地高辛配基标记核酸技术及其应用

核酸探针通过地高辛配基(异羟基洋地黄毒苷配基)标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(Dig-dUTP)随机引物插入结合而被标记,然后辅以免疫酶化学检测等新技术。和放射性同位素标记探针一样,它已广泛用于核酸等物的各种探测及分析,具有灵敏、安全、简便、经济及实用等优点。

非放射性标记的原位杂交技术及其应用

核酸原位杂交技术就是利用碱基序列已知的带有标记的核酸探针与组织切片、细胞或染色体上待测同源核酸进行杂交,从而对样品中待测核酸进行定性、定位和相对定量分析的一种研究方法。依标记物性质不同,可分为放射性和非放射性。前者标记的原位杂交技术虽有较高灵敏度,但它却有不稳定、相对不安全、自显影时间长、废物难以处理及昂贵等缺点,故发展了一种较灵敏、安全、快速、简便及价廉的非放射性标记的原位杂交技术。本文较详细地介绍了它的原理、方法、发展过程、不同的标记检测体系的比较以及应用。

染色体原位杂交

基本原理 核酸原位杂交技术(in situ hybridization of nucleic acids or in situ nu-cleic acids hybridization)是利用硷基序列已知的带放射性或非放射性标记的核酸探针,依硷基互补配对原理,通过放射自显影或非放射检测体系(免疫酶促显色反应和荧光系统等),在组织切片、细胞、间期核及染色体等标本上对待测核酸进行定性、定位及相对定量分析的一种方法,一般称之为原位杂交。

不良孕产史和自发性流产夫妇Dp^+、Gp^+染色体研究

应用细胞遗传学的方法对15例不良孕产史及自发性流产患者Dp^+、Gp^+染色体,和10例年龄相近的正常成年人染色体进行了研究,两组间随体联合(SAS),银染核仁形成区(Ag-NOR)及银染随体联合(Ag-AA)的结果表明,各组间频率差异无显著性意义。

分子细胞遗传学基础与方法的研究

从1986年开始,我们在国内率先开展了分子细胞遗传学的研究,把分子生物学的有关技术同细胞遗传学有机地结合起来,建立并完善了染色体原位杂交技术,并用有关方法进行了基因的物理定位、分子细胞遗传学及间期细胞遗传学研究等,且在全国范围内举办了学习班3次。 1.基因的物理定位(基因物理图谱) 我们将人和小鼠的4个基因定位染色体区带上。(1)

用地高辛配基标记DNA探针及其应用

核酸杂交技术中,同位素标记DNA探针是最常用的技术,其优越性是检测灵敏度高,但同时有很多缺点。80年代初,Langer等开始用生物素标记多核苷酸探针。随着方法的不断完善,近年来已用于基因诊断、定位及表达等研究。本文报道一种新的非同位素标记技术,即用地高辛配基(digoxigenin-dUTP)标记DNA探针,其原理是具有类固醇半抗原性质的地高辛配基,通过随机引物(random pr-imer法)掺入到DNA上,与靶DNA进行碱基互补同源序列结合形成杂交产物。

一个22p^+家系的临床及分子细胞遗传学研究

本文对一例男性性腺发育不全伴有22p^+标记染色体的患者及其家庭成员进行了分子细胞及临床细胞遗传学研究。结果表明,该家系中共有6名成员有22p^+染色体,它们来源于先证者的外祖母。标记染色体的p^+部分几乎与22q等大,C-带呈深染,G-、R-带在p^+中间分别可见一条较窄的浅、深带型,Ag-显带在p^+末端见到较大的银染区,部分p^+出现双NOR,核型分析未见其它D、G组或Y染色体重排。rRNA基因的染色体原位杂交银颗粒沿整个p^+分布,其数目是正常D、G组染色体短臂上平均数的3.9倍。家系研究表明,在6例22p^+携带者中,2例女性具有多次自然流产史,4例男性中除一例年龄12岁未见明显性腺异常外,其余3人均有不同程度性腺或外生殖器异常,结合文献,我们认为此家系中22p^+可能与上述异常表型存在着一定的关系。

一个22p^+家系的临床及分子细胞遗传学研究

本文对一例男性性腺发育不全伴有22p^+标记染色体的患者及其家庭成员进行了 G—、R—、C—、Ag—显带及 rRNA 基因的染色体原位杂交等研究。结果表明,该家系的6例22p^+标记染色体携带者中,22p^+与女性自然流产可能存在着一定的因果关系,而与男性性腺发育不全是否有关,尚需积累更多的资料。

染色体分析准则——初步报告

前言:这些准则由细胞遗传技术工作者协会(ACT:Association of Cytogenetic Technologist)为染色体分析而确立。一个专门小组对几个国家和地区的遗传小组所建立的工作条例进行评审之后,为了使这些建议系统化,制订出指导原则草案,再由专家顾问小组进行评审。所有顾问小组成员都是实验室负责人和本专业领域非常知名的专家。这个专门小组工作的意图是反映出那些确信已被细胞遗传实验室广泛接受并作为染色体有效分析的基本标准的操作程序。

用光敏生物素标记rRNA基因探针进行染色体原位杂交

核酸原位杂交是用核酸探针,经放射自显影或非放射检测体系(免疫酶促显色及荧光系统等),在组织、细胞、间期核及染色体上对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种手段。Pardue和Gall首先在细胞学标本上建立了此方法。