大黄素调控组蛋白乙酰化促进HpG2肝癌细胞焦亡及凋亡的发生

目的 研究天然产物大黄素是否能够影响HpG2肝癌细胞中组蛋白乙酰化水平,进而加速肝癌细胞焦亡和凋亡,为肝癌的治疗提供新的靶点。方法 CCK-8法检测不同浓度大黄素对Hp G2细胞活力的影响;生物信息学分析TCGA数据库中肝癌患者组蛋白乙酰化相关基因表达情况,验证候选基因赖氨酸乙酰基转移酶2A(KAT2A)与细胞凋亡通路的相关性;实时荧光定量PCR(q PCR)检测Hep G2细胞与L02细胞KAT2A m RNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大黄素对Hp G2细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT)、组蛋白去乙酰转移酶(HDAC)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的影响;流式细胞术检测大黄素对肝癌细胞凋亡的影响;Western blot检测细胞凋亡、细胞焦亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白质(Bax)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin家族成员D N端(GSDMD-N)及KAT2A的表达情况。结果 大黄素能降低Hp G2细胞活性,半抑制浓度(IC_(50))95%置信区间为58.12~66.52μmol/L。与正常肝组织相比,组蛋白乙酰化相关基因m RNA水平在肝癌组织中表达增高,且KAT2A变化倍数最大[log_2(Fold Change)=2.010,P<0.01];在肝癌组织中,KAT2A m RNA的表达与细胞凋亡通路呈负相关(r_s=-0.230,P<0.01)。与L02细胞相比,KAT2A m RNA在Hep G2中表达升高(P<0.05);与对照组相比,大黄素干预组HAT和HDAC的表达水平下降,IL-18、IL-1β表达水平水平增高,细胞凋亡率升高,KAT2A、BAX的表达降低,Bcl-2、NLRP3、GSDMD-N及Caspase-1表达水平升高(P<0.05)。结论 大黄素可抑制肝癌细胞活力,加速细胞凋亡和焦亡,其机制可能与调控KAT2A表达相关。

绿茶对高糖环境下乳鼠海马神经细胞的保护作用

目的探讨绿茶对高糖环境下乳鼠海马神经细胞的保护作用。方法取SD雄鼠6只,分别用绿茶浓缩液、生理盐水灌胃,按血清药理学方法制备绿茶浸出液血清和空白血清。取出生24 h内SD乳鼠的海马组织,采用酶消化法分离培养海马神经细胞,分为8组,对照组培养基葡萄糖浓度为25 mmol/L;高糖组葡萄糖浓度为45mmol/L;空白血清低、中、高浓度组葡萄糖浓度为45 mmol/L,并分别加入25%、50%、100%浓度的空白血清;绿茶低、中、高浓度组葡萄糖浓度为45 mmol/L,并分别加入25%、50%、100%浓度的绿茶浸出液血清。干预后48 h,采用倒置显微镜和透射电镜观察各组神经细胞形态及超微结构改变;干预后第7天,采用乳酸脱氢酶(LDH)试验及CCK-8法检测神经细胞活性和损伤程度。结果与对照组相比,高糖组海马神经细胞出现损伤现象,如胞体不规则、突触减少等;绿茶低、中、高浓度组较高糖组均有不同程度改善。高糖组LDH水平高于对照组(P<0.01);绿茶低、中、高浓度组LDH水平均低于高糖组,且高浓度组低于低浓度组(P均<0.01);绿茶各浓度组LDH水平均低于相应空白血清对照组(P均<0.05)。高糖组CCK-8低于对照组(P<0.01);绿茶低、中、高浓度组CCK-8均高于高糖组,且高浓度组高于低浓度组(P均<0.05);绿茶各浓度组CCK-8均高于相应空白血清对照组(P均<0.05)。结论高糖能够引起海马神经细胞的损伤,绿茶能够有效改善海马神经细胞形态和结构,升高细胞活性,降低其损伤程度,具有一定的神经保护作用。

HPLC法同时测定金刺参九正合剂中4种有效成分

目的建立HPLC法同时测定金刺参九正合剂中维生素C、没食子酸、儿茶素和表儿茶素的方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为甲醇(A)-体积分数为0.03%的磷酸溶液(B),梯度洗脱,流速:0.7 m L·min-1,检测波长:220nm,柱温:30℃。结果维生素C、没食子酸、儿茶素和表儿茶素分别在质量浓度142.8~1 428 mg·L^(-1)、3.500~35.00 mg·L^(-1)、21.60~216.0 mg·L^(-1)和0.900 0~9.000 mg·L^(-1)内呈良好的线性关系(r≥0.999 1,n=6),平均回收率分别为99.8%(RSD=0.3%,n=9)、98.0%(RSD=1.0%,n=9)、99.7%(RSD=0.3%,n=9)和98.0%(RSD=1.1%,n=9)。结论该方法为该制剂的质量控制提供了理论支撑。

HPLC测定绿茶浸出液灌胃动脉粥样硬化大鼠血浆中4个有效成分的含量

目的:建立HPLC测定绿茶浸出液中没食子酸、咖啡因、表儿茶素没食子酸酯、山柰酚在动脉粥样硬化大鼠体内的血药浓度,为动脉粥样硬化的治疗提供参考。方法:动脉粥样硬化大鼠灌胃绿茶浸出液后,分别在不同时间点取血,采用依利特Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇(A)-0.03%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~30 min,10%~43%A;30~43 min,43%~45%A;43~44 min,45%~51%A;44~60 min,51%~53%A;60~70 min,53%~90%A),流速0.7 mL·min^(-1),检测波长278 nm的色谱条件进样分析。结果:没食子酸、咖啡因、表儿茶素没食子酸酯、山柰酚分别在0.255~20.40,0.430~86.00,0.245~19.60,0.270~21.60 mg·L^(-1)内呈良好线性关系,日内和日间精密度RSD均<9.0%,提取回收率和方法回收率都>87%;酸化后主要药代动力学参数药时曲线下面积(AUC0-t)分别为(8.902±1.235),(198.5±12.5),(7.367±0.412),(4.426±0.251)mg·h·L^(-1),表观分布容积(Vd)分别为(0.990±0.134),(1.409±0.201),(0.501±0.243),(0.029±0.009)L·kg^(-1),达峰时间(T_(max))均为1.5 h。结论:该方法对所测成分的分离度好,适用于测定绿茶浸出液中4个有效成分的血药浓度,为临床预防此类疾病提供一定理论依据。

绿茶中咖啡因在正常和糖尿病认知功能障碍大鼠体内的药代动力学及药效学分析

目的：在建立气相色谱法（GC）方法学的基础上,比较绿茶中咖啡因在正常和糖尿病认知功能障碍大鼠体内的血药浓度,并验证其对糖尿病认知功能障碍的影响。方法：采用链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射（剂量50 mg·kg^-1）复制糖尿病模型,模型复制成功后灌胃咖啡因和绿茶浸出液进行干预,并且每3周测定1次血糖值,诱导第12周时Morris水迷宫试验检测认知功能,选择HP-5色谱柱,二阶升温程序,流速1.0 mL·min^-1,分流比10∶1,氢火焰离子化检测器（FID）,检测器温度和进样口温度均为250℃,载气为氮气的色谱条件进行咖啡因在正常和糖尿病认知功能障碍大鼠体内的药代动力学研究,运用透射电镜观察神经元细胞的超微结构。结果：咖啡因的线性范围1.28-128 mg·L^-1（R2=0.998）,最低检测限和最低定量限分别为0.7,1.28 mg·L^-1,日内和日间精密度均〈8.0%,提取回收率和方法回收率均〉90%。咖啡因在正常和糖尿病认知功能障碍大鼠体内的药时曲线下面积（AUC0-t）分别为（46.71±4.25）,（61.2±5.44）mg·h·L^-1,半衰期（t1/2）分别为（2.82±0.38）,（3.71±0.13）h,药峰浓度（Cmax）分别为（13.25±2.02）,（17.12±1.08）mg·L^-1,清除率（CL）分别为（0.43±0.08）,（0.33±0.07）L·kg^-1·h^-1。与模型组比较,咖啡因组和绿茶组血糖下降、认知能力和神经元细胞超微结构得到改善。结论：咖啡因在正常和糖尿病认知功能障碍大鼠体内的代谢存在差异,且具有改善糖尿病认知功能障碍的功效,这为绿茶和咖啡因临床用于防止糖尿病认知障碍提供了一定理论依据。

注重幼儿园管理中的思想工作

幼儿园的管理主要足对人的管理,包括对人的思想、行为的管理。人的行为是受思想意识支配的,所以,思想工作就成为幼儿园管理的重要内容。幼儿园的日常管理涉及大量人事问题,诸如人事安排、劳动定额、报酬奖金、工作质量评估等,这些方面都可能出现矛盾和思想问题,这些矛盾和思想问题往往难以通过正式的管理程序如管理指令、管理要求、评估手段等解决,这就要依靠深入细致的思想工作去解决。