复合益生菌及植物精油添加剂联用对湖羊生长性能和血清生化指标的影响

试验旨在探究在全混合日粮中联合使用复合益生菌及植物精油添加剂对湖羊育肥期的增重情况、生长性能及代谢水平的影响。试验将36只公湖羊随机分成3组(对照组、复合益生菌组、复合益生菌+植物精油组),每组12只,体重为(20.00±2.00)kg,在饲喂全混合日粮的基础上添加不同的饲料添加剂,试验周期为56 d,在试验的第0、28、56天分别称体重,计算日均增重;记录日采食量,计算料重比;采集颈静脉血液,分离血清,检测生化指标。结果表明,添加益生菌+植物精油组绵羊日均增重(135.86±10.16)g,与对照组相比极显著增加(P<0.01);料重比为3组间最低(7.94±0.42),与对照组相比显著降低20.40%(P<0.05);生化指标在第56天总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)含量显著高于对照组(P<0.05),ALB含量在饲喂期间均显著高于其他两组(P<0.01)。由此可见,日粮中联合使用复合益生菌和植物精油添加剂可使湖羊在育肥期间体重迅速增长,提高日采食量,有效降低料重比,改善血液生化指标,进而提高代谢水平,有利于绵羊的生长发育。

miR-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖

【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子,在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示,miR-535能够影响山羊产羔数,但具体调控机制尚不清楚。【目的】通过研究miR-535靶向GAB2(GRB2 associated binding protein 2)及其相关信号通路PI3K/AKT对山羊颗粒细胞增殖的影响,进一步探讨其分子生物学调控机制。【方法】在本研究中,选择具有两胎以上产羔记录的高、低产云上黑山羊各3只,同期发情处理后采集卵泡期卵巢组织,收集原代颗粒细胞。使用荧光定量PCR(reverse transcription-quantitativePCR,RT-qPCR)检测miR-535和GAB2在云上黑山羊高、低产卵巢组织中的表达量。构建GAB2的过表达/干扰载体,使用RT-qPCR、Western blot、免疫荧光、CCK8、EdU和细胞凋亡检测候选基因GAB2对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响。使用miRDB和miRanda软件预测miR-535和GAB2的靶向关系,构建GAB2的野生型和突变型载体,利用双荧光素酶活性检验检测miR-535和GAB2的靶向关系。构建过表达/干扰miR-535载体,探究其颗粒细胞增殖及下游基因功能的影响。【结果】RT-qPCR结果显示,GAB2在高产云上黑山羊卵巢组织中的表达量显著低于低产个体,miR-535的表达则相反(P<0.05);随后,RT-qPCR和Westernblot结果表明,在颗粒细胞中过表达GAB2后,CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著升高(P<0.05),BAX的表达量显著降低(P<0.05),抑制其表达则与之相反;EdU和CCK8检测显示,GAB2过表达后显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05),抑制其表达后则相反;双荧光素酶报告试验表明,miR-535抑制了GAB2基因3’UTR区域的双荧光素酶活性。RT-qPCR和Western blot结果显示,在颗粒细胞中过表达miR-535后,GAB2、CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著降低(P<0.05),BAX的表达量显著升高(P<0.05),抑制其表达后则与之相反;EdU和CCK8检测显示,miR-535过表达后抑制颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反;细胞凋亡试验表明,miR-535过表达后促进颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反。在颗粒细胞中抑制miR-535后,发现PI3K/AKT信号通路标志因子AKT1的表达水平显著升高(P<0.05)。【结论】miR-535通过抑制GAB2的表达,抑制了山羊颗粒细胞的增殖,为进一步探究miR-535调控山羊颗粒细胞的生物学功能提供了理论依据。

添加IGF-1对体外培养不同直径猪卵泡中卵母细胞成熟率的影响

本研究旨在探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对猪不同直径卵泡卵母细胞体外成熟效率的影响,采用抽吸法从母猪卵巢中获取卵丘-卵母细胞复合体(COCs),随机分为2组,分别用添加IGF-1和未添加IGF-1成熟工作液进行体外培养,再根据卵泡直径将COCs各分为3组(2~3、3~5 mm和5~8 mm),检测卵丘扩展率、第一极体排出率、谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)含量判断卵母细胞成熟情况。结果显示:添加IGF-1组(30 ng/mL)的卵丘扩展率和第一极体排出率高(P<0.05);添加IGF-1组的GSH含量高于未添加组(P<0.05)。随后分离不同直径卵泡中COCs发现,添加IGF-1的3~5 mm组卵丘扩展率和第一极体排出率最高;而GSH和ROS含量测定显示,添加IGF-1的5~8 mm组GSH含量最高,而ROS荧光强度最低,其次是3~5 mm组,上述2组与2~3 mm组差异显著。综上所述,添加IGF-1可以显著影响3~5 mm卵泡卵丘扩展率和第一极体排出率,同时改善了猪3~5 mm和5~8 mm卵泡中卵母细胞的氧化还原状态。

褪黑素及其受体对哺乳动物卵巢调控作用机制的研究进展

褪黑素是一种胺类激素,广泛存在于多种动物体内,具有较强的抗细胞衰老和抗氧化应激的效果,在哺乳动物的器官、组织和细胞中参与重要的生理活动过程,同时也在动物卵巢卵泡的生长、发育、排卵等重要繁殖过程中发挥着不可忽视的调控作用。文章综述了哺乳动物卵泡的生长发育及排卵过程、褪黑素的生物学功能、褪黑素受体信号的转导作用和褪黑素对哺乳动物卵巢的调控作用,以期为研究褪黑素在未来畜牧业生产中的应用提供参考。

苏尼特绵羊垂体季节性发情关键miRNA及其靶基因验证

为研究绵羊季节性发情性状相关分子调控机制,基于实验室前期不同光照下苏尼特绵羊垂体的转录组测序结果分析,筛选出与季节性发情相关的重要候选基因及其调控元件ARHGEF9-Novel_307、CACNB3-Novel_181、PBX1-Novel_387,为了进一步明确这些候选基因及其元件的功能,本研究通过荧光定量PCR(RT-qPCR)和生物信息学分析探讨其与绵羊季节性发情的关系。以饲养于不同光照羊舍中经双侧卵巢切除+雌二醇皮下注射(OVX+E2)处理的苏尼特绵羊为研究对象,采集垂体、下丘脑、子宫、心、肝、脾、肺和肾等组织进行研究。结果显示,ARHGEF9、CACNB3、PBX1和Novel_307、Novel_181、Novel_387均在垂体中表达。CACNB3、PBX1和Novel_307在短光照处理21 d(SP21)垂体组织中的表达显著高于长光照处理21 d(LP21),ARHGEF9、Novel_181、Novel_387在SP21垂体组织中的表达显著低于LP21,和转录组测序结果趋势相同。ARHGEF9-Novel_307、CACNB3-Novel_181、PBX1-Novel_387之间存在表达负相关性,与miRNA-mRNA整合分析结果一致;蛋白互作网络分析(PPI)表明,ARHGEF9、CACNB3、PBX1蛋白与DIO2、DIO3、TSHB等季节性发情标志蛋白存在关联性。综上所述,ARHGEF9、CACNB3、PBX1可能参与苏尼特羊季节性发情性状的形成,且Novel_307、Novel_181、Novel_387与候选基因之间存在负相关,可能调控候选基因的表达。

可变剪接体WNT4-β对山羊卵泡颗粒细胞增殖和激素分泌的影响

旨在研究WNT4的一个可变剪接体(WNT4-β)对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取4~6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,体外分离卵泡颗粒细胞进行培养。通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置;在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后,利用RT-qPCR、Westernblot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、CDK4的表达变化;CCK-8技术检测颗粒细胞增殖情况;并通过ELISA分析颗粒细胞中生殖激素水平的变化。免疫荧光染色结果显示,WNT4-β只在山羊卵泡颗粒细胞中表达,在卵母细胞不表达;过表达WNT4-β后,WNT4-β和颗粒细胞增殖因子cyclin-D2、CDK4的mRNA相对表达量极显著增加(P<0.01),蛋白表达水平显著增加(P<0.05);WNT信号通路标记因子ROA1、RHOA mRNA表达水平显著增加(P<0.05),β-catenin蛋白表达水平显著增加(P<0.05);干扰WNT4-β后,WNT4-β、cyclin-D2、CDK4、ROA1和RHOA的mRNA表达显著降低(P<0.05),WNT4-β、cyclin-D2、CDK4及β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。CCK-8结果显示,过表达WNT4-β促进颗粒细胞增殖(P<0.05);ELISA结果显示,过表达WNT4-β后,颗粒细胞中雌二醇(estradiol,E_(2))水平显著增加(P<0.05),孕酮(progesterone,P_(4))水平升高但不显著(P>0.05);干扰WNT4-β后则结果相反,颗粒细胞增殖受到抑制(P<0.05),E_(2)和P_(4)的水平显著降低(P<0.05)。综上所述,WNT4可变剪接体WNT4-β通过调控WNT信号通路促进山羊卵泡颗粒细胞增殖及类固醇激素分泌,本研究为解析WNT4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础。

miR-376b-5p调控绵羊产羔性状相关基因IGF1的表达

为探讨miR-376b-5p靶向调控IGF1影响绵羊多羔性状的分子机制,本研究根据产羔记录选取高、低产羔数小尾寒羊各5只,同期发情处理后,采集卵泡期卵巢及其他6个组织,通过RT-qPCR、Western blot和双荧光素酶报告基因检测系统分析miR-376b-5p与IGF1在高、低产羔数小尾寒羊各组织中的表达量;并确定二者之间的靶向关系;随后,将体外合成的miR-376b-5p模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染至绵羊卵巢颗粒细胞中,检测miR-376b-5p对IGF1表达水平的调控情况,同时对多羔性状TGF-β信号通路中TGFβ1和PTGS2标志因子的表达进行分析。结果表明:1)组织表达谱显示,IGF1在绵羊卵巢组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.05);RT-qPCR和Western blot显示,IGF1在高产羔数小尾寒羊卵巢组织中的表达量极显著高于低产羔数小尾寒羊(P<0.01);miR-376b-5p定量结果显示其表达趋势与IGF1相反(P<0.01);2)在线软件预测和双荧光素酶报告系统检测显示,miR-376b-5p可靶向结合IGF1 3′UTR序列;3)在绵羊卵巢颗粒细胞中过表达miR-376b-5p后,IGF1蛋白和mRNA表达水平均显著下降(P<0.05),而抑制miR-376b-5p后则相反,表明miR-376b-5p可显著抑制IGF1的表达;4)在绵羊卵巢颗粒细胞中过表达miR-376b-5p后,TGF-β信号通路中TGFβ1、PTGS2的表达量均显著低于阴性对照组(P<0.05)。综上所述,在绵羊卵巢颗粒细胞中miR-376b-5p靶向结合IGF1 3′UTR区域,并通过抑制IGF1和TGF-β信号通路调控颗粒细胞增殖及绵羊繁殖,为进一步揭示绵羊多羔性状形成的分子机制及分子育种提供理论基础。