C反应蛋白对3T3-L1脂肪细胞内高分子量多聚体脂联素表达和脂联素多聚化水平的影响

目的 C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)作为炎症因子在糖尿病等代谢相关疾病早期即显著升高,而脂联素具有抗炎、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化,在糖尿病疾病中表达水平下降。探讨CRP对3T_3-L1脂肪细胞内高分子量多聚体脂联素(high molecular weight adiponectin,HMWA)和脂联素多聚化水平的影响。方法选用3T_3-L1脂肪前体细胞株,诱导分化成熟后,50μg/m L CRP刺激0、6、12、24 h后或0、5、25、50μg/m L刺激24 h分别收集蛋白,通过Western blot方法检测HMWA表达。0、50μg/m L刺激24 h后,实时定量PCR检测脂联素多聚化相关调控基因(Ero1-L、Dsb A-L、ERp44)水平。结果与0μg/m L的CRP对HMWA的表达量(1.00±0.00)比较,5μg/m L的表达量(0.88±0.17)有所下降(P>0.05),而25、50μg/m L的相对表达量(0.70±0.07、0.44±0.07)明显下降(P<0.05)。与CRP诱导0 h脂联素表达(1.00±0.00)比较,诱导6 h的表达(0.84±0.07)差异无统计学意义(P>0.05),而诱导12、24 h后,脂联素表达(0.71±0.06、0.48±0.11)明显下降(P<0.05)。与CRP 0μg/m L相比,CRP 50μg/m L刺激24 h后,Ero1-L基因、Dsb A-L表达降低,而ERp44显著升高(P<0.05)。结论 CRP通过减少HMWA的表达以及抑制脂联素多聚化以减弱脂联素在疾病中所起的积极作用,从而部分参与了CRP加速炎症相关代谢疾病的发生发展。

血清C反应蛋白/高分子量脂联素比值检测在代谢综合征中的价值

目的探讨血清C反应蛋白(CRP)/高分子量脂联素(HMWA)比值与代谢综合征(MS)的相关性,分析CRP/HMWA比值作为一种新的生物学标志物在预测MS过程中与单独使用CRP、HMWA相比是否具有优势。方法共纳入研究对象170例,根据2009年国际多学会联合声明(JIS)的MS诊断标准分为MS组(n=94)和非代谢综合征(non-MS)组(n=76);所有研究对象均行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素释放试验。采用ELISA法测定血清HMWA浓度,采用化学发光法测定血清CRP浓度。结果 MS组血清CRP/HMWA比值水平高于non-MS组(P<0.01)。简单相关分析显示,血清CRP/HMWA水平与体质指数(BMI)、腰围(WC)、腰臀比(WHR)、收缩压(SBP)、空腹血糖(FPG)、OGTT 2 h血糖(2h PG)、空腹胰岛素(FIns)、OGTT 2 h胰岛素(2h Ins)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、CRP呈正相关(P<0.05或P<0.01),与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胰岛β细胞功能(HOMA-β)、HMWA呈负相关(P<0.01)。Logistic回归显示,血清CRP/HMWA升高是MS的危险因素(P<0.05)。高CRP低HMWA组MS检出率高于低CRP高HMWA组(P<0.01)。血清CRP/HMWA预测MS的ROC曲线下面积高于CRP及HMWA(P<0.05)。结论与血清CRP、HMWA相比,用血清CRP/HMWA预测MS更有价值。

超重/肥胖患者血清netrin-1水平及其影响因素分析

目的：观察超重/肥胖患者血清神经导向因子netrin-1水平,探讨其与肥胖、糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系。方法：以体质量指数（BMI）25 kg/m2为切点将150例研究对象分为正常体质量组76例和超重/肥胖组74例,再根据75 g口服葡萄糖耐量试验（OGTT）结果将两组患者分为正常糖耐量（NGT）和新诊断2型糖尿病（T2DM）亚组。检测各组腰围、腰臀比、糖化血红蛋白（Hb A1c）、血糖、胰岛素、血脂及netrin-1水平。结果：超重/肥胖组血清netrin-1水平[367.87（268.42-545.09）ng/m L]明显低于正常体质量组[444.95（372.69-668.16）ng/m L,P〈0.01]。超重/肥胖组的NGT亚组和T2DM亚组netrin-1水平分别低于正常体质量组的NGT亚组和T2DM亚组（P〈0.01）。随着血清netrin-1水平增加,BMI及腰围水平下降。相关性分析显示,血清netrin-1水平与年龄呈正相关（P〈0.05）,与BMI及腰围呈负相关（P〈0.01）。多元逐步回归分析提示,年龄及BMI是血清netrin-1水平的独立影响因素。结论：血清netrin-1水平与BMI水平密切相关,其水平下降可能参与了肥胖的发生发展。

Betatrophin重组腺病毒过表达载体的构建

目的:应用基因同源重组技术,构建及鉴定携带小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究betatrophin的功能奠定基础。方法:根据基因库中登录的小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)序列,经化学合成得到含Bam HⅠ/AgeⅠ酶切位点的小鼠betatrophin基因全长c DNA质粒,将其酶切后插入到带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的GV314载体CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP中,得到重组病毒穿梭质粒p GV314-betatrophin;经Bam HⅠ/AgeⅠ双酶切后,与线性化的p DC315病毒基因组质粒体外同源重组,构建含有目的基因的腺病毒载体Ad-betatrophin,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,利用聚合酶链式反应(PCR)、蛋白质印迹法及测序鉴定重组的腺病毒。结果:阳性克隆质粒Ad-betatrophin在HEK293T细胞中成功包装出重组病毒,经PCR、蛋白质印迹及测序检测表明重组腺病毒包装成功。结论:成功构建了携带小鼠betatrophin基因的复制缺陷型重组腺病毒过表达载体。

初诊2型糖尿病合并代谢综合征患者血清高分子量脂联素水平与胰岛素抵抗、C反应蛋白的相关性

目的观察初诊2型糖尿病(T2DM)合并代谢综合征(MS)患者血清高分子量脂联素(HMW-APN)水平及其与胰岛素抵抗(IR)、C反应蛋白(CRP)的相关性。方法选取研究对象168例,分为健康人对照组80例及初诊T2DM患者88例;初诊T2DM患者再根据是否合并MS分为单纯T2DM组45例和T2DM合并MS组43例。研究对象均行75 g口服葡萄糖耐量试验及胰岛素释放试验,并检测血清HMW-APN、CRP、血脂等相关生化指标。结果与健康人对照组比较,T2DM合并MS组及T2DM组血清HMW-APN水平降低(P<0.01),以T2DM合并MS组最低。T2DM合并MS组及T2DM组血清CRP升高(P<0.01),以T2DM合并MS组最高。简单相关分析显示,血清HMW-APN水平与体质指数(BMI)、腰围(WC)、腰臂比(WHR)、收缩压(SBP)、空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(2h PG)、糖化血红蛋白Alc(Hb A1c)、三酰甘油(TG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及CRP呈负相关(P均<0.01),与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)呈正相关(P均<0.01)。多元逐步回归分析显示,WC、2h PG及CRP是血清HMW-APN水平的独立影响因素(P均<0.01)。Logistic回归分析显示,HMW-APN是T2DM发生MS的保护因素,BMI、FPG、SBP、TG是其危险因素(P<0.01或P<0.05)。结论血清HMW-APN水平在初诊T2DM合并MS患者中降低,其与IR及CRP密切相关,在初诊T2DM合并MS的发生、发展中起保护作用。

原发性高血压患者血清高分子质量脂联素水平及其影响因素

目的:观察原发性高血压患者血清高分子质量(high molecular weight,HMW)脂联素水平,探讨其与血压、肥胖、糖脂代谢、胰岛素抵抗及超敏C反应蛋白(hs-CRP)的关系。方法:纳入76例研究对象,以有无原发性高血压分为对照组和高血压组(各38例)。所有研究对象均行口服75g葡萄糖耐量试验(OGTT),检测空腹血糖、餐后2 h血糖(2 h PG)、空腹胰岛素(FINS)、餐后2 h胰岛素(2 h INS)及血脂水平,并以稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用化学发光法检测血清hs-CRP水平,酶免法检测HMW脂联素水平。结果:高血压组血清HMW脂联素质量浓度为0.82(0.46~1.46)ng/L,明显低于对照组[2.53(1.70~5.75)ng/L,P<0.01]。相关分析显示血清HMW脂联素与收缩压、舒张压、平均动脉压(MAP)、体质量指数(BMI)、腰臀比、三酰甘油、空腹血糖、2 h PG、HOMA-IR、hs-CRP呈负相关,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈显著正相关。多元逐步回归分析提示收缩压、三酰甘油是血清HMW脂联素水平的独立影响因素(P<0.05)。二分类Logistic回归分析表明,HMW脂联素是高血压的保护因素(P<0.01)。结论:原发性高血压人群血清HMW脂联素水平明显降低,且与血压、肥胖、糖脂代谢、胰岛素抵抗及hs-CRP密切相关,提示低HMW脂联素血症可能参与了原发性高血压的发生发展。

新诊断2型糖尿病患者血清催产素水平与胰岛素抵抗、C 反应蛋白的相关性

目的：观察肥胖及2型糖尿病患者体内血清催产素及超敏 C 反应蛋白（hs-CRP）水平,探讨催产素与 hs-CRP、糖脂代谢、胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能的关系。方法选取研究对象176例,其中新诊断2型糖尿病（T2DM）患者88例、正常糖耐量（NGT）个体88例,以体重指数25 kg/ m2为切点将研究对象分为正常体重（NW）亚组和肥胖（OB）亚组。所有研究对象均行口服75 g 葡萄糖耐量试验（OGTT）,检测HbA1C、空腹血糖、餐后2 h 血糖、空腹胰岛素、餐后2h 胰岛素及血脂水平,并以稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及胰岛β细胞功能（HOMA-β）。采用化学发光法检测 hs-CRP 水平,采用酶免法检测血清催产素水平。结果 T2DM 组血清催产素水平显著低于 NGT 组（P〈0.01）,T2DM 组血清 hs-CRP 水平显著高于 NGT 组（P〈0.01）。在 T2DM 组和 NGT 组内,OB 亚组催产素水平均低于对应的 NW 亚组[7.16（6.45~8.82）对7.98（7.03~9.17） ng/ L；9.23（8.16~10.36）对9.86（8.77~12.06） ng/ L, P〈0.05]；OB亚组 hs-CRP 水平均高于对应的 NW 亚组[0.99（0.25~1.97）对0.54（0.19~0.91） mg/ L；3.47（1.63~6.20）对1.65（0.81~3.81） mg/ L, P〈0.05]。相关性分析显示血清催产素与 hs-CRP、体重指数、腰围、腰臀比、HbA1C、空腹血糖、餐后2 h 血糖、空腹胰岛素、餐后2 h 胰岛素、总胆固醇、甘油三酯、LDL-C、HOMA-IR呈负相关（P〈0.05或 P〈0.01）,与 HOMA-β呈显著正相关（P〈0.01）。根据 hs-CRP 水平将研究对象按三分位分组,随着 hs-CRP 水平升高,催产素水平显著降低（P〈0.05或 P〈0.01）。结论血清催产素水平在肥胖及2型糖尿病患者体内降低,其与炎症程度、体重指数、糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能密切相关,提示催产素可能参与肥胖和2型糖尿病的发生发展。

血清高分子量脂联素水平与代谢综合征及其组分的相关性研究

目的探讨血清高分子量脂联素(HMW-APN)水平与MS及其组分的相关性。方法根据2005年IDF的MS诊断标准将受试者分为MS组69例和非MS(Non-MS)组69例,采用ELISA检测各组血清HMW-APN浓度;再根据血清HMW-APN水平三分位水平分为HMW-APN<1.36 mg/L组、1.36mg/L≤HMW-APN<2.45 mg/L组和HMW-APN≥2.46 mg/L组,检测各组各项临床指标。结果 MS组血清HMW-APN水平低于Non-MS组[2.82(1.82,5.55)vs 1.16(0.72,1.66)mg/L,P<0.01]。单相关性分析显示,血清HMW-APN水平与HDL-C、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)呈正相关,与WC、颈围(NC)、BMI、WHR、SBP、FPG、2hPG、FIns、2hIns、HbA1c、TG、TC和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)呈负相关。多元线性回归分析结果显示,WC、2hPG和SBP是血清HMW-APN水平的独立影响因素。HMW-APN<1.36mg/L组、1.36mg/L≤HMW-APN<2.45 mg/L组和HMW-APN≥2.46组MS患病率分别为86.9%、52.1%和10.9%(P<0.05)。结论随着血清HMW-APN水平升高,MS患病率降低,提示HMW-APN在MS发生发展中发挥重要作用。