目的:研究Fe^(3+)和Cys对CHO细胞表达免疫球蛋白G(IgG)电荷异构体比例的影响。方法:在补料分批培养外泌表达IgG的CHO细胞株中,以不同的策略单独或联合添加不同浓度的Fe^(3+)或Cys;培养14 d后离心得上清液,通过生化分析仪测定上清液中Ig...目的:研究Fe^(3+)和Cys对CHO细胞表达免疫球蛋白G(IgG)电荷异构体比例的影响。方法:在补料分批培养外泌表达IgG的CHO细胞株中,以不同的策略单独或联合添加不同浓度的Fe^(3+)或Cys;培养14 d后离心得上清液,通过生化分析仪测定上清液中IgG的含量,利用Protein A MagBeads亲和纯化该抗体,通过糖基化修饰、阳离子亲和层析(CEX)、非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(nrCE-SDS)、硼酸亲和层析(BAC)及疏水相互作用色谱(HIC)进行鉴定。结果:Fe^(3+)的添加可提高IgG酸性异构体比例,并且Cys可增强Fe^(3+)的提升效果,仅添加Cys对酸性异构体的比例没有影响;电荷异构体表征表明酸性异构体含量提高主要源于唾液酸修饰、片段、Fc段氨基酸位点氧化修饰以及糖化水平的增加。结论:Fe^(3+)与Cys通过提高唾液酸修饰、片段的丰度、糖化水平以及某些氨基酸位点的氧化,导致IgG酸性异构体比例显著增加。展开更多
文摘目的:研究Fe^(3+)和Cys对CHO细胞表达免疫球蛋白G(IgG)电荷异构体比例的影响。方法:在补料分批培养外泌表达IgG的CHO细胞株中,以不同的策略单独或联合添加不同浓度的Fe^(3+)或Cys;培养14 d后离心得上清液,通过生化分析仪测定上清液中IgG的含量,利用Protein A MagBeads亲和纯化该抗体,通过糖基化修饰、阳离子亲和层析(CEX)、非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(nrCE-SDS)、硼酸亲和层析(BAC)及疏水相互作用色谱(HIC)进行鉴定。结果:Fe^(3+)的添加可提高IgG酸性异构体比例,并且Cys可增强Fe^(3+)的提升效果,仅添加Cys对酸性异构体的比例没有影响;电荷异构体表征表明酸性异构体含量提高主要源于唾液酸修饰、片段、Fc段氨基酸位点氧化修饰以及糖化水平的增加。结论:Fe^(3+)与Cys通过提高唾液酸修饰、片段的丰度、糖化水平以及某些氨基酸位点的氧化,导致IgG酸性异构体比例显著增加。
