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H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
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作者 侯力嘉 吴胜昔 +4 位作者 龚吕鸿 刘姿怡 杨溪 郭宇 梁望旺 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第16期66-70,75,共6页
为了制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体,从而为建立AIV的诊断方法提供有效试剂,试验将纯化后的H9N2亚型AIV血凝素(HA)蛋白作为免疫原注射至Balb/c小鼠腹腔中,取符合融合标准的小鼠脾脏制成悬液,同小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合... 为了制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体,从而为建立AIV的诊断方法提供有效试剂,试验将纯化后的H9N2亚型AIV血凝素(HA)蛋白作为免疫原注射至Balb/c小鼠腹腔中,取符合融合标准的小鼠脾脏制成悬液,同小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,制备杂交瘤细胞;建立单克隆细胞株的筛选方法以得到能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株,并对其分泌的单克隆抗体进行纯化,测定效价及浓度,并分别检测其与H9N2标准病毒的反应性及特异性。结果表明:经过筛选后共获得3株可持续分泌抗H9N2 AIV HA的单克隆细胞株,分别以2D10D10、1F10E7和5A10C3命名。其中1F10E7细胞株抗体效价可达到1∶128000,浓度最高可达到2.4319 mg/mL;经亚型鉴定,以上3株杂交瘤细胞均为IgG1型。通过特异性试验检测,制备所得HA单克隆抗体只与纯化后的AIV HA抗原结合且与H9N2标准病毒能够发生反应。说明试验制备了针对AIV HA蛋白的单克隆抗体,可为后续禽流感检测方法的研究提供有效试剂。 展开更多
关键词 禽流感病毒 单克隆抗体 血凝素蛋白 特异性 检测试剂 细胞融合
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半夏倍性调查及全基因组Survey分析
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作者 裴艺菲 刘姿怡 +5 位作者 赵贵萍 陈莹莹 张翔宇 陈晓芳 冯雪 李西文 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第19期5158-5165,共8页
半夏Pinellia ternata在我国分布广泛,以块茎入药,有燥湿化痰等功效。其倍性复杂,且目前未获得全基因组图谱,限制了分子辅助育种及多组学的深入研究。该研究首先基于流式细胞术对来自我国16个省市的144株不同表型半夏进行基因组大小评估... 半夏Pinellia ternata在我国分布广泛,以块茎入药,有燥湿化痰等功效。其倍性复杂,且目前未获得全基因组图谱,限制了分子辅助育种及多组学的深入研究。该研究首先基于流式细胞术对来自我国16个省市的144株不同表型半夏进行基因组大小评估,发现其均值为(7.97±0.43)Gb,最高及最低值分别为7.06、9.21 Gb。此外,云南半夏基因组大小相对偏低[(7.24±0.09)Gb],而采自湖北仙桃的紫皮半夏个体间基因组大小较为一致[(8.07±0.04)Gb]。进一步通过根尖染色体计数发现,流式细胞测定结果为8.18 Gb的半夏(2n=8x=104)为八倍体,其余均为非整倍体植株。采用Illumina技术完成该八倍体的75×深度,使用3种方法完成测序结果的K-mer分析。该八倍体半夏基因组大小为7367.082~7541.213 Mb,重复序列比率为91.3%±1.7%,杂合率为1.68%,是一种复杂基因组。该研究开展半夏群体的倍性调查及特定倍性株系的全基因组Survey分析,可为其全基因组测序和组装奠定基础,同时为倍性复杂、纯系缺乏、植株矮小的草药提供可参考的全基因组调查分析策略。 展开更多
关键词 流式细胞术 基因组调查 根尖染色体计数 八倍体 植物组织培养
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基于焦磷酸测序技术的不同淫羊藿基原混合药材粉末鉴定
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作者 刘姿怡 裴艺菲 +3 位作者 冯雪 赵贵萍 陈铁柱 李西文 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2532-2540,共9页
《中华人民共和国药典》中收载多基原药材较多,其不同来源的药材混合使用现象较为普遍,对临床用药的稳定性具有一定影响。本研究采用焦磷酸测序技术,从常用DNA条形码序列中筛选物种特异性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism... 《中华人民共和国药典》中收载多基原药材较多,其不同来源的药材混合使用现象较为普遍,对临床用药的稳定性具有一定影响。本研究采用焦磷酸测序技术,从常用DNA条形码序列中筛选物种特异性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,建立一种快速准确的辨别淫羊藿混合药材粉末中基原种的分子鉴定方法。通过多序列比对分析发现ITS序列第176位(C/T)和196位处(A/G)变异、matK序列第123位处(C/G)变异以及rbcL序列第892位处(A/C)变异可分别作为鉴别箭叶淫羊藿、朝鲜淫羊藿、淫羊藿及柔毛淫羊藿的特有SNP位点。本研究从灵敏性和稳定性两个方面考察了焦磷酸测序和Sanger测序方法在混合样品测序中的适用性。焦磷酸测序方法对混合样品中低含量样品的检测灵敏度高于Sanger测序方法。稳定性考察发现,焦磷酸测序技术对高温95℃水浴45 min后的模板DNA扩增产物仍可获得有效测序结果,而Sanger测序方法的临界点为30 min。本研究开发了一种新的基于焦磷酸测序和特异性SNP位点的淫羊藿混合粉末基原物种鉴定技术,可对淫羊藿药材的混合使用进行快速准确鉴定,灵敏性和稳定性高,也可为药材不同基原物种鉴定及混合药材粉末基原鉴定提供技术支撑,有利于保障临床用药的一致性和稳定性。 展开更多
关键词 淫羊藿 单核苷酸多态性 混合粉末 焦磷酸测序 Sanger测序
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