大鼠主动脉血管平滑肌细胞原代培养与鉴定

目的:建立一种可行的原代血管平滑肌细胞(VSMC)培养方法。方法:严格无菌操作环境下取大鼠胸主动脉及腹主动脉中层组织,通过组织块贴壁法进行原代培养,胰酶消化法进行传代,应用倒置相差显微镜对不同培养时间的细胞进行形态学观察,使用免疫荧光法对培养细胞进行鉴定。结果:原代培养第4~6天时,组织块周围开始有长梭形细胞爬出;第7~9天时,细胞爬出较少的呈网状生长,组织块周围细胞爬出较多的呈漩涡状生长,致密排列呈束状;第10~14天时,细胞呈典型的"峰—谷"样结构,相互融合达80%,此时传代细胞生长速度增快,细胞变大,折光性减弱,免疫荧光染色鉴定可见VSMC特异性的α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)表达,表达的阳性细胞在95%以上。结论:成功建立一种可行的原代VSMC培养方法。

大鼠shRNA-Slfn1重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的:构建大鼠睡眠因子1(Slfn1)基因的发夹状RNA质粒,并进行腺病毒载体包装。方法:根据Rat slfn1基因的转录本设计并合成3个干扰RNA靶点ShRNA-Slfn1(1)、ShRNA-Slfn1(2)及ShRNA-Slfn1(3),并将单链的引物退火成双链oligo序列,连接入双酶切线性化的RNA干扰载体(p DKD-CMV-U6-shRNA)的U6启动子下游,替换掉原来的ccd B基因;利用Admax系统,将3种目的穿梭质粒分别与腺病毒骨架质粒共转染到HEK293细胞中重组获得病毒后进行小量扩增及病毒滴度测定;利用Slfn1过表达腺病毒质粒中目的基因携带Flag标签,通过Western Blot检测Slfn1过表达腺病毒质粒与靶点质粒共转染293T细胞中Flag表达,观察靶点质粒对Slfn1表达的影响。结果:经菌落PCR鉴定获得阳性克隆并测序验证正确,表明构建质粒成功;腺病毒包装ShRNA-Slfn1(1)、ShRNA-Slfn1(2)及ShRNA-Slfn1(3)的病毒滴度分别为1.0×1014ifu/L,2.5×1014ifu/L,6.3×1013ifu/L,Western Blot证实ShRNA-Slfn1(1)及ShRNA-Slfn1(3)能显著降低转染293T细胞中Flag的表达,确定shRNA-Slfn1(1)及shRNA-Slfn1(3)为目的质粒。结论:成功构建了大鼠shRNA-slfn1的重组腺病毒载体。

Slfn1对大鼠平滑肌细胞增殖的影响及机制

目的探讨睡眠因子1(Slfn1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及机制。方法麻醉处死56只雄性SD大鼠,剪取腹主动脉到主动脉弓的血管段、分离中膜组织块体外培养4~5 d,采用免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定平滑肌细胞;感染复数(MOI)为1×10^(2)、1×10^(3)、1×10^(4)浓度Slfn1的重组腺病毒干扰质粒转染VSMCs 48 h,通过荧光显微镜及流式细胞仪检测不同MOI组VSMCs中有绿色荧光蛋白(eGFP)的细胞/总细胞的百分比,确定最佳MOI用于后续实验,并分为Slfn1干扰组(用Slfn1的重组腺病毒干扰质粒转染)、Slfn1干扰对照组(用Slfn1的重组腺病毒干扰空载体质粒转染)及空白对照组(用正常血清培养),采用聚合酶链式反应(PCR)检测3组Slfn1信使RNA(mRNA)的表达,CCK-8检测VSMCs增殖;提取RNA进行高通量RNA测序、并通过R语言分析,寻找差异基因,对差异基因进行基因本体(GO)和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析。结果原代培养VSMCs第10~15天时,细胞呈典型的“峰谷”样生长形态,细胞免疫荧光法显示VSMCs胞质内有α-SMA表达,鉴定为VSMCs;Slfn1的重组腺病毒干扰质粒转染VSMCs 48 h后,1×10^(3)MOI组VSMCs中质粒的转染效率高(90%);PCR结果示Slfn1干扰组VSMCs中Slfn1 mRNA表达减少(P<0.05),CCK8结果显示Slfn1干扰组VSMCs增殖增加(P<0.05);用Slfn1重组腺病毒干扰质粒转染VSMCs 48 h,提取RNA进行高通量RNA测序及R语言分析结果显示,差异基因中上调基因94个,下调基因181个;GO和KEGG富集分析显示,Slfn1基因可能通过蛋白质糖基化、mRNA监测通路、鞘脂类信号通路等调控VSMCs的增殖。结论基因干扰VSMCs的Slfn1可促进VSMCs的增殖,其机制可能与蛋白质糖基化、mRNA监测通路及鞘脂类信号通路等调控有关。

公安机关现代执法理念之思考

执法理念是公安机关执法活动的指导思想,对警察执法行为起到影响和制约的作用。在当前社会转型的大背景下,传统执法理念已经不能适用于当下的执法环境,其中暴露出来的一些偏差和弊端已经不能被群众接受,导致公安机关公信力下降,产生诸多社会问题。现阶段,公安机关必须树立现代执法理念以达到执法效果和社会效果的统一,赢得社会各界和广大群众的支持。在探索公安机关现代执法理念的过程中,应当把法律至上、权利本位、服务为民、程序正义、和谐执法五个理念确定为现代执法理念的核心。

我国食品安全犯罪刑事政策研究

我国《刑法修正案(八)》对食品安全领域的犯罪分别从严密法网和严厉处罚两方面进行了一定调整,但在实际的刑事司法、刑事执法过程中,由于难以操作、缺乏协调等原因,大大降低了食品安全犯罪人被惩罚的概率。针对食品安全领域的犯罪,应坚持贯彻"宽严相济,以严为主"的刑事政策,并适当地引入严格刑事责任理念。

社会管理的现状及新对策

改革的深化以及市场经济的发展,社会出现了许多新的情况:随着城市化进程的加快,大量的农村人口涌入城市,对这部分人进行有效的管理包括户籍管理提出了严峻的挑战;诸如土地买卖、房屋拆迁的群体性事件增多;对于网络这个虚拟社会的管理也显得非常重要。上述这些问题都对公安机关新形势下在社会管理方面提出了挑战。本文从公安机关的性质职能、社会管理方面的特征等入手通过分析现阶段社会管理方面面临的问题及原因,提出了公安机关在社会管理方面的建议,以期能提高我国公安机关的管理效率,为和谐社会的建立提供一个良好的环境。

浅析福建客家土楼特征及管理开发

福建客家土楼是世界独一无二的山区大型夯土民居建筑,同时作为世界文化遗产,其蕴藏着丰厚独特的客家文化资源。本文从福建客家土楼的概述、客家土楼特征以及针对土楼的管理开发方面进行了相关研究分析。

青少年耻骨联合结核1例报告

耻骨联合结核在临床上比较少见,国外统计发病率为骨关节结核的0.09%~0.53%,而青少年耻骨联合结核更少见。最近我院收治青少年耻骨联合结核病例1例。1病历摘要患者,男,10岁。因一年前患者无明显诱因出现耻骨联合处疼痛就诊当地医院,当时给予消炎止痛后,症状缓解后出院,半年前,患者再次出现耻骨联合处疼痛,

中国短视频行业的现状分析

短视频^（[1]）即短片视频,是一种互联网内容传播方式,一般是在互联网新媒体上传播的时长5分钟以内的视频传播内容;主要依赖移动终端实现快速拍摄、美化和编辑,可在社交媒体平台上实现分享和无缝对接的一种新型视频形式。它融合了文字、语言和视频,可以更加直观、立体地满足用户的表达、沟通需求,满足人们之间展示及分享的诉求。随着移动终端普及和网络的提速,短、平、快的大流量传播内容逐渐获得各大平台、粉丝和资本的青睐。

以美塑人:中小学教学体系中的影视育人研究

随着信息技术的不断变革,信息接收终端越发多元化,社会大众逐渐适应在不同平台接收各种形态的媒体内容,比如文字、图片、视频等。在融媒体时代,促使人类获取信息的方式和对社会的认知伴随着新媒体的广泛普及发生了巨大变化。科技的高速发展催生了移动互联网时代,丰富了信息的传播渠道和传播内容,信息的传播变得空前迅速,文字语言的传播时代逐渐转变为视听语言时代。

媒介融合视阈下短视频对突发事件新闻效果的影响研究

年末岁初的新冠肺炎疫情是新中国成立以来传播速度最快、感染范围最广、防控难度最大的重大突发公共卫生事件。此次疫情的暴发具有极强的突发性、偶然性和影响力,严重威胁到了中国人民的生命安全和国家的经济发展,关系到整个民族的安危。而且,这次疫情和1998年抗洪、2008年汶川地震和北京奥运会等有很大的不同。与它们相比,此次疫情持续的时间更长,影响的人数更多,发生的范围更广,所以它对宣传动员的要求也更高、更深入。

新媒体时代下广播电视专业教学改革

随着市场经济的发展,媒体行业为了与时俱进,加快了改革的步伐,在全国的各大高校中先后进行了教学改革。传媒类的各大专业也面临着巨大的挑战,其中,广播电视专业面临着严峻的考验,只有加快革新的步伐,才能满足时代的要求。互联网时代的到来,给新媒体带来了崭新的发展机会,促使广播电视加快专业建设。新媒体时代下,学生要夯实自身的专业基础,提升综合素养,其中,采访、策划、撰稿、剪辑等能力都是必不可少的。本文分析新媒体对广播电视专业产生的影响,提出教学改革的措施,希望可以为推动广播电视专业的教学改革作出贡献。

融媒体背景下新闻传媒专业实践教学存在的问题及改革策略——以贵州师范学院传媒专业为例

融媒体和新文科时代的到来,使得高校新闻传媒专业教学面临诸多挑战,教学目标需要转向为一体化复合型、应用型人才的培养,以适应融媒体行业的就业环境。本文以贵州师范学院传媒专业为例,从培养复合型、应用型人才的思路出发,探究有效的综合性应用型人才实践教学的改革办法,旨在促进贵州师范学院学生的实验教学条件,完善实践教学体系,充分满足实践教学内容,从而提升学生的实践能力,提高贵州师范学院新闻传媒人才培养的质量和水平,为当地媒体单位培养和输送高素质传媒人才。

行政管理工作与高校思想政治教育的契合研究

改革开放以来,在"科教兴国"战略的指导下,各地高校进行了教育改革,但改革推进过程中,涌现了很多新兴问题。特别是高校开展相关性工作中遇到的问题,如行政管理工作与高校思想政治教育之间就存在很多管理契合点。如果高校在改革过程中,能够准确地发现和把握这些契合点,必然会大大提高高校改革的效率。因此,本文将进一步寻找思想政治教育与行政管理之间的密切关系,找寻二者契合点下的工作方法。

网站在城市国际形象传播中的作用——以www.hello-guizhou.com网站为例

新媒体不仅弥补了传统媒体的短板,而且颠覆了传统的传播方式、传播渠道、传播范围和传播速度,形成了一套快速、高效、广泛的传播模式,我们称之为城市营销传播。在全球经济、信息高速传播的今天,网站这一传播载体通过丰富的科技手段实现了麦克卢汉"地球村"的概念,通过海量、丰富、多形态的内容提供,在塑造城市国际形象和城市品牌文化建设的过程中起着至关重要且不可替代的积极作用。

贵州广播电视台动静MCN发展现状与升级路径探析

全媒体时代下,短视频快速兴起,MCN成为了广电实现全媒体转型的风口。有效结合现代新闻传播规律和新媒体的传播特点,实现信息、技术、人才、平台的深度互融互通成为了当今广电融媒体发展的重要使命。以贵州广播电视台动静MCN为研究对象,分析其现阶段发展的优势和存在的问题、难题,运用创新扩散理论从创新扩散过程和影响采用率的创新特征有指向地对贵州广播电视台MCN进行具体分析,从内容运营、盈利模式、产业生态和服务媒体四个方面,通过对比研究和媒体市场分析,探究出贵州广电媒体利用MCN转型重构媒体影响力和商业生态过程中的有效路径及发展策略,旨在为贵州主流媒体实现全面升级提供参考借鉴。

中国(广西)—东盟公共卫生建设合作建议

中国与东盟地理位置邻近,经贸往来频繁,多年来面临着区域公共卫生传染病安全的严峻威胁。艾滋病AIDS、SARS病毒、寨卡病毒、禽流感、甲型H1N1流感以及新型冠状病毒感染(COVID-19)等,给中国和东盟国家带来了巨大的危害。近年来,我国所面临的国内国际形势均发生了重大变化,基于当前复杂的国际形势和严峻的传染病疫情情况,中方与东盟国家正在积极探索有效的公共卫生合作模式,以应对传染病危机,对推动后疫情时代经济社会恢复,打造独有的中国—东盟卫生健康共同体,加快公共卫生区域开展合作的步伐,具有重要的现实研究意义。

马凡氏综合征个案1例

马凡氏综合征(marfan′s syndrome)又名蜘蛛指(趾)综合征,属于一种先天性遗传性结缔组织疾病,为常染色体显性遗传,以FBN1基因突变类型较多,常有家族史^([1]),主要累及骨骼、眼和心血管系统^([2-3])。心血管方面表现为大动脉中层弹力纤维发育不全,主动脉或腹总主动脉扩张,形成主动脉瘤或腹总主动脉瘤,主动脉扩张到一定程度后,将导致破裂死亡。目前,公认的马凡氏综合征诊断标准①家族史,家族中有确诊的马凡氏综合征病人,分析家谱应符合常染色体显性遗传规律.

广西南宁市市区流动人口常见传染病防治知识知晓率与影响因素分析

目的了解广西南宁市市区流动人口常见传染病防治知识的知晓率与影响因素,为进一步完善流动人口常见传染病防治工作提供参考。方法采用概率比例规模抽样法(probability proportionate to size sampling,PPS),通过入户方式对南宁市市区5101名流动人口开展常见传染病防治知识的问卷调查,采用描述性分析方法对该人群常见传染病知识知晓情况进行分析。结果广西南宁市市区流动人口常见传染病防治知识总体知晓率59.56%。不同年龄、不同文化程度、不同居住年限和卫生行为情况不同的流动人口常见传染病防治知识知晓率比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。10道常见传染病防治知识题中,流动人口对“乙肝的传播途径”的知晓率最高(85.61%),对“肺结核的治疗措施”的知晓率最低(69.93%)。多因素logistic回归分析结果显示年龄(40~<50、50~56岁OR=0.485、0.632)、文化程度(高中/职高OR=1.722)和良好卫生行为(OR=3.381)是流动人口常见传染病防治知识知晓的独立影响因素。结论广西南宁市市区流动人口对于肺结核和流感等常见传染病防治知识知晓率较低,需建立和完善流动人口健康促进工作网络,促使流动人口形成正确的常见传染病防治观、行为观,其中年龄较大及文化程度较低的群体是流动人口常见传染病防治的重点宣传对象。

大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中转染效率的测定

目的构建大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体并观察其在大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率。方法针对大鼠TRPC4序列设计4个RNA干扰靶点序列并合成双链DNA oligo,连接入干扰载体后转入大肠杆菌感受态细胞,培养后挑取转化子进行PCR鉴定及测序比对。利用Admax包装系统获得重组腺病毒Ad-shRNA-TRPC4小量扩增并测定病毒滴度,检测重组腺病毒对TRPC4表达的影响,最后将获得的重组腺病毒转染EPCs,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪测定其转染效率。结果 4组干扰质粒经培养后的转化子中均有阳性克隆,且阳性克隆与设计的干扰靶点序列一致;4组目的质粒均可抑制TRPC4蛋白的表达,合成的Ad-shRNA-TRPC4病毒滴度为5×1010 ifu/mL;倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测重组腺病毒在大鼠EPCs的转染效率分别为(85.47±2.05)%和(67.27±2.94)%。结论本实验成功构建Ad-shRNA-TRPC4载体,其在EPCs的转染效率高。