优化表达条件,其最适诱导条件:80 %以上的通气,诱导2d ,初始pH6 0 ,甲醇终浓度为1 0 %。在上述条件下表达量占菌体总蛋白的30 %以上,大约2 0 0mg L。建立了一套从毕赤酵母表达上清中分离纯化分泌型表达蛋白IL_2的方法,经离心,超滤浓缩,强阳离子交换S柱和分子筛层析得到纯化的突变型和野生型IL_2 ;其得率为2 7% ,纯度达电泳纯并且HPLC检测只有一个峰。纯化的突变蛋白对CTLL_2细胞具有刺激性;与野生型IL_2相比,在各种温度条件下储存的突变蛋白保留有更高的活性;突变型IL_2的活力是野生型的4～5倍,具有更高的利用价值。

随机扩增多态性DNA技术在生命科学中的应用

DNA分子标记是DNA水平上遗传变异的直接反映 ,随机扩增多态性DNA(RAPD)技术 ,是新发展起来的一种DNA分子标记方法。文中详细阐述了RAPD技术的原理 ,进一步与限制性片段长度多态性 (RestrictionFragmentLengthPolymorphism ,RFLP)技术相比 ,得出它具有快速、简便和对材料要求不高等特点 ,最后讨论了RAPD技术在生命科学研究中各个方面的广泛应用 ,包括物种基因组的分子图谱构建、系统进化发育以及基因定位研究等。

蚯蚓体内超氧化物歧化酶分析(英文)

蚯蚓体内 SOD含量甚高 ,35℃饲养的蚯蚓其 SOD比活最高 ,因此 ,纯化前将蚯蚓在 35℃养殖 4周以上。采用硫酸铵分级沉淀和柱层析的方法 ,从蚯蚓体内分离得到纯的铜锌超氧化物歧化酶。每 1 0 0 g组织得到 SOD制品总活力为 1 7,1 90 U,比活 7995U/ mg,回收率为 35%。该酶呈淡蓝绿色 ,最大紫外吸收波长为 2 70 nm。该酶分子量为 33,0 0 0 ,亚基分子量为 1 6 ,50 0。该酶亚基含 1 56个氨基酸残基 ,不含酪氨酸。N-末端为丙氨酸 ,等电聚焦为三条谱带 ,等电点分别为 5.30、5.59和 6 .2

赤子爱胜蚓超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

采用硫酸铵分级沉淀和柱层析的方法，从赤子爱胜蚓整体细胞抽提液内分离得到纯的铜锌超氧化物岐化酶（Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ）。每１００ｇ蚯蚓得到的ＳＯＤ制品，总活力为１１１５０Ｕ，比活力为５１３８Ｕ／ｍｇ蛋白，回收率为２０％。铜锌超氧化物岐化酶呈淡蓝绿色，最大紫外吸收波长为２７０ｎｍ。测得该酶分子量为３３０００，亚基分子量为１６５００。该酶亚基由１５６个氨基酸残基组成，不含酪氨酸。

高师生物化学教学的现状分析和改革思路

生物化学教学,一直局限于以传统的静态生化、动态生化、机能生化为主的教学模式,内容陈旧,形式单一,大大落后于学科的发展。本文就当前生物化学课程教学存在的问题,分析研究了21世纪生物化学教学改革思路,以及如何运用多媒体手段,加强生物化学的教学。

新型基因重组白细胞介素-2的研究开发

本文根据IL- 2基因定点突变研究所提供的有关IL- 2结构和功能重要信息 ,特别是某些关键氨基酸残基的改变对IL- 2生物活性影响 ,探讨了IL- 2和IL- 2受体相互作用关系、新型IL- 2的研制方法和变异IL -2作用机制 ,并提出设计新型天然IL -2单位点到多位点突变的策略 ,从而指导研制更有效或毒副作用降低的新型IL- 2类似物。

以“创新小组”为模式培养生物类专业创新型人才的探索

21世纪是教育和人才的世纪,随着知识经济时代的来临,拥有创新能力的高素质复合型人才愈加受到青睐.作为人才培养的重要基地,各大高校虽然不断进行教育教学改革,但是在创新型人才培养方面仍存在一些问题.以培养生物类专业创新型人才为例,通过"创新小组"的方式培养大学生的创新能力具有良好的效果,"创新小组"模式的建立在对创新教育进行摸索的同时,也试图为教育教学改革提供参考借鉴.

分子电距矢量(MEDV)用于肽模拟物的定量构效关系研究(英文)

利用电距矢量 (MEDV)表征肽模拟物的分子结构 ,并与包含N、O、S杂原子 ,饱和与不饱和键或共轭体系的二肽分子的生物活性相关。利用多元线性回归方法 ,构建了两组二肽分子的定量构效关系 (QSAR)模型。对于 5 8个二肽组 ,模型相关系数和均方根误差分别为R =0 .84 2 3和RMS =0 .5 3 5。对于 4 8个二肽组 ,R =0 .8199,RMS =0 .3 5 7。为了检验QSAR模型的预测能力 ,对两个二肽组数据集进行了交叉校验 (CV)。采用LOO法即每次从n个样本中抽出n- 1个样本建立QSAR模型继而用该模型去预测余下的 1个样本的生物活性的方法。对于 5 8肽组 ,5 8次预测的生物活性与原实验活性之间的R =0 .790 6,RMS =0 .60 8,而 4 8肽组的R =0 .74 2 2和RMS =0 .4 17。MEDV只利用了分子二维拓扑图中元素电负性和相对化学键长的有关信息 ,不需要任何三维结构知识或分子校准步骤或有关物理化学性质的信息。此外构建QSAR模型时只利用MLR方法而不需应用主成分回归或偏最小二乘技术。方法简便快速 ,模型稳定有预测能力。

一个新的分子电性距离矢量(MEDV)

有机化合物通常由电性各异的碳、氢、氧、氮、硫等元素以共价键相互连接而成.我们提出一个称为分子电性距离矢量(简称MEDV)的新描述子来表征有机分子结构.以含有环、饱和与不饱和键及碳氧氮等元素的色氨酸分子为例,说明构建MEDV的基本方法.开发设计了计算有机分子MEDV的True BASIC语言程序.不借用其他任何描述子,仅用MEDV建立了烷、醇、多环芳烃等多种有机化合物包括沸点、密度、保留指数等多种性质的定量结构-性质相关(QSPR)模型,相关系数均达0.98以上.

低浓度五氯酚暴露对稀有鮈鲫体内SOD活性、GSH和HSP70含量的影响

为筛选检测低浓度五氯酚(PCP)对水生生物毒性效应较敏感的指标,将稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)暴露于浓度分别为0.5、1.5、5.0、15和50μg·L-1的PCP中2、7、14、21d,同时设乙醇对照组,检测稀有鮈鲫体内(整体匀浆)超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)、热激蛋白70(HSP70)含量等生化指标.结果表明,相同暴露时间下,随着PCP暴露浓度的升高,SOD活性均表现为先抑制后激活趋势,GSH和HSP70含量无明显变化;相同暴露浓度下,随着PCP暴露时间的延长,SOD活性均表现为先激活后抑制趋势,GSH和HSP70含量无明显变化.初步认定相对于GSH、HSP70含量,SOD活性的变化可以更有效地反映低浓度PCP对稀有鮈鲫的毒性效应.

五氯酚对稀有鮈鲫胚胎毒性效应研究

研究五氯酚(PCP)对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)胚胎的致畸和毒性效应.以7.5,30,60,120,250μg/L5个浓度的PCP对0hpf(hpf,受精卵孵出时间)的稀有鮈鲫胚胎进行暴露染毒,同时设置空白对照组、二甲基亚砜溶剂对照组和雌二醇(EE2,2.5ng/L)阳性对照组.在立体显微镜下观察整个胚胎的发育过程,统计胚胎的孵化率、96hpf相对存活率和各时期的畸形率,并利用半定量RT-PCR检测胚胎中CYP1A基因和p53基因mRNA的表达.结果表明,PCP暴露能延迟稀有鮈鲫胚胎发育,并造成胚胎卵凝结、心包囊肿、脊柱弯曲等多种畸形甚至死亡.随着PCP暴露浓度的升高,稀有鮈鲫胚胎的孵化率和96hpf相对存活率降低,各时期的畸形率增加,并呈现一定的浓度效应.稀有鮈鲫胚胎CYP1A基因和p53基因mRNA表达被显著诱导,并随PCP浓度的升高而增加.PCP对稀有鮈鲫胚胎发育表现为显著的毒性效应.稀有鮈鲫胚胎孵化率、96hpf相对存活率、各时期畸形率及CYP1A基因和p53基因的诱导表达可以作为评价PCP毒性作用的敏感指标.

基于SCGE的五氯酚对稀有鮈鲫DNA损伤的研究

采用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术,研究了在不同的染毒时间内不同浓度的五氯酚(PCP)对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)血细胞和肝脏细胞DNA的损伤.结果显示,各PCP染毒组细胞彗星尾部DNA含量(%DNAT)和彗星尾长(TL)显著增加,与空白对照组比较,差异极显著(P<0.05).随着浓度的增加,细胞彗星尾部%DNAT和TL逐渐增加,其相关系数>0.926,说明在实验浓度范围内,存在显著的浓度-效应关系.在同一浓度下,随着暴露时间的增加,处理组%DNAT和TL逐渐增加,存在显著的时间-效应关系.由于PCP可引起稀有鮈鲫血细胞和肝脏细胞DNA的严重损伤,因此稀有鮈鲫血细胞和肝脏细胞DNA的损伤可作为PCP遗传毒性的指示.

剂量-效应关系两种置信区间的比较

毒性实验存在随机误差,同时剂量-效应曲线(DRC)拟合也会产生误差.因此,合理表征剂量-效应关系及其置信区间非常重要.本研究在剂量-效应曲线非线性拟合基础上,阐述了构建拟合函数置信区间(FCI)与实验观测置信区间(OCI)的基本原理.并以对氯苯酚及等效应浓度比混合物为例,说明目前多数文献使用的FCI不能有效地描述真实毒性实验的不确定度,提出以OCI表征DRC,以求真实反映观测毒性效应的不确定度.利用剂量加和与独立作用模型预测了混合物毒性,并与OCI比较,得到混合物毒性作用类型.建议在分析混合物协同、拮抗、独立与加和作用时,应充分考虑OCI.

杀虫剂及抗生素对发光菌的短期毒性与长期毒性

以毒物对青海弧菌Q67(Vibrio-qinghaiensissp.-Q67)发光抑制为毒性指标,基于短期微板毒性分析法(S-MTA法),建立了长期微板毒性分析法(L-MTA法),测定了吡虫啉(IMI)、抗蚜威(PIR)、啶虫脒(ACE)及敌百虫(DIP)等4种杀虫剂与氯霉素(CHL)、盐酸四环素(TET)、硫酸链霉素(STR)及硫酸巴龙霉素(PAR)等4种抗生素的短期(15 min)毒性和长期(12 h)毒性.采用短期毒性与长期毒性EC50之比(RSL)为指标,表征同一物质的毒性差异.结果表明:3种杀虫剂(IMI,ACE及PIR)的短期毒性与长期毒性差异不大(其RSL分别为0.84,0.81和1.11);杀虫剂DIP和2个抗生素(CHL及TET)的短期毒性与长期毒性差异明显(其RSL分别为11.76,9.67及154.38);另2个抗生素(STR和PAR)只有较强的长期毒性.

免费师范教育政策下的生物学免费师范生学习状况调查

采用问卷调查和访谈等方式,对生物学专业免费师范生目前的学习状况、学习态度、学习动机等进行了调查研究,研究发现:其学习状况良好,学习态度积极,但部分学生的学习目标尚不够明确,存在消极情绪.并根据存在的问题提出了如何加强免费师范生教育的建议.

大瓶螺四种同工酶的电泳分析

大瓶螺四种同工酶的电泳分析李清漪，刘堰（西南师范大学生物系，重庆６３０７１５）关键词大瓶螺，同工酶，差异，电泳分析ＴＨＥＥＬＥＣＴＲＯＰＨＯＲＥＴＩＣＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦ４ＩＳＯＥＮＺＹＭＥＳＯＦＡＭＰＵＬＬＡＲＩＡＧＩＧＡＳ￥ＬｉＱｉｎｇｙｉａｎｄ...

小胶质细胞体外吞噬模型的建立及相关炎症因子的研究

目的:建立以细胞凋亡信号-磷脂酰丝氨酸(PS)介导的小胶质细胞体外吞噬模型,研究小胶质细胞发挥吞噬功能时炎症因子的表达变化。方法:用N-乙基马来酰胺(NEM)预处理红细胞,随后整合氧化PS,制备含氧化PS信号的红细胞凋亡模型,并测定小胶质细胞对整合氧化PS信号红细胞吞噬率的变化。同时,real-time PCR检测小胶质细胞中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达情况,研究小胶质细胞吞噬功能与炎症功能之间的关系。结果:小胶质细胞对整合氧化PS红细胞的吞噬率显著高于对照组(P<0.01),同时炎症因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平明显减少。结论:成功制备小胶质细胞体外吞噬凋亡细胞模型,小胶质细胞的吞噬作用可能是自身炎症因子IL-1β和TNF-α在转录水平上降低的诱因。

人白细胞介素-2突变体在大肠杆菌中的克隆表达与鉴定

根据GenBank报道的人白细胞介素-2(hIL-2)基因分析设计并合成引物,以本室构建的pPIC9K/IL-2突变体(编码125位半胱氨酸→丙氨酸、18位亮氨酸→蛋氨酸、19位亮氨酸→丝氨酸)为模板,PCR扩增出突变型人白细胞介素-2基因.用EcoRI和BamHⅠ对目的基因进行双酶切后,插入大肠杆菌表达载体pBV220,转化宿主菌JM109,经菌落PCR筛选阳性重组子、酶切鉴定,DNA序列分析证实,重组质粒pBV220/IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放阅读框.经42℃热诱导表达,SDS-PAGE电泳显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为15kD的外源蛋白产生,经Western印迹证明为rhIL-2.成功建立了突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因的大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础.

细胞周期的关卡调控途径研究进展

目前已从不同物种、不同种类细胞中筛选到很多关卡基因和蛋白质，如ＡＴＭ、ＲＡＤ５３、ＣＨＫ１等．有关它们在具体关卡调控途径中的作用，以及和癌变发生的关系已有许多报道．